駱小英 楊潤(rùn)青 魏 東

(華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 廣東 廣州 510640)

微藻在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用廣泛，可作為鮮活餌料、調(diào)水劑、功能性飼料添加劑等(張國(guó)維等, 2020)。我國(guó)是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖第一大國(guó)，對(duì)餌料微藻的需求量巨大。小球藻(Chlorella)是一類單細(xì)胞綠藻，環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快，細(xì)胞內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、葉綠素、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分(嚴(yán)佳琦等, 2011)。與世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)于1973年發(fā)布的其他食物蛋白的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸模式(氨基酸的含量、比例和可用性)相比，小球藻蛋白質(zhì)中的氨基酸模式更有利于實(shí)現(xiàn)畜禽等對(duì)氨基酸的平衡攝入。此外，魚(yú)類以小球藻為餌料進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，具有較高的生物利用率和消化率(Becker, 2007; Lai et al,2019)。蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)是最常見(jiàn)的小球藻品種，2012年已被衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品(Yu et al, 2018)，其細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)含量可高達(dá)細(xì)胞干重的 59.8% (Li et al, 2019)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。何海生等(2019)研究發(fā)現(xiàn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖水體中接種蛋白核小球藻可去除水體中的氮和磷，改善水質(zhì)；同時(shí)，可提高養(yǎng)殖動(dòng)物的特定生長(zhǎng)率、成活率及免疫酶活性。

目前，蛋白核小球藻在我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用仍存在許多技術(shù)瓶頸。例如，微藻鮮活制品在實(shí)際應(yīng)用中常常會(huì)出現(xiàn)供應(yīng)不及時(shí)、保質(zhì)期過(guò)短、營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和衛(wèi)生指標(biāo)大幅下降等問(wèn)題，不僅會(huì)增加育苗成本，也可能帶來(lái)病害導(dǎo)致育苗失敗(俞建中等, 2013)。為控制微藻制品中的細(xì)菌數(shù)量，在保藏前對(duì)其進(jìn)行殺菌處理可有效延長(zhǎng)微藻保質(zhì)期。目前，用于微藻液體殺菌的方法通常是巴氏殺菌及過(guò)濾除菌法(李元廣等, 2014)。此外，微藻常用的保藏方法是藻種低溫保藏法，但需要添加不同種類的保護(hù)劑，如二甲基亞砜、甲醇等(Chellappan et al, 2020; Saadaoui et al, 2016)，一方面會(huì)增加保藏成本，另一方面也可能會(huì)在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物鏈中存在潛在毒性。因此，微藻濃縮制品的直接保藏成為近些年的研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，4℃直接保藏2個(gè)月的螺旋藻(Spirulina platensis)藻液濃縮制品仍保持較高的細(xì)胞活力(劉恒恒等, 2020)；微擬球藻(Nannochloropsissp.)和杜氏藻(Dunaliellatertiolecta)濃縮藻液在4℃條件下保藏2個(gè)月，其脂肪酸成分及蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著變化(Welladsen et al, 2014)。如何有效保持微藻鮮活制品的相對(duì)細(xì)胞活性、營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)并延長(zhǎng)貨架期，對(duì)于微藻在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的商業(yè)化應(yīng)用至關(guān)重要。

