李丹,王文千,李明亮,方小明,彭文君,田文禮*,魏穎*

1(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蜜蜂研究所,北京 100093) 2(中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院,北京市蛋白功能肽工程技術(shù)研究中心,北京 100015)

蜂王漿是從工蜂(Apismellifera)的下頜和下咽腺分泌的一種乳脂狀物質(zhì)。它是所有蜜蜂幼蟲在生命前3 d的食物；然后,工蜂們轉(zhuǎn)向食用主要由蜂蜜和花粉組成的蜂糧,而蜂王終身食用蜂王漿[1-3]。蜂王漿已被應(yīng)用于醫(yī)療產(chǎn)品、健康營(yíng)養(yǎng)品、化妝品和商業(yè)用途。從蜂王漿中分離出的各種生物活性物質(zhì),如蛋白質(zhì)、肽、脂肪酸和酚類化合物,都可用于藥物研究和產(chǎn)品開發(fā)。蜂王漿具有抗微生物、抗氧化劑、促進(jìn)傷口愈合、抗衰老、抗癌、抗炎、抗高血壓、抗高血脂,還具有雌激素、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用、免疫調(diào)節(jié)功能特性[4]。但是,目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于蜂王漿對(duì)免疫功能調(diào)節(jié)作用的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析蜂王漿對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的體重、臟器指數(shù)及形態(tài)、細(xì)胞因子、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、免疫球蛋白含量、T/B淋巴細(xì)胞增殖能力、睪酮等指標(biāo)的影響,探究其免疫調(diào)節(jié)作用。著力為開發(fā)蜂產(chǎn)品的保健應(yīng)用提供新思路,為拓寬特色蜂產(chǎn)品的商業(yè)用途提供理論依據(jù)的同時(shí)促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展,符合國(guó)家當(dāng)前產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整及提高農(nóng)民收入的政策,有利于蜂產(chǎn)品市場(chǎng)的開發(fā)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

48只6～8 周齡健康 SPF 級(jí)雄性KM小鼠(37～46 g),北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng) 3 d后用于實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于無(wú)菌環(huán)境,溫度控制在20～22 ℃；酪蛋白、0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液和0.33%中性紅染色液,北京索萊寶生物技術(shù)有限公司；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和RPMI—1640 培養(yǎng)基,Hyclon 公司；胰酶、青霉素/鏈霉素、紅細(xì)胞裂解液和CCK-8,碧云天生物技術(shù)研究所；脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)、刀豆蛋白、(Con-A)、[3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽, MTT],Sigma Aldrich 公司；IgG ELISA Kit、IgM ELISA Kit、IL-2 ELISA Kit、IL-4 ELISA Kit,北京百智生物科技有限公司；小鼠睪酮ELISA試劑盒,南京森倍伽生物科技。

BD C6 流式細(xì)胞儀,美國(guó) Thermofisher 公司；CKX-4 倒置相差顯微鏡,日本奧里巴斯有限公司；Spectra MR 多功能酶標(biāo)儀,美國(guó) Dynex 公司；血液分析儀,濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及受試樣品給予

48只昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,稱其體重作為初始體重,隨機(jī)分為空白組、酪蛋白組0.25 g/(kg·bw)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)模型組、蜂王漿低劑量組1.25 g/(kg·bw)、蜂王漿中劑量組2.5 g/(kg·bw)、蜂王漿高劑量組5.0 g/(kg·bw),共計(jì)6組,每組8只[5]。所有小鼠每日定時(shí)灌胃,蜂王漿組給予1.25、2.5、5 g/(kg·bw)蜂王漿灌胃,空白組和環(huán)磷酰胺組每日灌胃相同體積的生理鹽水,酪蛋白組則依照0.25 g/(kg·bw)劑量的酪蛋白進(jìn)行灌胃,連續(xù)灌胃30 d[6]。在灌胃第27天時(shí),除空白組外,其余各組則通過(guò)連續(xù)3 d腹腔注射80 mg/(kg·bw)的環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫低下小鼠模型,空白組注射相同體積的生理鹽水。連續(xù)灌胃30 d后斷食不斷水,次日檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)[7]。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.2.1 體重變化

適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,隨機(jī)進(jìn)行分組并記錄初始體重,并且在處死前再次稱量體重,記為終末體重[8]。

1.2.2.2 免疫臟器指數(shù)

對(duì)每組動(dòng)物進(jìn)行摘眼球取血后斷頸處死,取胸腺和脾臟,稱重,臟器質(zhì)量(mg)/終末體重(g)即得脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)[8]。

