馬 玲，焦大海，張培新，王 坤

(阜陽市人民醫(yī)院 甲乳外科,安徽 阜陽236000)

乳腺癌是女性癌癥中較為常見的腫瘤，也是全球女性死亡率的第二誘導(dǎo)因素[1]。目前，乳腺癌的檢測主要依賴于鉬靶攝影和彩超，對降低乳腺癌的死亡率具有重要意義[2]。然而，由于假陽性結(jié)果和過度診斷無痛性疾病的風(fēng)險，使得乳腺鉬靶篩查引起了爭議[3]。早期乳腺癌診斷對降低癌癥發(fā)病率和死亡率的具有重要意義。因此，迫切需要可以預(yù)測乳腺癌疾病的早期生物標(biāo)記物，其中包括這些標(biāo)記物具有較高敏感性和特異性，能為為臨床醫(yī)生提供更好的預(yù)后信息以及治療分層。一些血源性腫瘤標(biāo)記物已顯示出其在臨床診斷之前檢測惡性腫瘤，目前已在某些癌癥的篩查試驗中進行評估；例如，糖類抗原125(Carbohydrate antigen,CA125) 用于篩查卵巢癌[4]。目前沒有推薦用于乳腺癌早期診斷的血源性生物標(biāo)志物或篩選。迄今為止，幾乎所有診斷性生物標(biāo)志物研究均已使用在診斷時或診斷后收集的樣本，這些標(biāo)記物基本用于對晚期腫瘤的診斷。在本文章的研究中，我們搜集了隨后乳腺癌患者在臨床診斷之前的樣本應(yīng)用于癥狀前，作為疾病早期的生物標(biāo)記物和預(yù)測預(yù)后。盡管候選標(biāo)記物例如carcinoembrryonic抗原(CEA)，MUC1蛋白的可溶性形式(CA15-3，CA27.29)和循環(huán)的細胞角蛋白片段(TPA，TPS和CYFRA 21-1)被建議作為診斷標(biāo)記，它們?nèi)狈υ缙诩膊z測的敏感性和特異性。血清標(biāo)記物如癌癥標(biāo)記物15-3(Cancer antigen,CA15-3)、熱休克蛋白90A(Heat shock protein 90A,HSP90A)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)、分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(Secretory Leukocyte Peptidase Inhibitor,SLPI)與乳腺癌息息相關(guān)，研究是否可將其作為乳腺癌的診斷標(biāo)記物對乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)具有重要的意義。

1 材料和方法

1.1 研究對象選取2016年7月到2019年12月的乳腺癌患者血清標(biāo)本60例作為實驗組，患者平均年齡(50-65)周歲，參與者的病例均是絕經(jīng)后，在招募時沒有活動性惡性腫瘤。同時取健康對照組女性血清40份，平均年齡(50-65)周歲。取每個標(biāo)本的外周血5 ml，3 000 g/5 min，將上清轉(zhuǎn)移至 EP 管于-80℃ 超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩１狙芯拷?jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，且所有對象均簽署知情同意書。

1.2 方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，試劑盒分別購自上海江萊生物科技有限公司，ELISA法使用的試劑盒，稀釋度和批間CV為： CA15-3(人類)ELISA試劑盒(Abnova;1∶50;7.3%)；Hsp90a ELISA試劑盒(Stressgen;1∶30;6.5%)；人類SLPI Quantikine ELISA(R&D;1∶30;8.5%)；人類骨橋蛋白(OPN)Quantikine ELISA(R&D;1∶12.5;6.1%)。

1.3 統(tǒng)計方法通過SPSS 16．0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來描述，陽性率的比較采用卡方檢驗;ROC 曲線評價各指標(biāo)的診斷價值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基線資料對研究對象的基線臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)發(fā)現(xiàn)，發(fā)生乳腺癌的年齡為53.12±7.23，BMI為27.33±4.37 kg/m2，情緒低落患者占33.3%，遺傳因素58%，熬夜55%。隨后罹患乳腺癌組的BMI,情緒低落，遺傳以及熬夜均顯著高于對照組(P均<0.05)，其它臨床資料無顯著統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。

表1 研究對象的基線臨床資料

2.2 收集60例樣本乳腺癌的等級、節(jié)點狀態(tài)、轉(zhuǎn)移、Her2以及ER

如表2所示，60例乳腺癌患者的等級1級30例，2級10例，3級20例；節(jié)點狀態(tài)N0是 39例，N1是21例；轉(zhuǎn)移者M0是40例，M1是2例，M2是10例，M3是8例；Her2 +(4)例，++(7)例，+++(13)；ER陽性15例。

表2 乳腺癌患者等級、節(jié)點狀態(tài)、轉(zhuǎn)移、Her2以及ER

2.3 乳腺癌患者和健康對照組血清標(biāo)記物比較乳腺癌患者血清CA15-3，Hsp90a，OPN和SLPI四項陽性率的比較水平顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，見表3。

表3 兩組CA15-3，Hsp90a，OPN及SLPI水平的比較

2.4 對血清標(biāo)記物CA15-3，Hsp90a，OPN，SLPI進行早期乳腺癌預(yù)測的臨床價值分析通過對這四項血清標(biāo)記物進行ROC曲線分析(圖1和表4)，發(fā)現(xiàn)4項指標(biāo)均可鑒別乳腺癌 vs 健康對照。其中CA15-3鑒別的AUC最大，其次依次是OPN、SLPI和SHP90A。

