陳慰慰，袁小兵，許 偉

（南通大學(xué)附屬如皋醫(yī)院，江蘇省如皋市人民醫(yī)院普外科，如皋 226500）

流行病學(xué)研究證實(shí)，2010～2017 年我國乳腺癌的發(fā)病率高達(dá)283～482/10 萬人［1，3］。臨床乳腺癌的發(fā)病率可以顯著降低乳腺癌患者的生活質(zhì)量，提高乳腺癌患者的疾病發(fā)展率［3，4］。在研究乳腺癌發(fā)病機(jī)制的過程中，發(fā)現(xiàn)各種細(xì)胞因子的表達(dá)可能影響乳腺癌的惡性程度，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。黑色素瘤抗原基因（MAGE）是睪丸相關(guān)因子家族成員，其能夠通過激活癌細(xì)胞內(nèi)的腫瘤信號通路，提高乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞核DNA 的轉(zhuǎn)錄激活速度，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的臨床病理特征的進(jìn)展［4］。部分研究人員認(rèn)為，MAGE 在乳腺癌和肝細(xì)胞癌中的表達(dá)增加與乳腺癌、肝癌患者的生存密切相關(guān)［6］，但對于MAGE 的表達(dá)與乳腺癌病情發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究不足。為了揭示MAGE 的表達(dá)與乳腺癌病情發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為臨床上乳腺癌患者的診療提供理論方面的參考，本次研究選取2017 年1 月至2018 年4 月在我院治療的乳腺癌患者78 例，探討了MAGE 不同亞型在乳腺癌中的表達(dá)情況，并分析了MAGE 與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，相關(guān)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月～2018 年4 月在我院治療的乳腺癌患者78 例（乳腺癌組），年齡30～70 歲，平均年齡46.20 歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均經(jīng)病理組織學(xué)確診；（2）女性患者；（3）術(shù)前未行放化療等治療；（4）臨床病理資料完整；（4）患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；（2）臨床病理資料欠缺。同時選取乳腺良性病變患者70 例作為對照組，年齡31～69 歲，平均年齡45.50 歲。

1.2 免疫組化染色 室溫下采用石蠟進(jìn)行連續(xù)切片，脫蠟至水后采用H2O2孵育10min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，利用8%的蛋白粉封閉液（商品名：BSA 購自南京博奧生物科技公司）封閉2h，倒去封閉液后加入一抗（兔來源 濃度1：1000-1500），4℃冰箱過夜，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，加入二抗（鼠來源 1：400-500），室溫孵育20～30min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標(biāo)記物，室溫孵育10min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每次3～5min，滴加顯色劑（DAB 購自南京博奧生物科技公司），復(fù)染，脫水，封片。

1.3 結(jié)果判斷 MAGE-C1、MAGE-C2 主要表達(dá)于胞質(zhì)，部分可表達(dá)于胞核；采用半定量積分方法，染色強(qiáng)度：無著色：0 分、淡黃色：1 分、棕黃色：2 分、棕褐色：3 分；陽性細(xì)胞比例：＜5%為0 分、6%～10%為1 分、11%～20%為2 分、21%～50%為3 分、＞50%為4 分。染色強(qiáng)度和陽性比較比例得分之和，≥3 分為陽性表達(dá)。1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析，MAGE-C1、MAGE-C2 蛋白陽性表達(dá)率等比較使用χ2檢驗(yàn)，MAGE-C1 和MAGE-C2 相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組和對照組MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表達(dá) 乳腺癌組MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白陽性表達(dá)率分別為62.82%和44.87%，明顯高于對照組（P<0.05），見表1 和圖1。

表1 乳腺癌組和對照組MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表達(dá)

圖1 免疫組化染色圖（×200；A：對照組MAGE-C1陰性表達(dá)；B：對照組MAGE-C2陰性表達(dá)；C：乳腺癌組MAGE-C1陽性表達(dá)；D：乳腺癌組MAGE-C2陽性表達(dá)）

2.2 MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系 組織學(xué)分級Ⅲ級MAGE-C1 蛋白陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ級和Ⅱ級（P<0.05）；組織學(xué)分級Ⅲ級、浸潤性導(dǎo)管癌MAGE-C2 蛋白陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級、浸潤性小葉癌和乳腺髓樣癌（P<0.05）。見表2。

表2 MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系

2.3 乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達(dá)相關(guān)性分析 乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.427，P<0.05），見表3。