1.2.2.3 脾臟和肝臟形態(tài)學(xué)觀察

用甲醛固定液將分離到的脾臟和肝臟進(jìn)行固定、包埋、切片、染色,鏡檢,采集圖像,對(duì)脾臟和肝臟組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。

1.2.2.4 外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

對(duì)每組動(dòng)物進(jìn)行摘眼球取血時(shí),取適量全血于 EDTA 抗凝管中,充分混勻,用血液分析儀對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)[7]。

1.2.2.5 外周血免疫球蛋白含量測(cè)定

取血于2 mL離心管中,4 ℃靜置過(guò)夜,低溫冷凍離心10 min,轉(zhuǎn)速3 000 r/min,制得血清,取50 μL 血清,使用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清中 IgG 和 IgM 的含量。

1.2.2.6 血清中細(xì)胞因子水平測(cè)定

另取200 μL血清,使用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清中IL-4、IL-6的含量[9]。

1.2.2.7 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)

參考文獻(xiàn)[10]的方法制備脾細(xì)胞懸液，用完全培養(yǎng)基調(diào)整脾細(xì)胞濃度至 5×106個(gè)/mL，輕輕吹打使細(xì)胞懸液均質(zhì)，吸取90 μL上述濃度均質(zhì)后的脾細(xì)胞懸液至96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)樣本做6個(gè)重復(fù)，再以相同順序向樣品孔中分別添加10 μL ConA/LPS(3個(gè)ConA孔，3個(gè)LPS孔)，所有樣品孔加完之后將培養(yǎng)板放置在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，取出96孔板，每孔添加10 μL CCK-8，繼續(xù)孵育2 h，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nm處的OD值，空白組為灌胃生理鹽水小鼠淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞的增殖能力通過(guò)刺激指數(shù)(stimulation index，SI)評(píng)估[10]：

(1)

1.2.2.8 睪酮含量測(cè)定

另取50 μL血清,使用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清中睪酮的含量[11]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

2 結(jié)果與討論

2.1 體重變化

從表1來(lái)看,6個(gè)組間小鼠的初末體重均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),灌胃期結(jié)束后,5個(gè)造模組小鼠體重與空白組相比體重增長(zhǎng)量均降低,但差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比,蜂王漿各個(gè)劑量組體重增加量均不顯著(P>0.05)。

表1 蜂王漿對(duì)免疫抑制小鼠體重的影響 單位：g

2.2 免疫臟器指數(shù)

如圖1、2所示,對(duì)比空白組,模型組2項(xiàng)臟器指數(shù)顯著下降(P<0.05),相比模型組,酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)出現(xiàn)了上升趨勢(shì),蜂王漿各劑量組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)也存在升高的趨勢(shì),但差異并不顯著(P>0.05)。

圖1 小鼠胸腺指數(shù)Fig.1 Mice thymus index 注：* P<0.05,與空白組比(下同)

圖2 小鼠脾臟指數(shù)Fig.2 Mice spleen index

2.3 脾臟和肝臟形態(tài)學(xué)觀察

脾臟 HE 染色切片如圖3所示,空白組小鼠的脾臟組織形態(tài)規(guī)則完整,白髓、紅髓正常,邊界明晰,脾小結(jié)發(fā)育正常。環(huán)磷酰胺模型組脾臟組織中白髓和紅髓界限不明確,脾小結(jié)存在嚴(yán)重破損現(xiàn)象,脾臟存在腫大現(xiàn)象。與環(huán)磷酰胺模型組相比,酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組脾臟結(jié)構(gòu)并無(wú)明顯改觀,蜂王漿中、高劑量組脾小結(jié)發(fā)育狀況均有改善,結(jié)構(gòu)完整清晰,蜂王漿中劑量組的結(jié)構(gòu)形態(tài)得到很大程度的改善。

a-空白組；b-酪蛋白組；c-模型組；d-王漿低劑量組； e-王漿中劑量組；f-王漿高劑量組圖3 蜂王漿對(duì)免疫低下小鼠脾臟組織形態(tài)學(xué) 變化的影響(×5)Fig.3 Effect of royal jelly on morphological changes in spleen tissue of immunocompromised mice