本研究以實(shí)驗(yàn)室光發(fā)酵后得到的蛋白核小球藻濃縮藻膏和濃縮藻液為研究對(duì)象，考察巴氏殺菌處理以及不同保藏溫度條件下，細(xì)胞內(nèi)的天然色素、蛋白質(zhì)和細(xì)胞活性在連續(xù)避光保藏15 d過(guò)程中的變化規(guī)律，為開(kāi)發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的保藏技術(shù)提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蛋白核小球藻(15-2070)由北京大學(xué)陳峰教授惠贈(zèng)，采用Basal培養(yǎng)基(Ogbonna et al, 1997)進(jìn)行斜面轉(zhuǎn)接保藏，保藏溫度為4℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蛋白核小球藻光發(fā)酵藻液的制備 用接種環(huán)從實(shí)驗(yàn)室保存的蛋白核小球藻藻種斜面上挑取一小環(huán)，轉(zhuǎn)接到無(wú)菌Basal液體培養(yǎng)基中(121℃高壓滅菌 15 min，含 10 g/L 葡萄糖和 1.25 g/L 硝酸鈉)，置于溫度為 30℃、光照為 10 μmol/(m2·s)的搖床中培養(yǎng) 3～ 5 d。隨后，將藻液轉(zhuǎn)接至帶有LED外光照系統(tǒng)的5 L光發(fā)酵罐中。為降低細(xì)胞密度增長(zhǎng)帶來(lái)的遮蔽效應(yīng)對(duì)生長(zhǎng)的影響，在培養(yǎng)過(guò)程中采用逐步調(diào)光策略，光照強(qiáng)度范圍為 120～560 μmol/(m2·s)，pH 為 6.50±0.05，溫度為(30±2)℃，攪拌轉(zhuǎn)速為 150～200 r/min，通氣量為 2.5～10 L/min，消泡劑濃度為 0.3% (W/V)，培養(yǎng) 3～ 5 d (駱小英等, 2020)。

1.2.2 蛋白核小球藻濃縮制品的制備 濃縮藻膏制備：取光發(fā)酵后藻液于4000 r/min離心10 min，棄上清液后加蒸餾水進(jìn)行漩渦混合洗滌，離心后棄上清液，再加BG11培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌，離心棄去上清液，得到的離心沉淀即濃縮藻膏(細(xì)胞密度為8×1010cells/mL)，直接裝入15 mL無(wú)菌離心管，裝滿并排除管內(nèi)空氣用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

濃縮藻液制備：采用BG11培養(yǎng)基懸浮稀釋濃縮藻膏，得到細(xì)胞密度為1×108cells/mL的濃縮藻液。裝入15 mL無(wú)菌離心管，裝滿后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 蛋白核小球藻濃縮制品的巴氏殺菌 巴氏殺菌處理參考李元廣等(2014)：將制備好的濃縮藻膏和濃縮藻液離心管放入恒溫水浴鍋中，于85℃連續(xù)加熱15 min，加熱過(guò)程中多次手動(dòng)混勻。冷卻至室溫后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 蛋白核小球藻濃縮制品的保藏 將未經(jīng)巴氏殺菌處理和經(jīng)巴氏殺菌處理的濃縮制品(藻膏及藻液)分別置于室溫(18℃～25℃)或者低溫(4℃)條件下避光保藏15 d，每組3個(gè)平行。保藏起始時(shí)，取0.5 mL樣品用于細(xì)胞活性測(cè)定；保藏過(guò)程中，每3 d取樣1次，每次取樣2 mL，經(jīng)-40℃真空冷凍干燥后測(cè)定藻粉中的色素及蛋白質(zhì)含量。

1.3 分析測(cè)試

1.3.1 蛋白質(zhì)含量 取 100 mg凍干藻粉至消化管中，加入6.40 g混合還原性催化劑及12 mL濃硫酸，靜置過(guò)夜后，于消化爐中150℃保持40 min，隨后420℃保持120～150 min，至消化管中的液體呈現(xiàn)透明的綠色，停止消化。冷卻至室溫后，置于半自動(dòng)凱氏定氮儀(2300，F(xiàn)OSS，美國(guó))上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)加液、蒸餾(使用前加入400 g/L NaOH 溶液以及 20 g/L 硼酸溶液)，以甲基紅-溴甲酚綠作混合指示劑，用 HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.10 mol/L)滴定，粗蛋白含量(%)采用下列公式計(jì)算(Wang et al,2020)。

式中，V1和V2分別是滴定空白和滴定樣品所消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積(mL)；m是樣品質(zhì)量(g)；V′是樣品消煮液總體積(mL)；V是蒸餾用消煮液總體積(mL)。