表3 乳腺癌MAGE-C1蛋白與MAGE-C2蛋白表達(dá)相關(guān)性分析

3 討論

環(huán)境因素和遺傳因素影響乳腺癌的發(fā)生，促進(jìn)乳腺癌臨床病理特征的進(jìn)展展［7，8］。乳腺癌作為生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其生存期不到46 個月，包括綜合治療后3 年內(nèi)病死率仍可超過25%［9，10］。另一方面，臨床研究缺乏有效的生物活性血清分子對乳腺癌進(jìn)行早期診斷，本次研究揭示了腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)陽性率問題，可以為揭示乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，為乳腺癌的靶向免疫治療提供依據(jù)，同時也可以為乳腺癌的早期高危人群的血清學(xué)篩查提供依據(jù)。

生物制劑濃度的變化對促進(jìn)癌細(xì)胞早期、中期和晚期核異質(zhì)性的發(fā)展起著重要作用，它能影響患者的生存和預(yù)后，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性。MAGE-C1 主要存在于睪丸組織、胚胎組織及部分神經(jīng)組織中，其對于HIPPO 信號通路的激活增加乳腺癌上皮細(xì)胞DNA 轉(zhuǎn)錄的風(fēng)險，增強(qiáng)了啟動子并激活了增強(qiáng)子，提高乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的浸潤粘附能力［11］。MAGE-C2 主要存在于部分神經(jīng)組織及間質(zhì)組織中，其能夠與乳腺癌細(xì)胞膜內(nèi)的轉(zhuǎn)錄基因的結(jié)合，促進(jìn)其甲基化的修飾，致使乳腺癌上皮細(xì)胞錯配修復(fù)能力下降，癌基因突變風(fēng)險增加［12-13］。

本研究通過探討乳腺癌病灶組織中MAGE-C1、M A G E-C 2 的表達(dá)分析可見，在病例組患者中，MAGE-C1、MAGE-C2 的表達(dá)陽性率明顯升高，高于乳腺良性病變組織，差異明顯，提示了MAGE-C1、MAGE-C2 的高表達(dá)均能夠參與到乳腺癌的病情進(jìn)展過程。通過收集各種相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要是由于MAGE-C1 和MAGE-C2 的幾方面作用［14］：（1）MAGE-C1 的上升能夠?qū)е氯橄侔┘?xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)因子表達(dá)濃度的上升，增加了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄激活程度；（2）MAGE-C2 的表達(dá)上升能夠?qū)е掳┘?xì)胞內(nèi)AKT 或者NF-KB 信號通路的激活，增加了乳腺癌細(xì)胞啟動子或者增強(qiáng)子的上調(diào)程度。 易彤波等［15］研究者也認(rèn)為，MAGE-C 在乳腺癌患者中的陽性表達(dá)率高于平均水平，尤其是腫瘤負(fù)荷明顯或轉(zhuǎn)移率高的患者。通過免疫組化染色分析研究可見，在乳腺癌細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域，MAGE-C1、MAGE-C2 的染色程度可進(jìn)一步的加深，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表達(dá)可能影響到了乳腺癌細(xì)胞的形態(tài)。乳腺癌相關(guān)指標(biāo)與臨床病理特征的相關(guān)性研究在探討乳腺癌相關(guān)指標(biāo)與臨床病理特征相關(guān)性的過程中，發(fā)現(xiàn)在組織學(xué)分級較晚的患者中，MAGE-C1 的表達(dá)明顯上升，而在組織學(xué)分級較晚或浸潤性導(dǎo)管癌的患者中，MAGE-C2 的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表達(dá)與乳腺癌患者的臨床病理特征的病情進(jìn)展緊密相關(guān)，這主要由于二者的表達(dá)陽性率的上升，能夠?qū)е氯橄侔┘?xì)胞排列極性的改變，提高了癌細(xì)胞的組織學(xué)分級。但部分研究者還認(rèn)為MAGE-C1、MAGE-C2 的表達(dá)與乳腺癌患者的臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)［16］，本次研究并未相關(guān)結(jié)論，考慮可能與相關(guān)細(xì)胞因子的檢測靈敏度的差別有關(guān)。最后本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌MAGE-C1 蛋白與MAGE-C2 蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，提示了二者在促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用。

綜上所述，在乳腺癌患者中，MAGE-C1、MAGE-C2的表達(dá)陽性率可明顯的上升，同時M A G E-C 1、MAGE-C2 的表達(dá)與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。在后續(xù)的研究中我們將繼續(xù)探討MAGE-C1 和MAGE-C2 在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系。