肝臟 HE 染色切片如圖4所示,由小鼠的肝切片可見,空白組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整,匯管區(qū)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞狀態(tài)正常。環(huán)磷酰胺模型組和酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組中,肝細(xì)胞壞死情況較嚴(yán)重,肝索排列混亂無(wú)規(guī)則,存在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象。蜂王漿中、高劑量組較環(huán)磷酰胺模型組肝組織結(jié)構(gòu)得到很大程度的改善。

a-空白組；b-酪蛋白組；c-模型組；d-王漿低劑量組； e-王漿中劑量組；f-王漿高劑量組圖4 蜂王漿對(duì)免疫低下小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué) 變化的影響(×10)Fig.4 Effect of royal jelly on morphological changes in liver tissue of immunocompromised mice

2.4 外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

如圖5所示,與空白組相比,環(huán)磷酰胺模型組小鼠全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈現(xiàn)顯著減少趨勢(shì)(P<0.05)；與環(huán)磷酰胺模型組相比,酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組白細(xì)胞含量基本無(wú)差異；蜂王漿灌胃后,各劑量組白細(xì)胞數(shù)量逐漸恢復(fù)至較高水平；與環(huán)磷酰胺模型組相比,蜂王漿中劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)(P<0.05),且基本上恢復(fù)至空白組白細(xì)胞含量水平。

圖5 小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig.5 White blood cell count of mice 注:#P<0.05,與模型組比(下同)

2.5 血清免疫球蛋白含量測(cè)定

如圖6、7所示,與空白組相比,環(huán)磷酰胺模型組血清 IgG 和 IgM 質(zhì)量濃度均呈顯著下降趨勢(shì)(P<0.05),酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組血清 IgG 和 IgM 質(zhì)量濃度較環(huán)磷酰胺模型組均有提高；蜂王漿中、高劑量組血清中的 IgG 和IgM水平較模型組有顯著提高(P<0.05)。且蜂王漿中、高劑量組的血清IgG、IgM水平均已超過(guò)空白組。

2.6 血清中細(xì)胞因子水平測(cè)定

如圖8所示,小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后,小鼠血清中IL-4水平組間無(wú)顯著性差異。如圖9所示,與空白組相比,環(huán)磷酰胺模型組血清IL-6水平顯著降低(P<0.05),說(shuō)明免疫低下模型構(gòu)建成功。與環(huán)磷酰胺模型組比較,酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組血清IL-6水平呈上升趨勢(shì)；經(jīng)蜂王漿干預(yù)后,中、高劑量組IL-6顯著升高(P<0.05),高劑量組對(duì)血清IL-6水平升高效果優(yōu)于中劑量組。

圖6 小鼠血清IgG水平Fig.6 Mice serum IgG level

圖7 小鼠血清IgM水平Fig.7 Mice serum IgM level

圖8 小鼠血清IL-4水平Fig.8 Mice serum IL-4 level

圖9 小鼠血清IL-6水平Fig.9 Mice serum IL-6 level

2.7 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)

如圖10所示,對(duì)比空白組,環(huán)磷酰胺模型組T淋巴細(xì)胞的增殖能力被明顯抑制(P<0.05),這說(shuō)明小鼠的特異性免疫功能受到影響,進(jìn)一步說(shuō)明造模成功。相較于環(huán)磷酰胺模型組,酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組T淋巴細(xì)胞增殖能力有提高,但效果不顯著；與環(huán)磷酰胺模型組相比,蜂王漿(中、高)劑量處理后的小鼠,其T淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)(P<0.05)。

如圖11所示,在本實(shí)驗(yàn)中,環(huán)磷酰胺模型組B淋巴細(xì)胞増殖顯著低于空白組(P<0.05),說(shuō)明通過(guò)注射環(huán)磷酰胺,小鼠的體液免疫功能受到嚴(yán)重?fù)p傷。酪蛋白陽(yáng)性對(duì)照組與環(huán)磷酰胺模型組B淋巴細(xì)胞増殖能力差異不大；蜂王漿中、高劑量組B淋巴細(xì)胞增殖能力高于環(huán)磷酰胺模型組,其中中劑量組B淋巴細(xì)胞增殖能力具有顯著提升(P<0.05)。綜上可知,蜂王漿對(duì)于免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的促進(jìn)作用較明顯。

圖10 T淋巴細(xì)胞增殖能力Fig.10 T lymphocyte proliferation ability

圖11 B淋巴細(xì)胞增殖能力Fig.11 B lymphocyte proliferation ability

2.8 睪酮含量測(cè)定

如圖12所示,蜂王漿各個(gè)劑量組睪酮含量均低于空白組,但差異不顯著；與環(huán)磷酰胺模型組相比,各劑量組血清睪酮水平無(wú)顯著變化,提示通過(guò)膳食補(bǔ)充蜂王漿并不會(huì)對(duì)小鼠血清睪酮水平變化產(chǎn)生影響。

