林婷婷，吳 丹，陳麗平

(高州市人民醫(yī)院婦科一區(qū)，廣東 高州 525200)

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的一種疾病，高風(fēng)險的人乳頭瘤病毒(HPV)是宮頸癌病變的重要原因，進(jìn)行綜合預(yù)防策略能夠有效防治宮頸癌[1]。盡管HPV疫苗已被應(yīng)用于臨床，有組織的宮頸癌篩查仍然是降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率的最有效措施之一[2]。HPV檢測和液基細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查是最常見的兩種宮頸癌篩查方法，后者容易受到操作人員的技術(shù)和經(jīng)驗影響，使得其臨床應(yīng)用受到一定的限制[3-4]。本研究對HPV E6/E7 mRNA檢測在宮頸癌病變分流診斷中的應(yīng)用進(jìn)行分析，旨在探究其在宮頸癌病變篩查中的臨床應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1一般資料：以2019年6月～2020年12月在我院就診或篩查的女性62例為研究對象，患者年齡21～65歲，平均(43.52±11.85)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①進(jìn)行TCT檢查后經(jīng)陰道鏡及活檢確診宮頸病變等級；②均進(jìn)行HPV檢測；③對研究內(nèi)容知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期女性；②并發(fā)其他腫瘤疾?。虎塾袑m頸疾病病史；④并發(fā)自身免疫性疾??；⑤正在接受免疫調(diào)節(jié)劑治療。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2方法:以采樣器收集宮頸細(xì)胞樣本，經(jīng)ThinPrep液基細(xì)胞學(xué)制片系統(tǒng)和閱片系統(tǒng)(豪洛捷醫(yī)療科技有限公司)進(jìn)行TCT檢查，參照Bethesda系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)(2001年)判定結(jié)果，實驗操作和閱片均由經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員完成。取所有研究對象的陰道活檢組織樣本，由病理科專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行病理制片和結(jié)果判定，分為浸潤癌、高級別病變、低級別病變、正常/炎性反應(yīng)，活檢結(jié)果為最終診斷標(biāo)準(zhǔn)。

使用HPV E6/E7 mRNA檢測試劑盒(支鏈DNA信號擴增法，鄭州科蒂亞生物技術(shù)有限公司)對取得的宮頸細(xì)胞樣本中的HPV感染情況進(jìn)行定量檢驗，根據(jù)檢驗結(jié)果將患者分為高病毒載量組(RLU/CO≥20.00)、中病毒載量組(20.00≥RLU/CO≥5.00)、低載量組(5.00≥RLU/CO≥1.00)、陰性組(RLU/CO<1.00)，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法:使用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示，進(jìn)行χ2檢驗，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1TCT和HPV E6/E7 mRNA的檢出情況分析:組織活檢結(jié)果中浸潤癌患者5例(8.06%)，高級別病變患者23例(37.10%)，低級別病變患者21例(33.87%)，正常/炎性反應(yīng)患者13例(20.97%)；TCT檢查中無上皮內(nèi)病變或惡性病變(NILM)20例(32.26%)，ASC 23例(37.10%)，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)10例(16.13%)，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)9例(14.52%)；HPV E6/E7 mRNA陽性患者43例(69.35%)，陰性患者19例(30.65%)。TCT和HPV E6/E7 mRNA檢測在不同分級的宮頸病變患者中的陽性檢出情況間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，兩種方法的檢測陽性率間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.580，P<0.001)。見表1。

表1 TCT和HPV E6/E7 mRNA的檢出情況分析(n,n=62)

2.2HPV E6/E7 mRNA檢測方法在宮頸病變不同分級中的結(jié)果分析：62例患者中，HPV病毒高載量患者13例(20.97%)，中載量患者14例(22.58%)，低載量患者16例(25.81%)，陰性患者19例(30.65%)，浸潤癌和高級別病變組患者中病毒高、中載量占比最高，低級別病變和正常/炎性反應(yīng)組患者中病毒低載量和陰性占比最高，高載量、中載量、低載量和陰性組患者的宮頸病變分級間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 HPV E6/E7 mRNA檢測方法在宮頸病變不同分級中的結(jié)果分析(n)

3 討論

宮頸癌是嚴(yán)重威脅和影響女性健康的生殖道惡性腫瘤之一，其全球范圍內(nèi)的死亡率和發(fā)病率僅低于乳腺癌，位于惡性婦科腫瘤第2位，宮頸癌的國內(nèi)發(fā)病率為8.98，死亡率為2.13，治愈率和預(yù)后均較差，開展更全面的篩查、預(yù)防和治療對于降低其發(fā)病率意義重大[5]。宮頸病變發(fā)展為癌癥需要長達(dá)十年左右，病程進(jìn)展緩慢，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)能夠有效降低死亡率，改善預(yù)后。研究顯示HPV慢性持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，可通過性接觸進(jìn)行傳播，國內(nèi)HPV患病率超過15%，受到所處地區(qū)的影響，其中高危型感染是低危型的4倍[6]。

細(xì)胞學(xué)檢查用于宮頸癌前病變篩查，以其無創(chuàng)、可分離出標(biāo)本中的炎性細(xì)胞、血液和黏液，結(jié)果更為清晰，代替?zhèn)鹘y(tǒng)涂片染色方法，顯示出更好的陽性診斷率，臨床上得到廣泛應(yīng)用[7]。HPV感染宮頸上皮細(xì)胞后將其E6/E7基因整合至宿主細(xì)胞基因組中，受環(huán)境影響轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)生E6/E7癌蛋白，抑制抑癌蛋白PRb和P53的活性，繼而引發(fā)癌變，因此對E6/E7 mRNA進(jìn)行檢測可反映其表達(dá)水平和病變程度，有研究顯示E6/E7 mRNA是宮頸癌病變分流診斷中的有效手段[8]。本研究以組織病理學(xué)檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對上述兩種方法用于宮頸癌檢測的結(jié)果進(jìn)行分析，在不同宮頸病變分級患者中的檢測陽性率顯示出明顯差異，E6/E7 mRNA檢測陽性率顯著高于TCT，與之前的報道[9]一致。

有研究顯示首次檢測時的病毒載量是持續(xù)感染的主要影響因素之一，病變嚴(yán)重程度與HPV高危型病毒載量正相關(guān)[10]。本研究對不同病毒載量進(jìn)行分組，結(jié)果顯示高、中、低載量和陰性患者的宮頸病變分級間的差異有顯著性意義，可能與高病毒載量影響免疫微環(huán)境，促進(jìn)宮頸病變病理進(jìn)程有關(guān)，提示對患者感染HPV的病毒載量進(jìn)行檢測有利于識別高危女性的病情進(jìn)展，可用于臨床分流診斷。趙涌等的研究[11]顯示E6/E7 mRNA的最佳截斷值為1.365，為其用于臨床分流診斷提供參考閾值，本研究中未對患者進(jìn)行長期隨訪，不能確定病毒載量對病變預(yù)后的影響，后續(xù)可對此進(jìn)行進(jìn)一步探討。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA檢測在不同宮頸病變分級患者中顯示出良好的檢測陽性率，病毒載量與宮頸病變嚴(yán)重程度相關(guān)，臨床上可用于宮頸癌病變的分流診斷。