吳 丹，張 巖，徐海洋，徐淋香,3**

(1.江蘇海洋大學(xué)，江蘇連云港 222005；2.江蘇省海洋生物資源與環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222005；3.江蘇省海洋生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇連云港 222005)

0 引言

多糖是由十種或十種以上單糖通過糖苷鍵連接而成的聚合物，廣泛分布于自然界中，具有十分重要的地位。微生物胞外多糖是細(xì)菌、真菌和藻類分泌到細(xì)胞壁外，且在生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用的天然大分子[1]。與動(dòng)植物多糖相比，微生物胞外多糖不受地理位置、周圍環(huán)境的影響，可大規(guī)模工業(yè)化發(fā)酵，并具有成本低、易提取、無毒、安全性高等優(yōu)點(diǎn)[2,3]。近年來，人們對(duì)微生物胞外多糖進(jìn)行廣泛而深入的研究，探索胞外多糖的多種生物學(xué)功能，包括去除和吸收重金屬離子[4,5]、抗氧化[6,7]、抗腫瘤[8,9]、抗炎[10]、抑制黑色素形成[11]和益生元活性[12]等方面。目前，胞外多糖已在醫(yī)藥和食品工業(yè)中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。在醫(yī)藥領(lǐng)域中，由LactobacillussakeiProbio 65[13]產(chǎn)生的胞外多糖可通過抑制酪氨酸酶活性來減少黑色素的生成，進(jìn)而降低黑色素瘤的發(fā)生率[14,15]；胞外多糖還可為抗腫瘤藥的制備提供支持，如膠紅酵母胞外多糖組分REPS2-A能有效抑制肝癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞Hep G2凋亡[16]。在食品工業(yè)中，經(jīng)黃單胞桿菌發(fā)酵生成的黃膠原是一種應(yīng)用廣泛的胞外多糖，它可作為增稠劑、乳化劑、懸浮劑等添加在乳制品、飲料制品、調(diào)味品中，以提高食品穩(wěn)定性及品質(zhì)[17]。目前，有少數(shù)學(xué)者對(duì)微桿菌屬(Microbacteriusp.)胞外多糖進(jìn)行研究，例如MicrobacteriumTL13產(chǎn)生的胞外多糖能夠吸附鉻、銅、鎳和鈷等重金屬離子，具有生物修復(fù)重金屬污染廢水和土壤的潛力[18]；產(chǎn)自海洋MicrobacteriumFSW-25的胞外多糖具有比黃原膠更高的抗氧化活性，可作為一種潛在的抗氧化劑[19]。但相對(duì)而言，目前對(duì)微桿菌屬發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖活性的研究仍然較少。

本研究采用來源于中國(guó)連云港水灣濕地的一株微桿菌XL1發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖。首先通過單因素法優(yōu)化產(chǎn)胞外多糖的培養(yǎng)基成分和發(fā)酵條件；然后，探究微桿菌XL1胞外多糖的吸濕保濕性能、抗氧化活性以及抑制酪酸酶活性。本研究旨在豐富微桿菌胞外多糖活性研究，為微桿菌XL1胞外多糖在化妝品和食品行業(yè)的應(yīng)用提供理論依據(jù)，并為將來開展胞外多糖的結(jié)構(gòu)表征、功能機(jī)制等研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株：微桿菌XL1篩選于中國(guó)連云港水灣濕地。

試劑：FeSO47H2O、K2PO4、MgCl2、蔗糖、瓊脂粉、酵母提取物、氯仿、正丁醇、葡萄糖、果糖、麥芽糖、胰蛋白胨、尿素、硫酸銨、殼聚糖、甘油、透明質(zhì)酸、碳酸鉀、無水乙醇、H2O2、FeCl2、EDTA、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，維生素C (Vc)、水楊酸、菲洛嗪、酪氨酸酶、左旋多巴、曲酸購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

儀器：1510酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技有限公司)，SPX-150B-Z生化培養(yǎng)箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)，M1282-0006恒溫振蕩器[艾本德(上海)國(guó)際貿(mào)易有限公司]，JXN-26高速離心機(jī)(美國(guó)貝克曼庫爾特有限公司)，101A-3數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海卓爵儀器有限公司)，HH-4智能數(shù)顯恒溫水浴鍋(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 方法

1.2.1 種子液制備

將微桿菌XL1接種到固體培養(yǎng)基(FeSO47H2O 0.01 g/L、CaCl20.1 g/L、K2PO41 g/L、MgCl20.15 g/L、NaNO33 g/L、蔗糖20 g/L，瓊脂粉15 g/L，pH值為7.0)中，于30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 d，從固體培養(yǎng)基上挑取單菌落接種于種子培養(yǎng)基中(FeSO47H2O 0.01 g/L、CaCl20.1 g/L、K2PO41 g/L、MgCl20.15 g/L、酵母提取物3 g/L、蔗糖20 g/L，pH值為7.0)中，250 r/min，30℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2 胞外多糖的制備與提取

