張美蘭，金仁順，肖 斌，張 璇，張學(xué)武

(1.延邊大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，吉林 延吉 133000;2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院，吉林 延吉 133000)

結(jié)腸癌是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)是Sirtuins 家族成員之一，依賴(lài)于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的組蛋白去乙酰化酶，在體內(nèi)使組蛋白及非組蛋白去乙?；瘏⑴c細(xì)胞凋亡和細(xì)胞衰老等正常生理過(guò)程，近年的研究表明，SIRT1與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，在不同腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起不同作用[2-5]。本文選擇結(jié)腸腺癌組織標(biāo)本，采用免疫組化染色觀察SIRT1在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)，探討其在結(jié)腸癌中的表達(dá)以及與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2008年1月～2010年12月年確診為結(jié)腸腺癌的石蠟組織標(biāo)本58例(包括癌旁組織)為研究對(duì)象。所有組織經(jīng)10%中性甲醛溶液固定24～48 h后常規(guī)脫水、石蠟包埋，進(jìn)行厚3 μm連續(xù)切片，做常規(guī)HE染色和免疫組化染色。58例患者中男35例，女23例，年齡37～82歲，平均66歲。所有病例根據(jù)性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及TNM分期分兩組，TNM分期參照世界衛(wèi)生組織(WHO)腫瘤分類(lèi)及診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。本次研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2免疫組化染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：SIRT1定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，具體判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：按陽(yáng)性細(xì)胞在切片中所占比率，<10%計(jì)0分，11%～50% 計(jì)1分，>50%計(jì)2分；根據(jù)染色強(qiáng)度，未著色為0分，黃色為1分，棕褐色為2分。兩者相乘得出綜合評(píng)分，0分為陰性(-)，1分為弱陽(yáng)性(+)，2～4分為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1SIRT1在結(jié)腸腺癌及癌旁組織中的表達(dá)：SIRT1在結(jié)腸腺癌和癌旁組織中陽(yáng)性率分別為43.1%和6.9%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在高分化腺癌中，SIRT1在胞質(zhì)和胞核均有表達(dá)，但在低分化腺癌中SIRT1主要表達(dá)于細(xì)胞核，僅有1例胞質(zhì)也有表達(dá)，另外發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異型性越大，染色越強(qiáng)。在部分腺腔內(nèi)分泌物中也觀察到SIRT1的表達(dá)。見(jiàn)圖1、圖2、表1。

圖1 SIRT1在高分化腺癌細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)(Envision，×400)

表1 SIRT1在結(jié)腸腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)[n(%),n=58]

2.2SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系：SIRT1在結(jié)腸癌中的表達(dá)與患者年齡與腫瘤細(xì)胞的分化程度有關(guān)，與其他因素?zé)o關(guān)。見(jiàn)表2。

圖2 SIRT1在低分化腺癌細(xì)胞核中表達(dá)(Envision，×200)

表2 SIRT1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n,n=58)

3 討論

結(jié)腸腺癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)生除了與遺傳因素有關(guān)外，還與眾多基因的改變和相互作用有關(guān)。SIRT1是依賴(lài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的組蛋白去乙酰化酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[7-8]。研究表明SIRT1在胰腺癌、宮頸癌、卵巢漿液性癌和肝癌等組織中的表達(dá)均高于癌旁正常組織，并與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)，其陽(yáng)性率隨著病變加重而增高，患者預(yù)后較差[9-12]。本研究結(jié)果顯示SIRT1在結(jié)腸腺癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織，同時(shí)在低分化癌中的表達(dá)高于高-中分化癌，并在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期越高其陽(yáng)性率越高，與上述研究結(jié)果相似，提示SIRT1可能參與結(jié)腸癌的發(fā)展過(guò)程，與患者的預(yù)后不良有關(guān)。另外，在本研究還發(fā)現(xiàn)SIRT1在不同分化的結(jié)腸腺癌中其表達(dá)部位不同，即在低分化腺癌中在細(xì)胞核中表達(dá)，且細(xì)胞核異型性越大，染色強(qiáng)度越深，而在高分化腺癌中胞漿、胞核都均有表達(dá)，目前，SIRT1在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)意義尚不很明確。最初研究認(rèn)為SIRT1是一種核蛋白，只在細(xì)胞核中存在，但之后研究發(fā)現(xiàn)SIRT1含有至少兩個(gè)核定位信號(hào)和兩個(gè)核輸出信號(hào)，認(rèn)為SIRT1是一種核質(zhì)穿梭蛋白[13-14]，可以定位于細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)，有研究報(bào)道在肝癌組織中SIRT1在胞質(zhì)中表達(dá)的患者比在細(xì)胞核中表達(dá)的患者預(yù)后良好，可以作為判斷預(yù)后的指標(biāo)，結(jié)果提示SIRT1在結(jié)腸腺癌中表達(dá)部位與腫瘤的分化程度有關(guān)，認(rèn)為SIRT1在核中表達(dá)可作為預(yù)測(cè)預(yù)后指標(biāo)。SIRT1不僅參與腫瘤的發(fā)生，還是衰老相關(guān)的因子，隨著年齡的增長(zhǎng)人體內(nèi)的SIRT1表達(dá)水平會(huì)逐漸降低[15-17]。有研究表明，椎間盤(pán)退變程度越高，其髓核細(xì)胞內(nèi)SIRT1的表達(dá)量越低[18]。本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)與年齡有關(guān)，<60歲的年齡組中的表達(dá)高于>60歲，因此認(rèn)為隨著年齡的增長(zhǎng)SIRT1的表達(dá)可能會(huì)減少。

總之，SIRT1的陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)部位與結(jié)腸腺癌分化程度有關(guān)，即SIRT1陽(yáng)性表達(dá)率越高，同時(shí)在結(jié)腸癌細(xì)胞核中的表達(dá)越高，其惡性程度越高，提示SIRT1在腫瘤中的高陽(yáng)性率及細(xì)胞核中的高表達(dá)，可作為結(jié)腸腺癌患者的不良預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)。