苗明三馬林納彭孟凡劉福宇屈秉聰王 爽

(河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,鄭州 450046)

中醫(yī)藥動(dòng)物模型是指在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下所建立的動(dòng)物模型,通過(guò)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上建立與人類(lèi)疾病病理現(xiàn)象相同或相似的狀態(tài),以便對(duì)相關(guān)疾病進(jìn)行研究[1],其主要目的是服務(wù)于臨床疾病的治療和中藥藥理、毒理的研究[2]。 有關(guān)中醫(yī)模型建立的記載早已有之, 而中醫(yī)動(dòng)物模型的建立始于上世紀(jì)60 年代著名的內(nèi)科學(xué)家鄺安堃先生。 他創(chuàng)造性的建立了可的松致陽(yáng)虛模型,同時(shí)也是世界上第一個(gè)陽(yáng)虛動(dòng)物模型[3]。 從第一個(gè)中醫(yī)藥動(dòng)物模型創(chuàng)立成功至今,中醫(yī)藥動(dòng)物模型的發(fā)展已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。 現(xiàn)今中醫(yī)藥動(dòng)物模型的建立由單純參照西醫(yī)動(dòng)物模型進(jìn)行造模向中醫(yī)與西醫(yī)方法相結(jié)合發(fā)展,由單個(gè)證候模型變?yōu)樽C候與疾病相結(jié)合的模型研究。 中醫(yī)藥動(dòng)物造模已經(jīng)從單個(gè)學(xué)科內(nèi)容向多個(gè)學(xué)科交叉方向發(fā)展,更加規(guī)范化、具體化、科學(xué)化。 當(dāng)前醫(yī)院治療模式以“中西醫(yī)辨病辨證+中西結(jié)合治療”為主,以臨床趨勢(shì)作為實(shí)驗(yàn)性研究的風(fēng)向標(biāo),建立一種科學(xué)、合理,具有高操作性、高可行性、高穩(wěn)定性、高重復(fù)性的中醫(yī)藥動(dòng)物模型是大勢(shì)所趨。 針對(duì)目前中醫(yī)藥動(dòng)物模型的現(xiàn)狀、發(fā)展和應(yīng)用,對(duì)有關(guān)中醫(yī)藥動(dòng)物模型的建立、評(píng)價(jià)、應(yīng)用體系進(jìn)行分析,探討其不足之,以期進(jìn)一步完善中醫(yī)藥動(dòng)物模型。

1 中醫(yī)藥動(dòng)物模型的建立

在中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)以“主題”為搜索前提,以“中醫(yī)藥模型”為檢索詞,設(shè)置時(shí)間范圍“2020 年12月～2011 年 01 月”,排除碩博、會(huì)議、外文文獻(xiàn)、非實(shí)驗(yàn)性文章后,最后納入符合標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)745 篇。 經(jīng)分析,中醫(yī)藥動(dòng)物模型大致可分為3 類(lèi):基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病的動(dòng)物模型、基于中醫(yī)藥理論的動(dòng)物模型、基于中西醫(yī)病癥(證)結(jié)合的動(dòng)物模型。

1.1 基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病建立的動(dòng)物模型

基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病建立的動(dòng)物模型,是指依照所謂西醫(yī)的理論體系、藥物和技術(shù)操作構(gòu)建動(dòng)物模型,使動(dòng)物產(chǎn)生與臨床病人病理表現(xiàn)相近的狀態(tài)。在745 篇文獻(xiàn)中,有532 篇現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性文章,涉及144 種疾病。 選取高頻疾病前12名,并展示其高頻造模方法。 按照西醫(yī)臨床疾病分類(lèi)、進(jìn)行歸納,高頻造模方法舉例見(jiàn)表1。

表1 基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病建立的動(dòng)物模型Table 1 Animal models based on modern medical diseases

雖然此種動(dòng)物模型易獲得國(guó)際社會(huì)的廣泛認(rèn)可,但其發(fā)病機(jī)制與中醫(yī)病因病機(jī)相差較大,檢測(cè)的客觀指標(biāo)與“證”的特異性低、關(guān)聯(lián)性差[4]。

1.2 基于中醫(yī)藥理論建立的動(dòng)物模型

基于中醫(yī)藥理論建立的動(dòng)物模型,是模擬中醫(yī)基礎(chǔ)理論中的致病因素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行造模,使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)與臨床癥候一致的表現(xiàn)。 在745 篇文獻(xiàn)中,中醫(yī)藥理論動(dòng)物模型142 篇,包括中醫(yī)病證和病癥模型45 種。 選取高頻模型前9 種,對(duì)其高頻造模方法,按照中醫(yī)病位和病證進(jìn)行分類(lèi)歸納,高頻造模方法舉例見(jiàn)表2。

