宋巧莉

（江蘇九旭藥業(yè)有限公司，江蘇徐州 221200）

孟魯司特鈉片最早是由美國Merk公司開發(fā)，并于1998年2月20日在美國申請上市的薄膜衣片，商品名SINGULAIR?，規(guī)格為10 mg；原國家藥品監(jiān)督管理局于1999年10月29日批準由默沙東（Merck Sharp& Dohme Ltd.）公司進口注冊，商品名為順爾寧?。

孟魯司特鈉屬于生物藥劑學分類系統(tǒng)（Biopharmaceutics Classification System，BCS）Ⅱ類藥物，為口服固體制劑，體外溶出試驗采用比較仿制制劑與參比制劑體外多條溶出曲線相似性的方法，可以降低仿制制劑與參比制劑體內(nèi)不等效風險。因此，本實驗重點對其片劑的體外溶出進行研究，考察其在不同pH介質(zhì)中的溶出行為，分析了原料粒徑、助溶劑十二烷基硫酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS）用量及原料藥加入方式對溶出的影響，為今后孟魯司特鈉新劑型的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

YQ100-1型試驗級氣流磨，上海賽山粉體機械制造有限公司；HLSH4-10A型濕法混合顆粒機，中航工業(yè)北京航空制造工程研究所；P100型粉碎整粒機，深圳市信宜特科技有限公司；MD30型萬向混合機，深圳市信宜特科技有限公司；XYT-I型流化制粒包衣機，深圳市信宜特科技有限公司；ZP14型旋轉(zhuǎn)式壓片機，北京新龍立科技有限公司；BG1-5型高效薄膜包衣機，中航工業(yè)北京航空制造工程研究所；708DS型自動溶出儀，安捷倫科技有限公司；LC-20A型高效液相色譜儀，日本島津公司。

孟魯司特鈉原料，Dr.Reddy's Laboratories Ltd.；孟魯司特鈉片，Merck Sharp & Dohme Ltd.（英國），杭州默沙東制藥有限公司分裝；孟魯司特二環(huán)己胺鹽對照品（Y0001436），含量99.4%，歐洲藥典EP標準品；微晶纖維素，F(xiàn)MC Corporation；一水乳糖，DFE Pharma GmbH & Co. KG.；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，F(xiàn)MC Corporation；羥丙纖維素 EXF，Aqualon Company；硬脂酸鎂，安徽山河藥用輔料有限公司；歐巴代，上?？房蛋录夹g有限公司；SDS，分析純，成都艾科達化學試劑有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 溶出曲線方法的建立

（1）溶出介質(zhì)體積和方法的選擇。一般大杯法的溶出介質(zhì)體積在500～1 000 mL，以900 mL為最常用，本實驗溶出介質(zhì)的體積選用900 mL。本品為薄膜衣片，采用常規(guī)的槳法，攪拌速率50 r/min。

（2）溶出介質(zhì)及取樣時間的選擇。根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》，試驗可在不同的溶出介質(zhì)（pH值1.0～6.8）下進行。選擇介質(zhì)為pH1.0的鹽酸溶液、pH4.0的醋酸鹽緩沖液、pH4.5的醋酸鹽緩沖液、pH6.8的磷酸鹽緩沖液及分別加入一定量SDS的4種溶液為考察對象，分析孟魯司特鈉溶解度，測定溶出曲線，選擇具有區(qū)分力的溶出介質(zhì)。

1.2.2 溶出曲線測定

在不同時間點取樣10 mL，并補液10 mL，濾過，棄去續(xù)濾液至少6 mL，再取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密稱取孟魯司特二環(huán)己胺鹽對照品適量，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成孟魯司特濃度約為10 μg/mL的溶液備用。

色 譜 條 件： Agilent SB色 譜 柱（4.6 mm*50 mm ，5μm），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；以0.15%三氟醋酸溶液-0.15%三氟醋酸乙腈溶液（45∶55）為流動相，檢測波長為238 nm，柱溫25℃，流速1.0 mL/min。理論板數(shù)按孟魯司特峰計算不低于4 000。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，樣品溶液應在制備完成后4 h內(nèi)進樣。

按外標法以峰面積計算溶出量，在溶出曲線計算時，采用雜質(zhì)加和方法進行計算。避光條件下0.2%SDS 水、0.2%SDS pH4.0與 0.2%SDS pH6.8介質(zhì)24 h穩(wěn)定，0.2%SDS pH1.0介質(zhì)2 h內(nèi)降解大于2%。孟魯司特鈉原料藥在不同介質(zhì)37 ℃中穩(wěn)定性：避光條件下0.2%SDS 水、0.2%SDS pH4.0與0.2%SDS pH6.8介質(zhì)90 min穩(wěn)定，0.2%SDS pH1.0介質(zhì)10 min內(nèi)降解大于2%。

