賀佳佳，易 睿，趙 迪，陸 康，吳詩宇，劉冠蘭

(長沙醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410219)

檳榔原產(chǎn)于馬來西亞，我國主產(chǎn)于海南島、臺灣地區(qū)、云南河口及西雙版納熱帶雨林間，廣西、廣東和福建也有少量分布[1]。檳榔堿是檳榔眾多化學(xué)成分中含量最多的生物堿，其含量達(dá)到0.30%～0.63%[2]。近年來國內(nèi)外眾多學(xué)者對檳榔堿在藥理、生理等方面進(jìn)行了深入研究，闡述了其對人體及動物的致口腔黏膜下纖維性病變、生殖系統(tǒng)毒性、神經(jīng)系統(tǒng)毒性及促進(jìn)胃腸道消化作用、驅(qū)蟲滅螺作用、抑菌作用等[3]。檳榔堿作為可食用檳榔的主要化學(xué)成分，其在口腔黏膜損傷方面有非常多的研究，而對于胃黏膜損傷方面研究較為少見。本文主要?dú)滗逅釞壚茐A在胃黏膜損傷的防治與修復(fù)過程中的作用效果，并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物和分組：SPF級SD大鼠50只(由本校實(shí)驗(yàn)動物中心提供)，雌雄各半，體重230～250 g，常規(guī)飼養(yǎng)。隨機(jī)分為五組，每組10只，分別為空白對照組、生理鹽水對照組、氫溴酸檳榔堿低劑量組、氫溴酸檳榔堿中劑量組及氫溴酸檳榔堿高劑量組(分別給予11 mg/kg、22 mg/kg、44 mg/kg氫溴酸檳榔堿)[4]。本次研究符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會的所有規(guī)定。

1.2主要試劑：溴酸檳榔堿(純度98%)，規(guī)格：1 g/瓶，CAS號：300-08-3(成都埃法生物技術(shù)有限公司)；胃蛋白酶測試試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20190506)；100%乙酸(長沙醫(yī)學(xué)院科研中心)；0.9%NaCl注射液(250 ml/袋，山東齊都藥業(yè)有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1檢測對大鼠胃潰瘍模型的影響

1.3.1.1造模與給藥：參照文獻(xiàn)復(fù)制實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型[5]。各組大鼠禁食不禁水24 h后，對生理鹽水對照組及氫溴酸檳榔堿低、中、高劑量組進(jìn)行造模。用50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定在手術(shù)臺上，腹部備皮消毒，鋪無菌洞巾，于劍突下切開腹壁約2 cm，輕取出胃，在胃前壁胃竇部漿膜下近肌層處用1 ml注射器注入100%乙酸30 μl，待注射部位出現(xiàn)直徑約3 mm的半透明白斑即判定為胃潰瘍模型復(fù)制成功。將胃還納入腹腔歸位，縫合傷口，無菌消毒。常規(guī)喂養(yǎng)3 d，于第4天開始，各組按照上述方法和劑量每天在同一時間灌胃，空白對照組正常給水，生理鹽水對照組給0.9%生理鹽水，其他三組給不同濃度氫溴酸檳榔堿治療，連續(xù)治療7 d。

1.3.1.2取材與檢測:各組大鼠收集胃液后處死動物，所有動物均采取活體固定法處死。剖腹取出胃，沿胃大彎剪開胃，用蒸餾水洗去胃內(nèi)容物，平鋪于白色手術(shù)盤中，觀察并用游標(biāo)卡尺測量潰瘍大小。之后取胃竇部組織進(jìn)行后固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察胃黏膜的病理變化：潰瘍長徑>1 mm，直接測量長度，每1毫米計1分；若寬徑>1 mm，則計分翻倍；若長寬徑都<1 mm，按照潰瘍點(diǎn)計分，每點(diǎn)計0.5分。每只動物潰瘍累計總分計為潰瘍指數(shù)1、2、3、4、5。計算潰瘍抑制率，潰瘍抑制率=(對照組潰瘍指數(shù)-氫溴酸檳榔堿組潰瘍指數(shù))/對照組潰瘍指數(shù)×100%。

1.3.2檢測對胃酸和胃蛋白酶活性的影響:各組大鼠末次給藥前12 h禁食不禁水，給藥后2 h用50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定與手術(shù)臺上，剖開上腹部。從幽門端切一小口，向胃內(nèi)插入一直徑2.5 mm的塑料管,并于幽門環(huán)處用絲線結(jié)扎固定，以收集胃液。用輸液器(剪去針頭)的塑料管從口腔經(jīng)食道插入胃，于食道近賁門處結(jié)扎固定；將0.9%NaCl注射液以10 ml/h的滴速進(jìn)行胃內(nèi)灌流。收集30 min洗出液，離心10 min(3 000 r/min)，用于測量游離酸、總酸、胃蛋白酶活性。胃酸測定采用酸堿中和滴定法，胃蛋白酶活性測定按照試劑盒說明進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1氫溴酸檳榔堿對胃潰瘍的作用效果

2.1.1各組大鼠潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率檢測：游標(biāo)卡尺測得潰瘍面積并計算潰瘍指數(shù)和抑制率顯示：氫溴酸檳榔堿劑量越高則大鼠胃潰瘍指數(shù)越小，潰瘍抑制率越大；氫溴酸檳榔堿高劑量組大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)與對照組比較明顯變小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率比較(n=10)

