張翠平

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬淮安市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇淮安 223001

糖尿病腎病(DN)是糖尿病患者主要的微血管并發(fā)癥之一，隨著糖尿病病程的進(jìn)展，5～10年后有60%～70%的患者會(huì)并發(fā)DN[1]。DN的發(fā)生與糖尿病患者體內(nèi)生成糖基化終產(chǎn)物、炎癥細(xì)胞因子聚積、脂質(zhì)代謝異常及免疫功能異常等因素共同作用有關(guān)[2]。骨保護(hù)素(OPG)是腫瘤壞死因子(TNF)超家族成員之一，通過(guò)結(jié)合核因子-κB受體活化因子(RANKL)在成骨細(xì)胞分化和吸收中發(fā)揮作用。全身和局部的刺激，如炎癥因子、激素和細(xì)菌產(chǎn)物均會(huì)影響OPG/RANKL信號(hào)通路。既往研究發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素6(IL-6)是與DN關(guān)系密切的炎癥因子，OPG與糖尿病心血管事件及DN的發(fā)生相關(guān)[3-4]。本研究探討了DN患者血清OPG、TNF-α、IL-6的水平變化及其與DN病程進(jìn)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年11月至2018年11月在本院內(nèi)分泌科住院的2型糖尿病(T2DM)患者123例為研究對(duì)象，其中男68例，女55例；年齡35～67歲，中位年齡55歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：T2DM的診斷符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2014年版)》[5]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；無(wú)糖尿病急性并發(fā)癥和急慢性感染。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他慢性腎臟病、慢性肝病、結(jié)締組織病、腫瘤等。根據(jù)尿微量清蛋白(mALB)水平將患者分為糖尿病無(wú)腎病組(DM組，mALB<20 μg/min)42例，早期DN組(20 μg/min≤mALB<200 μg/min)40例，臨床DN組(mALB≥200 μg/min)41例。另選取30例健康體檢者作為對(duì)照(NC組)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象知情同意。

1.2儀器與試劑 OPG、TNF-α、IL-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)分別為CSB-E04692h、CSB-E04740h、CSB-E04638h。iMark 680酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。SIMENS ADVIA 1200全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自德國(guó)西門(mén)子公司。

1.3方法

1.3.1資料收集 收集各組研究對(duì)象的基本臨床資料及生化指標(biāo)，包括性別、年齡、病程、糖化血紅蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿清蛋白排泄率(UAER)。

1.3.2標(biāo)本采集 研究對(duì)象入院后(健康體檢者于體檢當(dāng)日)清晨空腹抽取靜脈血5 mL于真空采血管(無(wú)抗凝劑)中。室溫靜置10 min后4 000 r/min離心5 min，吸取上層血清，EP管分裝后置于-20 ℃冰箱凍存。

1.3.3OPG、TNF-α、IL-6水平檢測(cè) 參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，采用雙抗體夾心法檢測(cè)血清OPG、TNF-α、IL-6水平。

2 結(jié) 果

2.1各組基本臨床資料及生化指標(biāo)比較 各組的性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DM組、早期DN、臨床DN組的HbA1c、TC、TG、Scr水平均高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。早期DN組和臨床DN組BUN、UAER水平均高于NC組和DM組，早期DN組、臨床DN組Scr水平均高于DM組，臨床DN組BUN、Scr、UAER水平均高于早期DN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。早期DN組和臨床DN組的病程均長(zhǎng)于DM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組基本臨床資料及生化指標(biāo)比較(n/n或

2.2各組血清OPG、TNF-α、IL-6水平比較 早期DN組、臨床DN組血清OPG、IL-6水平均高于NC組和DM組，臨床DN組血清OPG、IL-6水平均高于早期DN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；臨床DN組血清TNF-α水平高于NC組和DM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組血清OPG、TNF-α、IL-6水平比較

2.3血清OPG、TNF-α、IL-6水平間的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清OPG水平與IL-6水平呈正相關(guān)(r=0.597，P=0.02)，與TNF-α水平無(wú)相關(guān)性(r=0.125，P=0.42)，血清TNF-α水平與IL-6水平呈正相關(guān)(r=0.628，P=0.01)。

