胡 婷 劉博文* 張 華 吳 瓊 周 波 盧天航 崔德鳳** 張永紅**

(1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，獸醫(yī)學(xué)(中醫(yī)藥)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，保定071000；3.中牧實(shí)業(yè)股份有限公司，北京100070)

腸道是機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和免疫調(diào)節(jié)的重要器官[1]，是維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境正常的重要屏障[2]，腸道屏障功能的完整直接關(guān)系到動(dòng)物的健康狀況，而腸道黏膜通透性指標(biāo)的檢測則能直接反映出腸道屏障功能的狀況。蛋雛雞在幼齡期腸道菌群系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)尚未完全建立，很容易受到營養(yǎng)和環(huán)境應(yīng)激等因素影響，導(dǎo)致腸道屏障損傷，大量的細(xì)菌和毒素穿過胃腸黏膜進(jìn)入血液，致使腸道局部或整個(gè)機(jī)體細(xì)胞因子失衡，免疫機(jī)能下降，造成腸道菌群紊亂，消化吸收功能下降，激活Toll樣受體4(TLR4)炎癥通路，引發(fā)各種腸道炎癥性疾病，因此育雛期是腸道發(fā)育和微生物定植的關(guān)鍵時(shí)期[3]。益生菌在保衛(wèi)腸道健康中扮演重要角色[4]。蔣磊等[5]在1日齡肉雞飼糧中添加30 mg/kg的凝結(jié)芽孢桿菌制劑，發(fā)現(xiàn)49日齡時(shí)的終體重、平均日增重(ADG)均呈上升趨勢。邢冠潤[6]的試驗(yàn)表明，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可提高產(chǎn)蛋雞腸道健康，顯著降低血清D-乳酸(D-Lac)含量及二胺氧化酶(DAO)活性，提高小腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量。凝結(jié)芽孢桿菌能改善動(dòng)物機(jī)體腸道菌群結(jié)構(gòu)，修復(fù)受損的腸道屏障，提高機(jī)體免疫力和抗病力，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)代謝和利用的能力，促進(jìn)生長。從各種文獻(xiàn)中可以得出凝結(jié)芽孢桿菌的作用在肉雞和產(chǎn)蛋雞中的研究較多，而對(duì)1～30日齡的蛋雛雞的研究較少。因此，本試驗(yàn)使用實(shí)驗(yàn)室提取并驗(yàn)證后制成的凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI菌粉，檢測其對(duì)1～30日齡蛋雛雞生長性能、腸道黏膜通透性及TLR4信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)和蛋白表達(dá)，旨在探究凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞的促生長作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI(北京農(nóng)學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室)，IX-711型顯微鏡(日本OLYMPUS)，SN-354型酶標(biāo)儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)，Step one-Plus型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國賽默飛公司)，Lodigit型WB凝膠成像儀(上海天能科技有限公司)，DAO酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)，D-Lac ELISA檢測試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)，SIgA ELISA檢測試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)，白細(xì)胞介素-10(IL-10)ELISA檢測試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取1日齡、初始體重(約0.55 kg)相近的京紅蛋雛雞288只，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只，重復(fù)之間體重接近?？瞻捉M(CON組)飼喂基礎(chǔ)飼糧(基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1)，連續(xù)灌服生理鹽水；益生菌低、中、高劑量組飼喂基礎(chǔ)飼糧，同時(shí)分別連續(xù)灌胃濃度為106、107、108CFU/mL的凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI，各1 mL,分別記為LOW、MID、HIGH組，飼養(yǎng)周期為28 d。蛋雛雞自由采食，充分飲水，按正常免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.3 檢測指標(biāo)

1.3.1 生長性能

于飼喂第1、2、3、4周，對(duì)空白組和益生菌組的蛋雛雞進(jìn)行稱重。稱重前1 d晚上禁食，自由飲水。每日稱量給料重量，次日加料前，對(duì)剩余飼糧進(jìn)行稱重。分別計(jì)算蛋雛雞的平均日采食量(ADFI)、ADG和料重比(F/G)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.3.2 腸道組織結(jié)構(gòu)