1.3.2 色素含量測(cè)定 稱取凍干藻粉 10 mg于 2 mL凍存管中，加入適量的陶瓷珠及1 mL 90%丙酮溶液，經(jīng)研磨儀(Tissuelyser-24，凈信，上海)振蕩后在液氮中迅速冷凍，離心收集上清液。反復(fù)多次提取至藻粉呈現(xiàn)白色后，合并所有上清液并定容到10 mL。經(jīng)6000 r/min離心10 min后，再次吸取上清液定容至10 mL。利用紫外分光光度計(jì)(UV2300，天美，上海)測(cè)定470、646和663 nm下的吸光度，利用下列公式計(jì)算葉綠素a (Chl.a)、葉綠素b (Chl.b)和類胡蘿卜素(Car)的濃度(mg/L) (Chen et al, 2013)。

式中，Ca、Cb、Ct分別為 Chl.a、Chl.b和 Car的濃度，A為吸光度。

1.3.3 細(xì)胞活性的測(cè)定 利用無(wú)碳Basal培養(yǎng)基將收獲的蛋白核小球藻細(xì)胞數(shù)梯度稀釋至1×103～2.4×106cells/mL，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

配制熒光探針染料：稱取4.16 mg二醋酸熒光素(FDA)，用丙酮定容至 10 mL，配成 1.0 mmoL/L的母液，置于-20℃冰箱中保存。

細(xì)胞活性檢測(cè)方法：每5 mL梯度稀釋藻液分別加入 0、5、20、40、60、80、100、120和 140 μmol的FDA，充分振蕩后于室溫下避光放置 30 min。按每孔100 μL加樣于 96孔板上，利用多功能酶標(biāo)儀(Synergy Neo2，BioTek，美國(guó))在 525 nm 下檢測(cè)其熒光值(FDA激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為525 nm)，每組3個(gè)平行，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。保藏前、后細(xì)胞相對(duì)活性用下列公式計(jì)算(吳瑞珊,2008)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用 Microsoft Origin 2018軟件進(jìn)行繪圖，使用SPSS Statistics 24軟件通過(guò)單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，顯著性水平為P＜0.05或P＜0.01。

2 結(jié)果與討論

2.1 保藏前、后濃縮藻膏和濃縮藻液的感官變化

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，不同保藏條件下蛋白核小球藻濃縮藻膏和濃縮藻液的顏色和氣味等感官特征變化很大。新鮮制備的蛋白核小球藻藻膏和濃縮藻液均呈正常的濃墨綠色；而經(jīng)巴氏殺菌處理后則呈不同程度的褐色，這與前人的研究結(jié)果一致。小球藻的顏色在115℃加熱 15 min 后出現(xiàn)褐變(Castelló et al, 2018)。這是因?yàn)樵诟邷貤l件下，小球藻細(xì)胞內(nèi)的色素體受到破壞，從而導(dǎo)致葉綠素大量降解(Morist et al, 2001)。保藏到第3天時(shí)，藻膏和濃縮藻液在室溫條件下均產(chǎn)生刺鼻的腥味，膏體變稀，出現(xiàn)腐敗的跡象；而在4℃直接保藏的藻膏和濃縮藻液均未出現(xiàn)明顯變化。隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，未經(jīng)巴氏殺菌處理的藻膏和濃縮藻液的顏色在室溫條件下逐漸由鮮綠色變成褐色；而在4℃連續(xù)保藏15 d后，藻膏和濃縮藻液的顏色均保持為濃墨綠色。此外，保藏在所有條件下的蛋白核小球藻藻膏和濃縮藻液均隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸產(chǎn)生刺鼻的腥味。這種腥味產(chǎn)生是因?yàn)楦呙芏仍寮?xì)胞在常溫下代謝旺盛，而保藏條件下?tīng)I(yíng)養(yǎng)有限，部分藻細(xì)胞死亡并發(fā)生酸敗，產(chǎn)生了一些具有刺鼻性氣味的胺類、醛、酮、脂肪聚合物、過(guò)氧化氫和烴類等(陳煒等,2012)。

2.2 不同保藏條件下藻膏的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)評(píng)價(jià)