表4 四項指標(biāo)的Cut off值以及敏感度和特異度

圖1 CA15-3，Hsp90a，OPN，SLPI四種血清標(biāo)記物的ROC曲線

3 討論

據(jù)報道，發(fā)達國家女性乳腺癌的發(fā)生率高于其他癌癥。乳腺癌發(fā)病率和乳腺癌死亡率預(yù)計將在未來相當(dāng)長的一段時間內(nèi)增加。在大多數(shù)乳腺癌病例中，患者沒有很多可檢測到的癥狀，或者沒有親自檢查乳房。因此，早期有效診斷乳腺癌以降低乳腺癌的死亡率非常重要。為了降低乳腺癌的死亡率，早期診斷是最重要的。根據(jù)初步治療后的預(yù)后，選擇合適的輔助治療也很重要。為了診斷乳腺癌，多種方法結(jié)合使用。為了補充這種乳房篩查方法，已經(jīng)嘗試使用血液腫瘤標(biāo)志物水平來診斷乳腺癌。盡管已經(jīng)研究了它們作為診斷或預(yù)后因素的價值，但是常規(guī)腫瘤標(biāo)記物的應(yīng)用伴隨著局限性，并且沒有官方推薦的乳腺癌標(biāo)記物。盡管診斷方法取得了重大進展，但是在臨床實踐中還沒有可以被廣泛接受的可以診斷出乳腺惡性腫瘤的早期生物標(biāo)志物。確診仍然依靠病理學(xué)家對組織活檢進行病理學(xué)評估[5-6]。因此，迫切需要新型的生物標(biāo)志物和新穎的平臺技術(shù)，目前很少有研究測試血液候選腫瘤標(biāo)志物在乳腺癌早期研究中的意義。因此，血源性生物標(biāo)志物，用于乳腺癌的早期檢測在篩選中仍需要找到用途。CA15-3廣泛被用于監(jiān)測轉(zhuǎn)移性乳腺癌(BC)[7-8]。在患有肺癌，結(jié)腸直腸癌和腎癌的各種患者中，Trx1的血清水平表明Trx1的水平顯著高于其他癌癥患者。CA15-3可能是最著名的非侵入性標(biāo)志物乳腺癌。CEA和CA15-3與血清Trx1可用于乳腺癌的早期診斷或乳腺癌的早期預(yù)測預(yù)后，因此作為乳腺癌的診斷標(biāo)志物具有重要意義。表明將CEA或CA15-3與Trx1組合可大大提高早期診斷乳腺癌的診斷能力，特別是在敏感性方面[9]。已有研究表明，HSP90s家族基因過表達，并可能作為BRAC亞型的預(yù)后生物標(biāo)志物。通過對HSP90a的藥理干預(yù)，調(diào)節(jié)BRAC微環(huán)境中的免疫浸潤以獲得更有效的抗癌免疫性可能是BRAC治療的一個新突破點。HSP90s家族由普遍存在的ATP依賴性分子伴侶組成，可在壓力下協(xié)助折疊新合成的蛋白質(zhì)或穩(wěn)定變性蛋白質(zhì)[10]。HSP90a蛋白包括受體酪氨酸激酶，轉(zhuǎn)錄因子，類固醇激素受體和細胞周期調(diào)節(jié)蛋白，所有這些蛋白在細胞存活和增殖以及腫瘤的發(fā)生和惡性中都起著重要的作用[11]。據(jù)報道，HSP90a的高表達并可能在包括BRAC在內(nèi)的各種人類癌癥中用作不利的預(yù)測生物標(biāo)志物[12-13]。骨橋蛋白(OPN)是一種分泌的整合素結(jié)合糖磷酸蛋白，可在多種組織和細胞類型中產(chǎn)生，其與癌癥的關(guān)系已有充分文獻記載[14-15]。我們的研究以及其他研究表明，OPN在功能上有助于侵略性細胞行為，腫瘤進展和轉(zhuǎn)移。盡管OPN不是腫瘤特異性的，但它在許多惡性腫瘤(包括乳腺癌)中已被描述為腫瘤標(biāo)志物的潛力[16]。抗白蛋白酶1(以前稱為分泌性白細胞蛋白酶抑制劑，SLPI)已被鑒定為幾種癌癥的候選分子標(biāo)記[17]。SLPI是一種分泌的絲氨酸蛋白酶抑制劑，是粘膜和皮膚的重要保護成分。由于SLPI的功能在多種生物學(xué)環(huán)境中具有多效性，因此一直是廣泛研究的主題。在癌癥中，有大量文獻顯示SLPI表達不僅在乳腺癌中而且在肺癌，胃癌和結(jié)腸直腸癌中均表達增加。例如，非小細胞肺癌患者的血清SLPI水平高于小細胞肺癌患者或健康個體，并且發(fā)現(xiàn)這些水平與腫瘤分期相關(guān)。然而，在某些情況下，原發(fā)灶部位SLPI的過表達抑制了轉(zhuǎn)移。在乳腺癌中，SLPI的過度表達通常與更具侵略性的轉(zhuǎn)移性疾病相關(guān)[18-19]。然而，SLPI如何影響腫瘤侵襲性，轉(zhuǎn)移潛力和治療結(jié)果的細節(jié)仍然未知。

本研究根據(jù)我們采集乳腺癌患者臨床和健康對照組的樣本進行研究，通過ROC曲線顯示，CA15-3的診斷效果最為顯著，其次是Hsp90a、OPN和SLPI，他們對乳腺癌病的早期發(fā)現(xiàn)均具有重要的意義。