取第2、4周蛋雛雞進(jìn)行剖檢，每組18只，采集蛋雛雞的十二指腸、空腸和回腸腸道組織，每段約5 cm，采集后用4%多聚甲醛進(jìn)行固定24 h，制備組織切片、蘇木精-伊紅(HE)染色，測量不同腸道的絨毛長度與隱窩深度，計(jì)算腸道絨隱比。

絨毛長度：取絨毛頂部到底部的距離，每個(gè)樣本切片取6個(gè)值，最后算其平均值。

隱窩深度：腸腺最底部與2個(gè)絨毛開口之間的距離，每個(gè)樣本切片取6個(gè)值，最后算其平均值。

絨隱比=絨毛長度/隱窩深度。

1.3.3 血清中DAO活性及D-Lac和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量

取第1、4周蛋雛雞，每組18只，心臟采血3～4 mL，室溫放置至少0.5 h，3 000 r/min離心10 min，吸取上層血清(注意不要吸到下面的沉淀)轉(zhuǎn)移到1.5 mL滅菌的EP管中， ELISA試劑盒測定血清中DAO活性及D-Lac和TNF-α含量。

1.3.4 空腸黏膜黏液蛋白2(MUC2)和緊密連接蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量及SIgA和IL-10含量

取第1、4周蛋雛雞，每組18只，空腸縱向剖開，用0.9%生理鹽水緩慢沖去食糜，避免將腸絨毛沖掉，用消毒后的無齒鑷沿同一方向輕輕刮取黏膜，裝入EP管中，用ELISA試劑盒測定空腸黏膜中SIgA和IL-10含量，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法測定黏膜中MUC2、閉合蛋白(Occludin)和閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)mRNA相對(duì)表達(dá)量，具體引物信息見表2。擴(kuò)增體系25 μL：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ 12.5 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA 5 μL，ddH2O 5.5 μL。采取二步法擴(kuò)增：預(yù)變性95 ℃ 10 min；擴(kuò)增95 ℃ 15 s；退火溫度為56 ℃，20 s，共40個(gè)循環(huán)；熔解曲線，55～95 ℃，溫度以0.3 ℃/s速度提升。以磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計(jì)算mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表2 引物信息

1.3.5 空腸黏膜TLR4信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量與蛋白表達(dá)量

空腸黏膜樣品采集同1.3.4，分別用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)的方法測定蛋雛雞空腸黏膜TLR4信號(hào)通路中TLR4、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量，具體引物信息見表2，熒光定量步驟同1.3.4。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用GraphPad Prism 7.00軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，用t檢驗(yàn)分析差異顯著性，P>0.05為無顯著差異，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI的鑒定

菌粉復(fù)壯培養(yǎng)后經(jīng)純度檢驗(yàn)符合凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI的特征，菌落表面凸起，呈白色透明的圓形，革蘭氏染色呈藍(lán)紫色、革蘭氏陽性，菌體呈桿狀、純度單一，見圖1。

2.2 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛生長性能的影響

在試驗(yàn)過程中，蛋雛雞的死淘率很低，僅在中劑量組共計(jì)死亡2只。由表3、表4、表5可知，飼喂不同劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI，ADFI隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長呈上升趨勢，但與CON組無顯著差異(P>0.05)。前3周時(shí)，飼喂凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI的蛋雛雞ADG有增長，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，未顯著降低F/G(P>0.05)；第4周時(shí)，與CON組相比，凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI極顯著提高了蛋雛雞ADG(P<0.01)，極顯著降低F/G(P<0.01)，以1×108CFU/mL濃度效果最明顯。

圖A：菌落形態(tài)；圖B：革蘭氏染色。Figure A: colony morphology; figure B: Gram staining.

2.3 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞腸道結(jié)構(gòu)的影響

由表6可知，與CON組相比，第2周時(shí)，低劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著提高十二指腸絨隱比(P<0.05)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI極顯著提高十二指腸絨隱比(P<0.01)，顯著提高回腸絨隱比(P<0.05)；3個(gè)劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI均顯著提高空腸絨隱比(P<0.05)；第4周時(shí)，中劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著提高十二指腸、回腸絨隱比(P<0.05)；中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著提高空腸絨隱比(P<0.05)。

2.4 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞血清中DAO活性及D-Lac、TNF-α含量的影響