圖1為蛋白核小球藻藻膏在不同保藏條件下細(xì)胞內(nèi)色素含量隨保藏時(shí)間的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，巴氏殺菌后未開(kāi)始保藏前，藻膏中葉綠素的含量與巴氏殺菌前相比無(wú)明顯變化。室溫條件下，無(wú)論是否經(jīng)過(guò)巴氏殺菌處理，藻膏在保藏第3天時(shí)總?cè)~綠素含量均顯著下降(P＜0.01) (圖 1a和圖 1b)，直接室溫保藏和巴氏殺菌后室溫保藏的葉綠素?fù)p失量分別達(dá)到41.11%和34.76%；而在4℃條件下，未經(jīng)巴氏殺菌處理的藻膏中總?cè)~綠素含量無(wú)明顯下降，而經(jīng)巴氏殺菌處理的藻膏總?cè)~綠素含量下降了42.92% (P＜0.01)。這一結(jié)果與藻膏在保藏過(guò)程中出現(xiàn)的顏色變化呈正相關(guān)，說(shuō)明4℃條件下未經(jīng)巴氏殺菌處理的蛋白核小球藻的藻膏中細(xì)胞內(nèi)色素含量隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)未出現(xiàn)明顯變化，且在保藏結(jié)束時(shí)細(xì)胞內(nèi)色素含量基本與保藏前相同。

圖1 在不同保藏條件下藻膏中色素含量的變化Fig.1 Changes of pigments contents in algal paste under different preservation conditions

蛋白核小球藻藻膏在不同保藏條件下，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量隨保藏時(shí)間的變化見(jiàn)圖2。由圖2可知，經(jīng)巴氏殺菌處理的藻膏中蛋白質(zhì)含量與未經(jīng)巴氏殺菌處理相比，略有下降。隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)，藻膏中蛋白質(zhì)含量出現(xiàn)波動(dòng)。經(jīng)巴氏殺菌處理后，在室溫條件和4℃條件下保藏結(jié)束時(shí)，藻膏蛋白質(zhì)含量與第0天相比均顯著提高(P＜0.05)，這可能是巴氏殺菌并不徹底，導(dǎo)致濃縮藻膏腐敗變稀，在凱氏定氮時(shí)造成測(cè)量誤差；二是由于微生物滋生，菌體蛋白可能被測(cè)定計(jì)入，導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏高；而直接保藏條件下的則無(wú)顯著差異。與此相似的是，細(xì)胞密度為8×1010cells/mL的微擬球藻濃縮制品在4℃條件下弱光保存2個(gè)月后，其蛋白質(zhì)含量未出現(xiàn)顯著性變化(Welladsen et al, 2014)。

圖2 在不同保藏條件下藻膏中蛋白質(zhì)含量的變化Fig.2 Changes of protein contents in algal paste under different preservation conditions

綜上，未經(jīng)巴氏殺菌處理的蛋白核小球藻藻膏在4℃下連續(xù)避光保藏15 d，細(xì)胞內(nèi)色素及蛋白質(zhì)含量無(wú)明顯下降(P＞0.05)，其總?cè)~綠素含量、總類胡蘿卜素含量及蛋白質(zhì)含量分別為保藏前的97.20%、100.00%和98.20%。

2.3 不同保藏條件下濃縮藻液的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)評(píng)價(jià)