表2 基于中醫(yī)藥理論建立的動(dòng)物模型Table 2 Animal model based on traditional Chinese medicine theory

1.3 基于中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)的動(dòng)物模型

近年來(lái),中、西醫(yī)藥從理論到實(shí)踐結(jié)合逐漸緊密,中、西醫(yī)結(jié)合治療在臨床實(shí)踐中效果顯著,而中西醫(yī)疾病的對(duì)照也從一般學(xué)術(shù)專著發(fā)展為醫(yī)學(xué)院校課本[5-6]。 隨之應(yīng)運(yùn)而生了中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型,此模型是將西醫(yī)疾病和中醫(yī)證型、中醫(yī)癥候的指標(biāo)相互對(duì)照并同時(shí)體現(xiàn)在動(dòng)物模型。在745 篇文獻(xiàn)中,符合中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型71 篇。 選取高頻模型前12 種,并將其高頻造模方法(頻次占比≥60%),按照中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)歸納,高頻造模方法舉例見(jiàn)表3。

表3 基于中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)的動(dòng)物模型Table 3 Animal model based on the characteristics of clinical symptoms (syndromes) of traditional Chinese and western medicine

2 中醫(yī)藥動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)

中醫(yī)藥動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)主要分為3 大類(lèi):現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)、中醫(yī)藥證候模型評(píng)價(jià)、中西醫(yī)病癥結(jié)合模型評(píng)價(jià)。

2.1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型的建立多是以形成目標(biāo)疾病的關(guān)鍵性診斷指標(biāo)為造模目的,采用手術(shù)或化藥注射等方式使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)與臨床病人相同、相似的疾病關(guān)鍵指征。 如在糖尿病的臨床診斷中,其核心指標(biāo)是病理性的血糖升高[7]。 在糖尿病動(dòng)物模型中,評(píng)價(jià)糖尿病動(dòng)物模型是否成功的標(biāo)準(zhǔn)也以動(dòng)物的血糖檢測(cè)為主,選用STZ 注射造模,其原理是通過(guò)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-2,將胰島β 細(xì)胞中DNA烷基化,誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生血糖升高的病理現(xiàn)象[8]。 除去血清等檢測(cè)指標(biāo),與臨床病人的表現(xiàn)符合度,也是評(píng)價(jià)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型重要依據(jù)之一,如根據(jù)糖尿病病人臨床多出現(xiàn)“多飲、多食、多尿、體重減少”癥狀,在糖尿病動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中往往也需要監(jiān)測(cè)每日的飲食、飲水、排尿量和體重變化情況[9]。 臨床中腦缺血發(fā)病原因是供應(yīng)腦部血液的動(dòng)脈血管供血不足,引起相應(yīng)腦組織發(fā)生功能性障礙[10]。 而腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭?采用結(jié)扎頸動(dòng)脈方式造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦部缺血的病理現(xiàn)象。 對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的成模評(píng)價(jià)主要以腦神經(jīng)功能評(píng)分和腦部組織染色觀察梗死面積為主要指標(biāo)。 與之相對(duì)照的是臨床中患者初到醫(yī)院就診采用神經(jīng)系統(tǒng)查體對(duì)患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估,此查體在后續(xù)治療過(guò)程中也作為預(yù)后指標(biāo)。 腦部缺血梗死面積多以核磁共振成像進(jìn)行觀察[11]。 哮喘在臨床上表現(xiàn)為哮鳴音亢進(jìn)和呼吸困難、咳嗽等癥狀,是由過(guò)敏原導(dǎo)致氣道多種細(xì)胞炎性浸潤(rùn)的氣道高反應(yīng)疾病[12]。哮喘動(dòng)物模型多以致敏原鼻滴或霧化激發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過(guò)敏反應(yīng),在造模過(guò)程中觀察到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)類(lèi)似臨床患者所表現(xiàn)出的哮鳴音呼吸、頭面部瘙癢則視為造模成功標(biāo)志,后期實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取血清指標(biāo)檢測(cè)IgE 等免疫反應(yīng)指標(biāo)和肺部病理組織進(jìn)行中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞水平觀察[13]。 此類(lèi)模型評(píng)價(jià)多是文獻(xiàn)引用、模式借鑒等,對(duì)于關(guān)鍵性病理指標(biāo)的范圍認(rèn)定還缺少行業(yè)的公認(rèn)。 在使用相同造模方法的不同實(shí)驗(yàn)中,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)對(duì)于關(guān)鍵性病理指標(biāo)的界定不同。

2.2 中醫(yī)藥證候模型評(píng)價(jià)