由表7可知，與CON組相比，第4周時(shí)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著降低蛋雛雞血清中DAO的活性(P<0.05)；第1周時(shí)，低、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著降低蛋雛雞血清中D-Lac的含量(P<0.05)；第4周時(shí)，凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著降低蛋雛雞血清中D-Lac的含量(P<0.05)；第1周和第4周時(shí)，高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI極顯著降低蛋雛雞血清中TNF-α含量(P<0.01)，隨著雛雞飼養(yǎng)時(shí)間的增加，血清中TNF-α含量有增加的趨勢。

表3 蛋雛雞平均日采食量

表4 蛋雛雞平均日增重

表5 蛋雛雞料重比

表6 蛋雛雞腸道絨隱比

表7 蛋雛雞血清中DAO活性及D-Lac、TNF-α含量

2.5 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞空腸黏膜黏液蛋白和緊密連接蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖2、圖3、圖4可知，與CON組相比，第1周時(shí)，低劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以顯著上調(diào)空腸黏膜中MUC2的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以極顯著提高其mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.01)；第4周時(shí)，3個(gè)劑量均可以極顯著提高空腸黏膜中MUC2的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.01)。與CON組相比，在第1周、第4周時(shí)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI均能極顯著提高蛋雛雞空腸黏膜中Occludin的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.01)。與CON組相比，第1周時(shí)，低劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以顯著提高空腸黏膜中ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)，高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以極顯著提高空腸黏膜中ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.01)；第4周時(shí)，低劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以顯著提高空腸黏膜中ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以極顯著上調(diào)空腸黏膜中ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.01)。

與空白組相比，“*”為P<0.05；“**”為P<0.01；無標(biāo)注為差異不顯著(P>0.05)。下圖同。

圖3 蛋雛雞空腸黏膜中Occludin的mRNA相對(duì)表達(dá)量

圖4 蛋雛雞空腸黏膜中ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量

2.6 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)空腸黏膜免疫的影響

由表8可知，與CON組相比，第1周時(shí)，低、中劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以顯著提高空腸黏膜中SIgA的含量(P<0.05)，3種劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)空腸黏膜中IL-10含量的上調(diào)作用不顯著(P>0.05)；第4周時(shí)，中劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI可以顯著提高空腸黏膜中SIgA的含量(P<0.05)，中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能極顯著提高空腸黏膜中IL-10的含量(P<0.01)。

2.7 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)TLR4信號(hào)通路的影響

由圖5、圖6可知，與CON組相比，凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能降低空腸黏膜中TLR4的mRNA相對(duì)表達(dá)量以及蛋白表達(dá)量，但效果不顯著(P>0.05)；中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能極顯著降低蛋雛雞空腸黏膜中NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量以及蛋白表達(dá)量(P<0.01)。

3 討 論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞生長性能的影響

生長性能代表動(dòng)物機(jī)體對(duì)食物的消化、吸收能力，既是食物對(duì)動(dòng)物體生理功能的體現(xiàn)，也是動(dòng)物生長、發(fā)育情況的直觀表現(xiàn)[7]，因此生長性能在動(dòng)物健康中至關(guān)重要。畜禽的ADFI、ADG和F/G是能夠反映益生菌在實(shí)際應(yīng)用中真正作用的有效指標(biāo)[8]。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌在畜禽的生長方面起著重要作用，因此其作為添加劑越來越常見。王乙茹等[9]研究表明，飼糧中添加1.0×107CFU/t的凝結(jié)芽孢桿菌后，1日齡的健康A(chǔ)A肉雞比正常飼喂飼糧組ADG顯著增加；Khajeh等[10]發(fā)現(xiàn)，飼喂肉雞100 mg/kg的凝結(jié)芽孢桿菌能顯著提高肉雞的ADG，降低F/G，最終體重也達(dá)高水平，從而使肉雞的生長性能得到有效的改善；李樹鵬[11]飼喂1日齡海蘭蛋雛雞芽孢桿菌(活菌數(shù)≥1×1010CFU/g)會(huì)顯著提高其全期增重以及顯著降低F/G。從本試驗(yàn)結(jié)果也可以證明凝結(jié)芽孢桿菌的促生長作用：低、中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI均能提高蛋雛雞ADF，降低F/G，這種促進(jìn)作用在試驗(yàn)后期表現(xiàn)地更為顯著。凝結(jié)芽孢桿菌在腸道中定植時(shí)會(huì)間接提高消化酶的活性[12]，加快對(duì)飼糧成分的降解，增加腸道蠕動(dòng)，提高動(dòng)物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，促進(jìn)動(dòng)物的生長發(fā)育。