續(xù)表1 各組基本臨床資料及生化指標(biāo)比較(n/n或

2.4引起DN發(fā)生的危險(xiǎn)因素分析 以T2DM患者是否合并DN作為因變量(1為有，0為無(wú))，血清OPG、TNF-α、IL-6作為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清IL-6、OPG、TNF-α水平升高是引起DN發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

糖尿病患者體內(nèi)的糖基化終產(chǎn)物可刺激腎臟固有細(xì)胞表達(dá)和釋放TNF-α增多，進(jìn)而誘導(dǎo)IL-6等炎癥因子生成增加，引起腎小球炎癥、腎小球系膜細(xì)胞增生、腎小球基底膜變厚、腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。有研究認(rèn)為,多種炎癥因子與DN的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[6]。金徽等[7]發(fā)現(xiàn)，金叉石斛可通過(guò)抑制糖尿病大鼠腎組織中核因子-κB(NK-κB)的活化，降低IL-6的表達(dá)，對(duì)糖尿病大鼠腎臟組織起到保護(hù)作用。DN患者體內(nèi)高水平的TNF-α、IL-6與腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)在患者體內(nèi)表達(dá)增加有關(guān)，提示NK-κB介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路作用于DN的病情發(fā)展[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，DN患者血清IL-6水平升高，且與HbA1c水平呈正相關(guān)，參與了DN的發(fā)生、發(fā)展，其機(jī)制可能是腎臟損傷后刺激機(jī)體IL-6水平升高，IL-6與相關(guān)受體結(jié)合后刺激系膜細(xì)胞增殖，使腎小球受損加劇，引起腎臟結(jié)構(gòu)和功能異常，IL-6可作為DN患者病情嚴(yán)重程度評(píng)估的參考指標(biāo)[9-10]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，消渴平合劑可能通過(guò)抑制腎臟NK-κB、p65、IL-6基因和蛋白表達(dá)，從而降低db/db小鼠糖化血清蛋白及血脂水平[11]。本研究中，早期DN組、臨床DN組血清IL-6水平高于DM組、NC組，臨床DN組血清IL-6水平高于早期DN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示血清IL-6水平隨著DN病情進(jìn)展逐漸升高，與DN的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與上述研究結(jié)果類(lèi)似。

OPG是由動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的可溶性分泌糖蛋白，在骨代謝調(diào)節(jié)中起重要作用。OPG還是血管鈣化的一個(gè)重要調(diào)節(jié)因子，對(duì)血管鈣化和內(nèi)皮細(xì)胞的存活起保護(hù)作用。血清OPG水平升高與1型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈病變和腎臟損傷相關(guān)[12]。DN患者血清OPG水平升高可能是一種代償性的防御機(jī)制，通過(guò)促進(jìn)腎臟毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，減少凋亡，避免內(nèi)皮細(xì)胞的進(jìn)一步受損，起到血管保護(hù)作用。本研究中，早期DN組、臨床DN組血清OPG水平高于DM組、NC組，臨床DN組血清OPG水平高于早期DN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示血清OPG水平隨著DN病情進(jìn)展逐漸升高，與DN的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

本研究中，血清TNF-α對(duì)腎損傷的嚴(yán)重程度反應(yīng)較為不敏感，僅是臨床DN組血清TNF-α水平與DM組、NC組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而早期DN組與DM組血清TNF-α水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清OPG、TNF-α水平均與IL-6水平呈正相關(guān)。 PACIFICO等[13]研究發(fā)現(xiàn)，OPG有強(qiáng)大的抗炎能力，與炎癥因子TNF-α、IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)，與本研究結(jié)果類(lèi)似。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清IL-6、OPG、TNF-α水平升高是引起DN發(fā)生的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，進(jìn)一步提示上述3項(xiàng)指標(biāo)與DN的發(fā)生有關(guān)。本研究存在一定的不足之處，納入的樣本量較少，且未對(duì)3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)DN的預(yù)測(cè)價(jià)值、預(yù)后評(píng)估價(jià)值等進(jìn)行分析，后期將進(jìn)行大樣本量的臨床研究進(jìn)一步驗(yàn)證。