2.1.2各組大鼠胃組織病理變化：病理切片形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)生理鹽水對照組黏膜損傷嚴(yán)重，黏膜上皮和固有層均出現(xiàn)變性壞死和較大的潰瘍灶；氫溴酸檳榔堿低劑量組胃黏膜依然損傷嚴(yán)重，與生理鹽水對照組差別不大；氫溴酸檳榔堿中劑量組胃黏膜變性壞死有所減輕，潰瘍灶不明顯；氫溴酸檳榔堿高劑量組胃黏膜損傷明顯改善，上皮和固有層都有修復(fù)。結(jié)果見圖1。

2.2氫溴酸檳榔堿對胃分泌物的影響：測定結(jié)果顯示，中高劑量氫溴酸檳榔堿組與對照組比較 胃游離酸量及總酸量都明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；氫溴酸檳榔堿高劑量組與生理鹽水對照組比較，胃蛋白酶的活力明顯變小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理變化比較(HE，×40)

表2 各組大鼠胃游離酸量、總酸量和胃蛋白酶活性比較

3 討論

檳榔堿是可食用檳榔的主要化學(xué)成分，國內(nèi)外對檳榔提取后的氫溴酸檳榔堿有著非常多的研究。有文獻(xiàn)表明，檳榔對代謝及腸胃運(yùn)動[6]、肝、腎等器官和細(xì)胞都會產(chǎn)生一定的影響，如檳榔堿對大鼠腸道中分離的α-淀粉酶有明顯的抑制作用[7]，檳榔堿還可以抑制大鼠離體腎上腺體中兒茶酚胺的釋放[8]。消化性潰瘍是臨床常見病，對其發(fā)病原因和機(jī)制雖有諸多觀點(diǎn)，目前普遍認(rèn)為是多種因素共同作用的結(jié)果，其發(fā)生與致潰瘍因子(胃酸、胃蛋白酶分泌、幽門螺桿菌感染、迷走神經(jīng)亢進(jìn)等)與防御因子(黏液分泌、黏膜抵抗等)之間的平衡被打破有關(guān)。胃在消化食物的過程中，若不能分泌足夠多的黏液，則黏膜就可能會被鹽酸和胃蛋白酶消化，嚴(yán)重時將累及肌層，形成潰瘍；或者胃酸分泌增加，胃蛋白酶活性增強(qiáng)，胃黏膜也會被損傷而發(fā)生潰瘍[9]。本研究把氫溴檳榔堿與胃黏膜損傷的防治與修復(fù)聯(lián)系起來，通過人為建立胃黏膜損傷模型，采用先給藥再造模和先造模再給藥兩種方式，研究不同濃度氫溴檳榔堿在胃黏膜損傷預(yù)防與修復(fù)過程中作用效果；并測定了不同劑量氫溴酸檳榔堿對胃酸及胃蛋白酶分泌的影響，以探討其作用效果的可能機(jī)制。

從氫溴酸檳榔堿對胃潰瘍模型的影響結(jié)果看，發(fā)現(xiàn)氫溴酸檳榔堿劑量越高則大鼠胃潰瘍指數(shù)越小，潰瘍抑制率越大；氫溴酸檳榔堿高劑量組大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)與對照組比較明顯變?。徊±砬衅螒B(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)生理鹽水對照組黏膜損傷嚴(yán)重，黏膜上皮和固有層均出現(xiàn)變性壞死和較大的潰瘍灶；氫溴酸檳榔堿低劑量組胃黏膜依然損傷嚴(yán)重，與生理鹽水對照組差別不大；氫溴酸檳榔堿中劑量組胃黏膜變性壞死有所減輕，潰瘍灶不明顯；氫溴酸檳榔堿高劑量組胃黏膜損傷明顯改善，上皮和固有層都有修復(fù)。這說明高劑量氫溴酸檳榔堿對大鼠胃黏膜潰瘍的修復(fù)有一定的促進(jìn)作用。

從氫溴酸檳榔堿對胃分泌物的影響結(jié)果看，中高劑量氫溴酸檳榔堿組與對照組比較胃游離酸量及總酸量都明顯減少；氫溴酸檳榔堿高劑量組對照組比較，大鼠胃蛋白酶的活力明顯下降。這說明適當(dāng)劑量的氫溴酸檳榔堿能抑制胃酸的分泌，并降低胃蛋白酶的活性。故認(rèn)為，適當(dāng)劑量的氫溴酸檳榔堿能預(yù)防大鼠胃黏膜潰瘍的發(fā)生并促進(jìn)潰瘍的修復(fù)，此作用的可能機(jī)制是其抑制了胃酸的分泌并降低胃蛋白酶的活性。所以減輕了胃黏膜損傷的侵襲因素，對胃黏膜損傷起到了預(yù)防和保護(hù)作用，同時促進(jìn)了大鼠胃黏膜潰瘍后的修復(fù)，有利于胃黏膜損傷的愈合，可為臨床上胃黏膜損傷的防治提供新思路。但是其減少胃酸分泌、抑制胃蛋白酶活力的具體機(jī)制尚不明確，或者氫溴酸檳榔堿對胃黏膜是否還有其他影響還需進(jìn)一步研究。