表8 蛋雛雞空腸黏膜中SIgA和IL-10含量

圖5 蛋雛雞空腸黏膜中TLR4、NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞腸道結(jié)構(gòu)的影響

有研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌可促進(jìn)腸絨毛發(fā)育，增強(qiáng)腸絨毛蠕動(dòng)能力，緩解應(yīng)激和感染造成的腸道損傷，增強(qiáng)腸道消化吸收和屏障功能[13]。腸道絨隱比能反映出腸道蠕動(dòng)的強(qiáng)弱，比值越大，腸道蠕動(dòng)越快，反之蠕動(dòng)效果不佳[8]。孫煥林等[13]研究發(fā)現(xiàn)，凝結(jié)芽孢桿菌可通過增加黃羽肉雞的腸道絨隱比來提高腸道吸收作用。王政等[14]發(fā)現(xiàn)，飼糧添加凝結(jié)芽孢桿菌可以緩解氧化應(yīng)激導(dǎo)致的白羽肉雞空腸損傷，增加絨毛長度和絨隱比。宮秀燕[15]研究表明，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可提高肉雞空腸絨隱比，增加杯狀細(xì)胞數(shù)量，抵抗沙門氏菌的感染。謝麗曲等[16]研究表明，飼糧添加凝結(jié)芽孢桿菌能顯著提高肉鴨十二指腸絨毛高度以及絨隱比。由于試驗(yàn)第1周腸道絨毛生長較不完整，因此生長到第2周時(shí)取樣檢測，本研究結(jié)果與上述研究結(jié)論一致，飼喂凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI顯著提高各腸段的絨隱比，增強(qiáng)腸道蠕動(dòng)。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞空腸中黏液蛋白和緊密連接蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

益生菌能夠促進(jìn)腸上皮細(xì)胞分泌大量黏液，從而增加黏液層厚度以及黏液蛋白的含量，通過與腸道致病菌占位競爭更好地黏附在腸上皮細(xì)胞，從而增強(qiáng)腸屏障的保護(hù)功能[17]。緊密連接對(duì)腸道通透性的大小也起著至關(guān)重要的作用，其與腸上皮細(xì)胞之間平衡是保障腸道上皮結(jié)構(gòu)完整的前提[18]，益生菌通過增強(qiáng)自身與腸道表面特異性受體結(jié)合的競爭力，降低病原菌的結(jié)合位點(diǎn)來保護(hù)和增加緊密連接。吳昌征等[19]在蛋雞飼糧中添加不同劑量的益生菌均可顯著提高空腸黏膜緊密連接蛋白Occludin和ZO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量，且具有劑量依賴性。本研究發(fā)現(xiàn)不同濃度凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)空腸黏膜中的MUC2、Occludin和ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量均有不同程度的提高，尤其在第4周的時(shí)候效果更顯著，因此，凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能夠增強(qiáng)蛋雛雞的腸道屏障作用，減少有害物質(zhì)侵襲。

3.4 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)蛋雛雞血清中DAO活性和D-Lac含量的影響

D-Lac和DAO是檢測胃腸黏膜損傷的主要指標(biāo)。D-Lac是哺乳動(dòng)物腸道多種細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，腸道健康時(shí)無法被利用；DAO則是哺乳動(dòng)物腸黏膜上層絨毛中的細(xì)胞內(nèi)酶，其活性很高，正常情況下存在于腸道中，其他組織中不易見[20]。雷凱[21]的試驗(yàn)證明地衣芽孢桿菌能顯著降低血清中D-Lac含量和DAO活性，從而降低腸道通透性，改善腸道健康。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能顯著降低蛋雛雞血清中DAO活性和D-Lac的含量，從而降低腸道通透性，減少腸黏膜損傷。