圖12 血清中睪酮含量變化Fig.12 Changes in serum testosterone levels

3 結(jié)論與討論

蜂王漿是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性化合物的豐富來(lái)源,在生物活性和藥物應(yīng)用中具有廣泛的應(yīng)用潛力。蛋白質(zhì)、肽、脂質(zhì)、酚類和類黃酮是影響蜂王漿各種藥物特性的主要生物活性化合物[12]。

免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)具有激活抗體形成或抑制白細(xì)胞活性的功能,其在變態(tài)反應(yīng)、癌癥和炎癥中起重要作用[13]。一項(xiàng)針對(duì)兒童的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)的科學(xué)研究首次表明,蜂王漿給藥3個(gè)月后,其癥狀顯著改善[14]。蜂王漿的抗過(guò)敏因子可以抑制白細(xì)胞介素4(IL-4)的產(chǎn)生,IL-4是由CD3激活ovalbumin(OVA)/alum-immunized脾細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的。MRJP-3(70 kDa)糖蛋白抑制T細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-2和IFN-γ,從而抑制細(xì)胞增殖。腹腔注射MRJP-3發(fā)現(xiàn)在OVA/血清誘導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)小鼠中抗OVA IgG1和IgE的血清免疫水平受到抑制,而可溶性MRJP-3經(jīng)熱處理后降低了抗原性,并維持了其對(duì)卵清蛋白抗體應(yīng)答的抑制作用。體內(nèi)和體外研究均表明MJRP-3具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性[15]。此外,較低濃度的蜂王漿和3,10-HDA的水提取物通過(guò)觸發(fā)刀豆蛋白A(Con-A)激活T細(xì)胞增殖并增強(qiáng)IL-2的產(chǎn)生,而較高濃度的蜂王漿水提取物、干燥蜂王漿粉末和trans-10-HDA通過(guò)降低IL-2和NO產(chǎn)生來(lái)抑制T細(xì)胞增殖。蜂王漿的水提取物具有復(fù)雜的生物活性和較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性[16]。

眾所周知,環(huán)磷酰胺是一種使用廣泛的細(xì)胞毒性藥物,普遍應(yīng)用于腫瘤的治療中,可對(duì)骨髓的功能產(chǎn)生抑制作用,使白細(xì)胞數(shù)量降低。環(huán)磷酰胺的代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了很強(qiáng)的毒性作用,這一系列代謝產(chǎn)物通過(guò)交聯(lián)作用使DNA和蛋白質(zhì)烷基化。環(huán)磷酰胺可以通過(guò)抑制免疫器官的功能并造成體重下降,并且使得各種血細(xì)胞比例失衡,從而產(chǎn)生免疫功能的抑制[17]。

本實(shí)驗(yàn)先進(jìn)行蜂王漿干預(yù)30 d,實(shí)驗(yàn)結(jié)束前3 d注射環(huán)磷酰胺,評(píng)價(jià)蜂王漿對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用。未注射環(huán)磷酰胺的小鼠作為空白組,考慮到蜂王漿干物質(zhì)中含量最高的是蛋白質(zhì),故給予陽(yáng)性對(duì)照組與蜂王漿中劑量組中蛋白相同劑量的酪蛋白以消除影響。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)得出,各組小鼠體重增量均無(wú)顯著差異,但造模后小鼠體重增量下降,免疫低下小鼠模型構(gòu)建成功,這也說(shuō)明選定劑量的環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠具有較強(qiáng)的毒性[18]。

機(jī)體的免疫水平一定程度上受脾臟和胸腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能狀態(tài)的影響[18]。本實(shí)驗(yàn)中,環(huán)磷酰胺模型組小鼠的脾臟指數(shù)較空白組顯著降低,病理檢查提示存在脾臟損傷的情況；在蜂王漿不同劑量的干預(yù)下,脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均出現(xiàn)了不同程度的改善。同時(shí)肝臟內(nèi)免疫細(xì)胞含量較高,肝臟通過(guò)肝門靜脈與脾臟相連,兩者關(guān)系非常密切,脾損傷必然會(huì)導(dǎo)致肝損傷。與空白組相比,模型組小鼠的脾臟和肝臟HE切片觀察可見發(fā)育狀況差,形態(tài)結(jié)構(gòu)不規(guī)則,而經(jīng)蜂王漿干預(yù)后,小鼠的脾臟和肝臟組織結(jié)構(gòu)逐漸改善。提示蜂王漿可在一定程度上對(duì)胸腺、脾臟、肝臟的發(fā)育具有促進(jìn)作用以及還原修復(fù)的作用。