1.2.3 處方篩選

參照參比制劑美國上市的說明書[1]，其處方組成為微晶纖維素、一水乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羥丙纖維素和硬脂酸鎂。包衣成分包括羥丙甲纖維素、羥丙纖維素、二氧化鈦、氧化鐵紅、氧化鐵黃和巴西棕櫚蠟。參照參比制劑進口注冊標準（JX20010356）[2]及現(xiàn)行版藥典要求，確定選擇含0.2%SDS 的pH6.8磷酸鹽作為最有區(qū)分力的介質(zhì)，進行處方篩選。

制備流程：稱取處方量的孟魯司特鈉、一水乳糖及微晶纖維素，置于濕法混合制粒機中，攪拌速度150 r/min，混合5 min；配制8%的羥丙纖維素水溶液，攪拌使溶解作為粘合劑；設置攪拌速度150 r/min，剪切速度2 000 r/min，加入處方量的粘合劑，制粒200 s；將濕顆粒置于流化床中，干燥至顆粒水分＜1%，過18目篩整粒；加入處方量的外加交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，混合10 min；再加入處方量的硬脂酸鎂，混合5 min；采用φ8.0 mm圓形淺凹沖壓片，片重約200 mg，硬度70～90 N，包薄膜衣。

（1）原料藥粒徑篩選。處方1、2、3的原料藥粒徑D90分別為75 μm、50 μm和20 μm，其余步驟同1.2.3制備流程所示。

（2）增溶劑（SDS）加入量篩選。配制8%的羥丙纖維素水溶液，加入0.1%、0.3%、0.5%和0.8%的SDS，攪拌使溶解作為粘合劑，分別得到處方1至4，其余步驟不變。

（3）原料加入方式篩選。處方1：稱取處方量一水乳糖及微晶纖維素，置于濕法混合制粒機中，攪拌速度150 r/min，混合5 min；配制8%的羥丙纖維素水溶液，加入處方量的孟魯司特鈉，攪拌使溶解作為粘合劑。處方2：稱取處方量一水乳糖、微晶纖維素、羥丙纖維素，置于濕法混合制粒機中，攪拌速度150 r/min，混合5 min；將孟魯司特鈉溶解于水中作為粘合劑。其余步驟不變。

1.2.4 放大生產(chǎn)

采用單因素法繼續(xù)篩選不同填充劑比例、不同崩解劑用量處方對溶出曲線的影響。依據(jù)確定的處方進行一批樣品的實驗室放大生產(chǎn)，批量為2萬片，參照《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》，采用0.2%SDS水溶液、0.2%SDS pH1.0鹽酸溶液、0.2%SDS pH4.0醋酸鹽緩沖鹽、0.2%SDS pH6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)進行自制制劑與參比制劑的溶出曲線對比。

相似因子計算公式：

式中，f2為相似因子，Ti和Ri分別為各取樣時間點自制制劑與參比制劑的平均溶出率，n為取樣時間點個數(shù)。

2 結果與分析

2.1 溶出介質(zhì)選擇

對孟魯司特鈉在不同溶劑中的溶解度進行測定（見表1），結果顯示：在pH1.0、pH4.0與pH6.8溶液中均未達到漏槽條件；在pH6.8溶出介質(zhì)中加入不同濃度表面活性劑SDS，發(fā)現(xiàn)0.2%SDS即可滿足漏槽條件；在其他溶出介質(zhì)中加入0.2%SDS，亦均可達到漏槽條件。

表1 孟魯司特鈉溶解度

采用0.2%SDS水溶液、0.2%SDS pH1.0鹽酸溶液、0.2%SDS pH4.0醋酸鹽緩沖鹽、0.2%SDS pH6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)，對參比制劑進行溶出曲線測定。結果表明：在0.2%SDS水溶液與0.2%SDS pH6.8磷酸鹽緩沖液中，15 min溶出大于85%；在0.2%SDS pH1.0鹽酸溶液與0.2%SDS pH4.0醋酸鹽緩沖液中，溶出較緩慢，具有一定區(qū)分力。故將0.2%SDS水溶液、0.2%SDS pH1.0鹽酸溶液、0.2%SDS pH4.0醋酸鹽緩沖鹽、0.2%SDS pH6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。

2.2 原料藥粒徑篩選

孟魯司特鈉為低滲高溶類藥物，溶出速率是胃腸道吸收的限速因素，而難溶性藥物的粒度關系到藥物與胃腸液的接觸面積，從而影響藥物的溶出速率。其次，孟魯司特鈉片規(guī)格為10 mg，對于小規(guī)格片劑，含量均勻度是制劑生產(chǎn)過程中重點控制的指標之一，原料的粒度能顯著影響該產(chǎn)品的吸收利用屬性。因此，對于孟魯司特鈉原料藥粒徑的篩選尤為關鍵。