圖6 蛋雛雞空腸黏膜中TLR4、NF-κB的蛋白表達(dá)量

3.5 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)空腸黏膜免疫的影響

細(xì)胞因子在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，其中TNF-α是主要的促炎細(xì)胞，IL-10則是重要的抑炎因子。大量的TNF-α損壞腸上皮細(xì)胞，增加通透性，促使黏膜層的中性粒細(xì)胞大量分泌，在趨化因子的作用下向炎癥部位聚集，進(jìn)而加重腸道炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腸黏膜受損嚴(yán)重[22]。IL-10的主要作用是抑制炎癥細(xì)胞的活化，減少細(xì)胞因子的產(chǎn)生，避免炎癥的發(fā)生，其還可以抑制白細(xì)胞聚集產(chǎn)生炎癥因子和細(xì)胞黏附因子，從而避免更多的炎癥因子向炎癥部位聚集，降低炎癥產(chǎn)生幾率[23]。當(dāng)腸道發(fā)生炎癥時(shí)，會(huì)激活腸道免疫系統(tǒng)。SIgA是存在于腸道黏膜固有層漿細(xì)胞產(chǎn)生的主要免疫效應(yīng)因子，是腸上皮細(xì)胞抵御病原菌入侵的重要防線[24]。當(dāng)腸道組織受到抗原刺激后，激活腸道免疫應(yīng)答，產(chǎn)生大量SIgA與抗原結(jié)合，從而降低病原體在腸道中黏附和定植的能力，保護(hù)腸道黏膜免受病原菌的損害[25]。王婷婷等[26]對(duì)大腸桿菌感染的小鼠飼喂嗜酸乳桿菌和瑞士乳桿菌，從而探究小鼠腸道黏膜免疫的變化情況，結(jié)果顯示，補(bǔ)充益生菌可顯著促進(jìn)腸道組織分泌大量SIgA，提高黏膜免疫功能，從而加強(qiáng)腸道屏障功能。在本試驗(yàn)中，凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能極顯著降低血清中TNF-α的含量，提高空腸黏膜SIgA和IL-10的含量，從而提高蛋雛雞的免疫作用以達(dá)到凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI增強(qiáng)蛋雛雞的腸道健康作用。

3.6 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI對(duì)TLR4信號(hào)通路的影響

Toll樣受體(TLRs)/NF-κB信號(hào)通路調(diào)節(jié)炎癥和疼痛相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[27]。TLRs廣泛分布在腸道的各種上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞表面，其中Toll樣受體2(TLR2)和TLR4與腸道菌群密切相關(guān)[28]。在生理?xiàng)l件下，TLRs對(duì)正常菌群無反應(yīng)，表現(xiàn)為“安靜”狀態(tài)，這可能是自然選擇和長期進(jìn)化共同作用的結(jié)果，最終導(dǎo)致TLRs對(duì)某些菌群不出現(xiàn)任何應(yīng)答或有較低水平的應(yīng)答[29]。益生菌能抑制TLRs/NF-κB信號(hào)通路，但正常情況下效果不是特別顯著。在TLR4信號(hào)通路發(fā)揮作用時(shí)，其蛋白的磷酸化反應(yīng)更能代表此通路被激活，因此選擇用磷酸化的NF-κB的變化更能反映出TLR4/NF-κB信號(hào)通路的作用機(jī)制。蒲俊寧[30]的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)正常情況下斷奶仔豬空腸黏膜中TLR4信號(hào)通路的抑制作用不顯著，而NF-κB的降低可能與烯脂酰還原酶1(MOD1)信號(hào)通路有關(guān)。本試驗(yàn)中飼喂蛋雛雞不同劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能降低其空腸黏膜中TLR4 mRNA相對(duì)表達(dá)量以及蛋白表達(dá)量，但效果不顯著；而中、高劑量凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能顯著降低蛋雛雞空腸黏膜中NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)里及磷酸化NF-κB蛋白表達(dá)量，可能的原因是正常情況下凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI降低NF-κB的表達(dá)不是經(jīng)過TLR4/NF-κB信號(hào)通路的，此結(jié)果需另探究。

4 結(jié) 論

① 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI能顯著提高蛋雛雞的ADG，降低F/G。

② 凝結(jié)芽孢桿菌BC-HYI通過降低血清中的DAO活性及D-Lac和TNF-α含量，增強(qiáng)空腸黏膜的MUC2、Occludin、ZO-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量，提高空腸黏膜SIgA和IL-10的含量來增加免疫力，降低腸道通透性，提高蛋雛雞的生長性能。