白細(xì)胞特有的吞噬功能使其在對(duì)抗病原體方面起著關(guān)鍵作用,因此,白細(xì)胞水平的下降會(huì)對(duì)免疫應(yīng)答水平造成威脅,增加機(jī)體患病的概率[19]。從這個(gè)角度上講,白細(xì)胞的含量在一定程度上也是機(jī)體免疫應(yīng)答情況的反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)觀察到環(huán)磷酰胺造模后,小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)相比空白組均顯著降低,在蜂王漿干預(yù)后出現(xiàn)改善。提示蜂王漿可以改善免疫低下小鼠的免疫功能。

IgG 在抗感染、免疫監(jiān)視、吞噬并溶解靶細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,影響體液免疫水平；IgM 在初次免疫中占據(jù)重要地位,對(duì)于機(jī)體免疫防御意義重大,具有很強(qiáng)的抗感染作用。本研究中,模型組小鼠血清 IgG 和 IgM 含量有降低趨勢(shì),并在部分蜂王漿干預(yù)組中得到恢復(fù)。提示蜂王漿可能通過(guò)恢復(fù) IgG 和 IgM 含量來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫。

細(xì)胞因子是由蛋白質(zhì)或肽類組成,通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合來(lái)介導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)[20]。環(huán)磷酰胺主要通過(guò)影響 Toll 樣受體信號(hào)通路,活化 NF-κB通路,從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性作用[21-22]。本實(shí)驗(yàn)中,相比空白組,模型組細(xì)胞因子IL-6濃度明顯下降,經(jīng)蜂王漿干預(yù)后,IL-6含量均升高并向空白組回歸。提示蜂王漿可能通過(guò)影響細(xì)胞因子的分泌或影響相關(guān)通路而達(dá)到改善機(jī)體的免疫功能的作用。

T/B 淋巴細(xì)胞對(duì)于機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫至關(guān)重要,ConA和LPS分別誘導(dǎo)活化T/B 淋巴細(xì)胞,T/B 淋巴細(xì)胞的增殖活性影響著免疫應(yīng)答水平的高低[23-24]。本實(shí)驗(yàn)中,模型組T/B淋巴細(xì)胞增值率比空白組明顯降低,與模型組相比,給予蜂王漿處理能不同程度提升T/B淋巴細(xì)胞的增殖率,從而提升免疫水平。

觀察到蜂王漿中劑量組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、T/B 淋巴細(xì)胞的增殖能力均高于蜂王漿低劑量、高劑量組,注意到相關(guān)研究中,蜂王漿對(duì)小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用也有類似的效應(yīng)[25],其劑量分組與本實(shí)驗(yàn)相近,且其中3.06 g/kg的中劑量組的巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)高于1.53 g/kg的低劑量組和6.12 g/kg的高劑量組,這說(shuō)明蜂王漿對(duì)免疫功能的恢復(fù)能力可能具有最佳劑量范圍,劑量過(guò)低可能沒(méi)有達(dá)到恢復(fù)免疫功能閾值的劑量,劑量過(guò)高則可能增加代謝負(fù)擔(dān)。

通過(guò)注射環(huán)磷酰胺不僅可以產(chǎn)生免疫抑制,還可以引發(fā)生殖毒性,因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)生殖功能相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了簡(jiǎn)單的檢測(cè)。睪酮對(duì)于男性精子的生成和第二性征的形成起關(guān)鍵作用,血清中睪酮水平長(zhǎng)期處于低位可對(duì)機(jī)體造成多種負(fù)面影響,如出現(xiàn)體重增加、肌肉質(zhì)量降低、疲勞感加重、勃起功能障礙和性欲低下等癥狀[26]。本實(shí)驗(yàn)中,各個(gè)處理組之間睪酮水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示蜂王漿可能對(duì)雄性小鼠體內(nèi)睪酮水平恢復(fù)無(wú)顯著影響。

本實(shí)驗(yàn)初步探究了蜂王漿對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的體重、免疫臟器指數(shù)、脾臟與肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、外周血白細(xì)胞數(shù)量、血清免疫球蛋白、細(xì)胞因子、脾淋巴細(xì)胞增殖能力、睪酮的影響,結(jié)果提示蜂王漿對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的多項(xiàng)免疫功能均有較顯著的改善作用,為蜂王漿的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。