蛋白核小球藻濃縮藻液在不同保藏條件下細(xì)胞內(nèi)色素含量隨保藏時(shí)間的變化情況見(jiàn)圖3。由圖3可知，經(jīng)過(guò)巴氏殺菌處理后，濃縮藻液中的總類胡蘿卜素和總?cè)~綠素含量分別為2.93和11.77 mg/g，比未經(jīng)巴氏殺菌處理的藻液分別下降了15.32%和24.06%。研究表明，加熱溫度越高，越容易使細(xì)胞內(nèi)的色素降解，且產(chǎn)生的褐變程度越高；同時(shí)，巴氏殺菌時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)的總?cè)~綠素含量下降越多(Morist et al, 2001)。與藻膏相比，濃縮藻液經(jīng)巴氏殺菌處理后總?cè)~綠素?fù)p失率更高，這可能是因?yàn)闈饪s藻液的密度更低，傳熱效率高，受熱更均勻，導(dǎo)致其葉綠素降解更嚴(yán)重。在室溫條件下，當(dāng)保藏時(shí)間延長(zhǎng)到第3天時(shí)，直接保藏和巴氏殺菌保藏的濃縮藻液中總?cè)~綠素含量分別下降到10.59和9.26 mg/g，損失率分別為31.68%和21.33%。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，葉綠素含量在室溫條件下均極顯著低于初始水平(P＜0.01)。與藻膏(圖1a和圖1b)不同的是，在室溫條件下濃縮藻液胞內(nèi)的總類胡蘿卜素含量隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。保藏結(jié)束時(shí)，未經(jīng)巴氏殺菌處理和經(jīng)巴氏殺菌處理的濃縮藻液中總類胡蘿卜素含量分別為保藏前的 51.16%和72.03%。由圖3c和圖3d可知，在4℃條件下保藏的濃縮藻液盡管在保藏過(guò)程中色素含量出現(xiàn)波動(dòng)，但保藏結(jié)束時(shí)，其總?cè)~綠素和總類胡蘿卜素含量未出現(xiàn)顯著性降低。

圖3 在不同保藏條件下濃縮藻液色素含量的變化Fig.3 Changes of pigments contents in concentrated fluid in different preservation conditions

不同保藏條件下，蛋白核小球藻濃縮藻液蛋白質(zhì)含量隨保藏時(shí)間的變化見(jiàn)圖4。由圖4可知，在室溫條件下，未經(jīng)巴氏殺菌處理的濃縮藻液蛋白質(zhì)含量隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著上升(P＜0.01)，這可能是因?yàn)槲唇?jīng)巴氏殺菌處理的藻液中細(xì)菌活動(dòng)旺盛，可以利用BG11培養(yǎng)基中的氮素及腐敗藻體維持代謝，而在利用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)無(wú)法分離藻體和菌體，菌體蛋白可能被測(cè)定計(jì)入，從而導(dǎo)致測(cè)定的蛋白質(zhì)含量數(shù)據(jù)偏高。而經(jīng)巴氏殺菌處理后再保藏的濃縮藻液的蛋白質(zhì)含量隨保藏時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著下降(P＜0.01)，這可能是由于小球藻體在巴氏殺菌后裂解死亡，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)含量下降。在4℃條件下直接保藏的濃縮藻液的蛋白質(zhì)含量在保藏結(jié)束時(shí)未有明顯變化。這與Welladsen等(2014)的研究結(jié)果類似，杜氏藻(4.38×108cells/mL)在 4℃條件下保藏 2個(gè)月后，蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著變化。

圖4 在不同保藏條件下濃縮藻液蛋白質(zhì)含量的變化Fig.4 Changes of protein contents in concentrated fluid under different preservation conditions

綜上表明，未經(jīng)巴氏殺菌處理的蛋白核小球藻濃縮藻液在4℃連續(xù)避光保藏15 d，細(xì)胞內(nèi)的色素和蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著變化，均為保藏前的100%。

盡管在連續(xù)保藏15 d后的蛋白核小球藻藻膏和濃縮藻液中蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著變化，但本研究中采用凱氏定氮法無(wú)法區(qū)分樣品中的蛋白態(tài)氮、多肽氮和氨基酸態(tài)氮。研究表明，微擬球藻在4℃保藏過(guò)程中蛋白質(zhì)總量及必需氨基酸含量未出現(xiàn)顯著下降，而亮氨酸和纈氨酸含量呈顯著上升的趨勢(shì)(P＜0.05)。因此，要獲得保藏過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確變化，需要采取更精確的分析方法，如利用氨基酸分析儀測(cè)定氨基酸等。