溶解度情況滿足漏槽條件，為降低風險，促進主藥在不同介質(zhì)中的溶出與參比制劑一致，需對原料藥粒度進行篩選，以確定最佳的原料藥粒度，因此采用氣流磨對原料進行粉碎處理。由圖1可知，不同粒徑制備的藥物在0.2%SDS pH6.8磷酸鹽介質(zhì)中的溶出情況無顯著變化，溶出速率及最終溶出量均小于參比制劑。

圖1 孟魯司特鈉原料藥粒徑篩選試驗結果

2.3 增溶劑（SDS）加入量篩選

十二烷基硫酸鈉（SDS）對藥物具有一定的增溶作用，研究處方中增溶劑加入量對溶出曲線的影響。由圖2可知，處方中加入SDS能提高前20 min的溶出速率，最終溶出量并無明顯改善，溶出速率及最終溶出均小于參比制劑。

圖2 孟魯司特鈉增溶劑SDS篩選試驗結果

2.4 原料加入方式篩選

自制藥品溶出速率小于參比制劑，經(jīng)XRD晶型對比，參比制劑中原料為結晶態(tài)，本研究用原料為無定型態(tài)[3]，需進一步對處方工藝進行研究。

濕法制粒工藝中原料常用的加入方式為內(nèi)加，即原料和內(nèi)加輔料混合后加入粘合劑劑或潤濕劑，濕法制粒干燥后，加入外加輔料，混合壓片。因本品原料具有晶型差異，通過原料常規(guī)的加入方式不能滿足溶出一致性的需求，故考察采用不同的原料加入方式進行對比研究。

從圖3可知，將原料溶解于粘合劑中能顯著提高孟魯司特鈉的溶解速度，通過溶出曲線的考察，發(fā)現(xiàn)自制制劑處方1與參比制劑15 min累積溶出度均大于85%，判定為相似。

圖3 孟魯司特鈉原料藥加入方式篩選試驗結果

2.5 放大生產(chǎn)

原料采用溶解于粘合劑的加入方式能顯著提高孟魯司特鈉片的溶解速度，采用單因素法繼續(xù)篩選不同填充劑比例、不同崩解劑用量處方對溶出曲線的影響，結果表明：填充劑乳糖∶微晶纖維素質(zhì)量比例在5∶1～1∶2范圍內(nèi)，崩解劑交聯(lián)羧甲基纖維素鈉用量在3%～7%，對藥品在含0.2%SDS的pH6.8磷酸鹽溶出曲線影響較小，15 min累積溶出度均大于85%，與參比制劑溶出一致，據(jù)經(jīng)驗值和生產(chǎn)成本考慮，優(yōu)選填充劑乳糖∶微晶纖維素比例為3∶1，崩解劑交聯(lián)羧甲基纖維素鈉用量為5%。

依據(jù)確定的處方進行一批樣品的實驗室放大生產(chǎn)，其與參比制劑的溶出結果見圖4 ～圖7。經(jīng)計算在0.2%SDS水介質(zhì)和0.2%SDS 的pH6.8磷酸鹽介質(zhì)中自制制劑和參比制劑在15min的平均溶出量均大于85%，在0.2%SDS pH1.0鹽酸介質(zhì)中f2為70，在0.2%SDS pH4.0醋酸鹽介質(zhì)中f2為72，自制制劑與參比制劑的溶出曲線相似，說明該處方工藝滿足要求。

圖4 自制制劑與參比制劑在0.2%SDS水介質(zhì)中溶出曲線

圖5 自制制劑與參比制劑在0.2%SDS pH1.0鹽酸介質(zhì)中溶出曲線

圖6 自制制劑與參比制劑在0.2%SDS pH4.0醋酸鹽介質(zhì)中溶出曲線

圖7 自制制劑與參比制劑在0.2%SDS 的pH6.8磷酸鹽介質(zhì)中溶出曲線

3 結論

本文通過單因素篩選，考察了孟魯司特鈉原料粒徑、助溶劑SDS用量及原料藥加入方式對溶出曲線的影響，結果顯示：原料粒徑和SDS添加量對孟魯司特鈉溶出影響均較小，因孟魯司特鈉原料參比制劑為結晶態(tài)[3]，國內(nèi)孟魯司特鈉相關制劑仿制難度較大，通過改變原料的加入方式可達到與參比制劑溶出特征一致的效果。通過優(yōu)化溶出曲線一致性可以提高人體生物等效性試驗（BE）的成功率，但最終自制制劑與參比制劑在療效上是否一致還需要通過BE試驗進一步驗證[4]。