基于中醫(yī)藥理論建立的動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方法,造模多以中醫(yī)病因病機(jī)理論進(jìn)行造模,如腎陽(yáng)虛造模方法選用房勞法,是以《黃帝內(nèi)經(jīng)》中“入房過(guò)度,汗出浴水,則傷腎”為依據(jù)進(jìn)行造模[14]。 在進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)以中醫(yī)理論中對(duì)于陽(yáng)虛外在表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)價(jià),如根據(jù)動(dòng)物出現(xiàn)倦怠懶動(dòng)[15](“腰者,腎之府,轉(zhuǎn)搖不能,腎將憊矣”)、體形消瘦[16](“腎,在體合骨”)、毛發(fā)稀疏[17](“腎藏精,精生血,發(fā)為血之余”)、體溫下降[18](“陽(yáng)虛則外寒”)等表現(xiàn),則可鑒定為陽(yáng)虛證動(dòng)物模型構(gòu)建成功。 《景岳全書(shū)·泄瀉》[19]:“泄瀉之本,無(wú)不由于脾胃”為依據(jù),又云“大忌苦寒之藥損其脾胃”,大黃性味苦寒,歸胃經(jīng),是苦寒瀉下法常用中藥。 因此脾虛動(dòng)物模型采用灌胃大黃水煎液進(jìn)行建立,在進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)以觀察動(dòng)物出現(xiàn)大便質(zhì)稀(“脾運(yùn)化失司,水谷精微不能布散全身,糟粕不能下達(dá),遂成泄瀉”)、攝食量減少導(dǎo)致體重減輕(不思飲食)、毛發(fā)暗淡稀疏(面色萎黃)、活動(dòng)減少(倦怠懶言)[20]。 胃實(shí)寒的動(dòng)物模型以冰水灌胃法是參照“嗜食生冷,寒邪直中所致陰寒凝滯胃腑”的致病原因所建立的實(shí)驗(yàn)方法,在評(píng)價(jià)時(shí)多參照臨床胃實(shí)寒病人表現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行評(píng)估,如動(dòng)物性情改變(神疲乏力)、爪甲和舌顏色變淡(蒼白無(wú)華)、飲水量減少(不喜冷飲)[21]。 此類(lèi)模型造模的方式過(guò)于依賴動(dòng)物自覺(jué)性,且疾病程度統(tǒng)一性難以控制,成模后對(duì)于模型指標(biāo)的評(píng)價(jià)多依靠實(shí)驗(yàn)觀察者自身的判定,帶有明顯的主觀性,誤差較大。 且對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病理表現(xiàn)多采用組間、組內(nèi)對(duì)比,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類(lèi)、譜系對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度未有較多探討。

2.3 基于中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)的評(píng)價(jià)

中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)的評(píng)價(jià)體系是通過(guò)中、西醫(yī)臨床診斷指標(biāo)進(jìn)行對(duì)照,在經(jīng)由系統(tǒng)評(píng)分來(lái)選取最佳模型。 中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有兩大類(lèi):中醫(yī)評(píng)價(jià)指標(biāo)和西醫(yī)評(píng)價(jià)指標(biāo),占各自權(quán)重100%。 中醫(yī)評(píng)價(jià)部分參照中醫(yī)臨床中“望、聞、問(wèn)、切”,即臨床中“望”病人神、色、形、態(tài)、舌象[22],在動(dòng)物模型中“望”實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毛發(fā)色澤、稀疏程度,反應(yīng)敏捷度、舌下絡(luò)脈等；臨床中“聞”病人聲音和氣味,在動(dòng)物模型中“聞”實(shí)驗(yàn)動(dòng)物叫聲是否孱弱、狂躁,大小便及自身氣味是否異常等；臨床中“問(wèn)”病人主證訴求,在動(dòng)物模型中“問(wèn)”即對(duì)動(dòng)物進(jìn)行觀察,如對(duì)患處的舔舐等[23]；臨床中“切”脈、觸按病人軀體,在動(dòng)物模型中“切”實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脈搏、心率、體重、腹圍等。 中醫(yī)指標(biāo)分為中醫(yī)癥候和中醫(yī)證型兩部分,癥候的成模標(biāo)準(zhǔn)以國(guó)家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):與疾病直接相關(guān)的臨床表現(xiàn)為主證(Ⅰ級(jí)指標(biāo))、與疾病間接相關(guān)的臨床表現(xiàn)、舌象等為次證(Ⅱ級(jí)指標(biāo))作為參照標(biāo)準(zhǔn)[24],中醫(yī)證型則是根據(jù)動(dòng)物的中醫(yī)癥候表現(xiàn)進(jìn)行判定,如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物舌下脈絡(luò)粗大青紫、體溫下降可判斷為血瘀證,詳見(jiàn)表4。 西醫(yī)評(píng)價(jià)指標(biāo)為西醫(yī)疾病診斷標(biāo)準(zhǔn):指標(biāo)以WHO 和中華人民共和國(guó)衛(wèi)健委發(fā)布的西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)如臨床表現(xiàn)、主訴、體格檢查、生化檢查、影像學(xué)檢查、病理檢查為主,以上指標(biāo)按權(quán)重100%對(duì)各指標(biāo)權(quán)重占比進(jìn)行分配。 表中所附的權(quán)重只是相對(duì)值,可根據(jù)具體模型評(píng)價(jià)的特點(diǎn)進(jìn)行適度調(diào)整。