2.4 細(xì)胞相對(duì)活性的分析

2.4.1 熒光探針?lè)ǚ治黾?xì)胞相對(duì)活性 不同細(xì)胞密度下FDA濃度對(duì)蛋白核小球藻染色效果的影響見(jiàn)圖5。根據(jù)吳瑞珊(2008)的方法，設(shè)定蛋白核小球藻的濃度梯度為 1.5×103、1.4×104、2.6×105和 2.4×106cells/mL。如圖5所示，利用熒光探針?lè)ǚ治隹芍?，最適細(xì)胞密度為2.6×105cells/mL。在過(guò)高或過(guò)低的細(xì)胞密度下，其熒光值幾乎持平。這是因?yàn)樵谶^(guò)高的細(xì)胞密度下，F(xiàn)DA不易滲入細(xì)胞而影響染色效果；而細(xì)胞密度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致熒光值較低，超出檢測(cè)下限而無(wú)法檢測(cè)到。在細(xì)胞密度為2.6×105cells/mL時(shí)，檢測(cè)所得的熒光強(qiáng)度隨FDA濃度的上升而上升，并在60 μmoL/L時(shí)達(dá)到最大值，而后隨著FDA濃度的進(jìn)一步增加，熒光值下降并趨于平緩。因此，根據(jù)本研究的結(jié)果，建立了檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)活性的最佳檢測(cè)條件：細(xì)胞濃度為2.6×105cells/mL，F(xiàn)DA 終濃度為 60 μmoL/L，染色時(shí)間為30 min。這與吳瑞珊(2008)利用FDA檢測(cè)眼點(diǎn)擬微球藻(Nannochloropisisoculata)的細(xì)胞活性所采用的濃度相一致。

圖5 不同細(xì)胞密度下FDA濃度對(duì)蛋白核小球藻染色效果的影響Fig.5 Effects of FDA concentration on the cell staining of C. pyrenoidosa at different cell densities

2.4.2 保藏前后藻膏及濃縮藻液的細(xì)胞活性分析

由2.1可知，在4℃條件下，未經(jīng)巴氏殺菌處理的蛋白核小球藻藻膏和濃縮藻液在連續(xù)保藏15 d后，顏色始終保持為鮮亮的綠色。針對(duì)這2個(gè)組別，利用2.4.1中建立的檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)活性的最優(yōu)條件，檢測(cè)其保藏前后的細(xì)胞相對(duì)活性。結(jié)果顯示，蛋白核小球藻藻膏保藏前后樣品的熒光值分別為7.74×1010和3.73×1010，細(xì)胞相對(duì)活性為保藏前的48.26%；濃縮藻液保藏前后樣品的熒光值分別為6.91×106和4.24×106，細(xì)胞相對(duì)活性為保藏前的61.36%。Montaini等(1995)研究發(fā)現(xiàn)，四肩突四鞭藻(Tetraselmis suecica)的細(xì)胞活力在保藏過(guò)程中會(huì)隨著其濃度的升高而下降，這與本研究結(jié)果一致。但微擬球藻(Nannochloropsis gaditana)在不同初始保藏濃度下(5和150 g/L)經(jīng)6個(gè)月的4℃避光保藏，其細(xì)胞活性均保持在90%以上(Camacho-Rodríguez et al, 2016)，這與本研究結(jié)果不同，可能是微藻的不同特性所致。

3 結(jié)論

本研究主要針對(duì)蛋白核小球藻離心濃縮和重懸工藝得到的藻膏(8×1010cells/mL)和濃縮藻液(1×108cells/mL)的保藏條件(是否巴氏殺菌處理及不同保藏溫度)進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，證實(shí)了新鮮濃縮制品在4℃條件下保藏15 d品質(zhì)最好。藻膏中的相對(duì)細(xì)胞活性、總?cè)~綠素、總類胡蘿卜素和蛋白含量分別為保藏前的48.26%、97.20%、100.00%和98.20%；濃縮藻液中的相對(duì)細(xì)胞活性、總?cè)~綠素、總類胡蘿卜素和蛋白含量分別為保藏前的61.36%、100.00%、100.00%和100.00%。本研究中蛋白核小球藻濃縮制品直接保藏15 d的時(shí)間還相對(duì)較短，在今后的研究中，應(yīng)對(duì)更長(zhǎng)保藏時(shí)間下的保藏效果及衛(wèi)生指標(biāo)變化進(jìn)行更深入的研究，以提高實(shí)際應(yīng)用的可操作性。