表4 中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)Table 4 Characteristics of clinical symptoms (syndromes) of traditional Chinese and western medicine and evaluation of animal models

此類(lèi)模型評(píng)價(jià)的特點(diǎn)是引入官方(權(quán)威)的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn),較以往單一西醫(yī)或中醫(yī)特點(diǎn)的動(dòng)物模型,中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方式解決了一方評(píng)價(jià)占比過(guò)高,導(dǎo)致另一方的評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)偏失,數(shù)據(jù)參考失真的現(xiàn)象。 在將中西醫(yī)模式結(jié)合互補(bǔ)的同時(shí),利用基因組學(xué)檢測(cè)證候基因表達(dá)譜差異,判斷在不同證型中相關(guān)基因的表達(dá)水平[25],在功能組學(xué)層面研究不同證型中差異性蛋白質(zhì)的表達(dá)水平[26],并在轉(zhuǎn)錄組學(xué)層面結(jié)合癥候的時(shí)間性、空間性后對(duì)中醫(yī)證候開(kāi)展的細(xì)胞、組織轉(zhuǎn)錄及調(diào)控規(guī)律的研究[27],利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的代謝產(chǎn)物如尿液、血液等,研究疾病在產(chǎn)生病理結(jié)果時(shí)與代謝物、代謝通路間的內(nèi)在關(guān)系[24],可進(jìn)行深入的機(jī)制研究。

3 討論和小結(jié)

通過(guò)對(duì)目前較多的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型、中醫(yī)藥理論動(dòng)物模型、中西醫(yī)臨床病癥(證)特點(diǎn)動(dòng)物模型的高頻造模方法和評(píng)價(jià)體系進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié),可以看出,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型應(yīng)用于中醫(yī)藥領(lǐng)域多是研究中藥對(duì)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病的藥效機(jī)制,此類(lèi)型研究最大的不足是無(wú)法體現(xiàn)中醫(yī)藥為指導(dǎo)的治療理念。 中醫(yī)藥理論動(dòng)物模型雖然符合中醫(yī)病因病機(jī),但因無(wú)法解決主觀因素占比過(guò)大的問(wèn)題,一定程度受限。 中西醫(yī)病證(癥)臨床特點(diǎn)的動(dòng)物模型因在傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論和現(xiàn)代疾病研究方面的高關(guān)聯(lián)度和高匹配度而擁有較高的應(yīng)用率,它是指在中醫(yī)“證”的基礎(chǔ)上建立西醫(yī)的病。 通過(guò)中、西醫(yī)臨床診斷指標(biāo)進(jìn)行對(duì)照,并由系統(tǒng)評(píng)分后建立最佳模型,在關(guān)注臨床指標(biāo)改善的同時(shí),對(duì)體現(xiàn)中醫(yī)望的特點(diǎn)的表觀指標(biāo)有一定研究?jī)r(jià)值。 但此種模型評(píng)價(jià)方法還在進(jìn)行中,有待進(jìn)一步完善提升；動(dòng)物模型評(píng)價(jià)指標(biāo)在“病癥”和“病證”兩方面?zhèn)戎攸c(diǎn)區(qū)分不明顯[28]；對(duì)造模方法相似但屬不同現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病的動(dòng)物模型還未能探明其區(qū)別[29-31]。

因?yàn)槿祟?lèi)疾病的發(fā)病機(jī)制研究尚處于不斷探索、發(fā)展的階段,所以中醫(yī)藥動(dòng)物模型的建立、評(píng)價(jià)和應(yīng)用結(jié)果也應(yīng)進(jìn)行及時(shí)反饋,以便于修改、完善造模方式,提高模型的吻合度。 從理論探討回歸至動(dòng)物實(shí)驗(yàn),再通過(guò)實(shí)踐對(duì)評(píng)價(jià)體系和建立方法進(jìn)行修正,以期建立成熟度、吻合度更高的中醫(yī)藥動(dòng)物模型。