將種子液以4%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基(FeSO47H2O 0.01 g/L、CaCl20.1 g/L、K2PO41 g/L、MgCl20.15 g/L、酵母提取物3 g/L、蔗糖50 g/L，pH值為7.0)中，在250 r/min、30℃條件下發(fā)酵24 h。發(fā)酵液于8 000 r/min離心30 min去除菌體后，加入兩倍體積無水乙醇，4℃攪拌過夜，再通過8 000 r/min離心15 min得到胞外多糖，放入鼓風(fēng)干燥箱中60℃干燥至恒重，稱其質(zhì)量。

1.2.3 胞外多糖中間層蛋白的去除

采用Sevag法[20]對(duì)胞外多糖初步提純，將Sevag液(氯仿∶正丁醇，V∶V=4∶1)與3%胞外多糖水溶液以體積比1∶1混合，劇烈振蕩30 min后，8 000 r/min離心15 min，去除中間層蛋白，重復(fù)3-4遍。使用BCA蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白含量[21]，蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1.128 9x+0.126，R2=0.998 1。對(duì)純化后的胞外多糖進(jìn)行吸濕保濕、抗氧化和抑制酪氨酸酶活性實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 微桿菌XL1胞外多糖發(fā)酵的單因素實(shí)驗(yàn)

(1)碳源種類

將種子液以4%的接種量接種到含有5%不同碳源(蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖)的發(fā)酵培養(yǎng)基中，其他成分不變，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、溫度為30℃、pH值為7的條件下發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(2)氮源種類

將種子液以4%的接種量接種到含有0.3%不同氮源(酵母提取物、胰蛋白胨、尿素、硝酸鈉、硫酸銨)的發(fā)酵培養(yǎng)基中，其他成分不變，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、溫度為30℃、pH值為7的條件下發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(3)碳源含量

將種子液以4%的接種量接種到不同蔗糖含量(5%、10%、15%、20%、25%)的發(fā)酵培養(yǎng)基中，其他成分不變，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、溫度為30℃、pH值為7的條件下發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(4)氮源含量

將種子液以4%的接種量接種到不同酵母提取物含量(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%)的發(fā)酵培養(yǎng)基中，其他成分不變，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、溫度為30℃、pH值為7的條件下，發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(5)發(fā)酵溫度

將種子液以4%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、不同發(fā)酵溫度(10，15，20，25，30℃)、pH值為7的條件下發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(6)培養(yǎng)基初始pH

將種子液以4%的接種量接種到不同初始pH(6，7，8，9，10)的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、溫度為20℃條件下，發(fā)酵24 h，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

(7)發(fā)酵時(shí)間

將種子液以4%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)速為250 r/min、發(fā)酵溫度為20℃、pH值為8的條件下，發(fā)酵不同時(shí)間(8，16，24，32，40 h)，進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)，按1.2.2節(jié)的方法制備定量胞外多糖。

1.2.5 吸濕、保濕性能測(cè)定

(1)樣品預(yù)處理

將1.2.3節(jié)制得的胞外多糖研成粉末，與殼聚糖、甘油和透明質(zhì)酸一同放入鼓風(fēng)干燥箱中60℃烘干至恒重，備用。

(2)吸濕性試驗(yàn)

分別稱取0.2 g胞外多糖、殼聚糖、甘油和透明質(zhì)酸，每種物品各6份，其中3份樣品放入有飽和碳酸鉀溶液(相對(duì)濕度為43%)的密閉容器中，另外3份樣品放入有飽和硫酸銨溶液(相對(duì)濕度為81%)的密閉容器中，分別稱取0，1，2，4，8，16，24 h時(shí)的樣品重量。根據(jù)公式計(jì)算吸濕率：

式中，M0為放入0 h樣品質(zhì)量(g)，M1為放入不同時(shí)間后樣品質(zhì)量(g)。

(3)保濕性試驗(yàn)

分別稱取0.2 g胞外多糖、殼聚糖、甘油和透明質(zhì)酸，每種物品各3份，先放置于有去離子水溶液的密閉容器中24 h，然后將樣品放入有飽和碳酸鉀溶液的密閉容器中，分別稱取0，1，2，4，6，8 h時(shí)的樣品重量。根據(jù)公式計(jì)算保濕率：

式中，N0為樣品最初質(zhì)量(g)，N1為放置在去離子水中24 h后樣品質(zhì)量(g)，N2為放置在飽和碳酸鉀溶液中不同時(shí)間的樣品質(zhì)量(g)。

1.2.6 抗氧化活性測(cè)定

(1)清除DPPH自由基能力測(cè)定

取100 μL不同濃度(0，0.5，1，2，4，8，10 mg/mL)胞外多糖與100 μL 0.5 mmol/L 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)溶液(無水乙醇配制)混勻，室溫避光反應(yīng)30 min后，取100 μL反應(yīng)液于96孔板中，在517 nm處測(cè)定吸光度值，平行測(cè)定3次[20]，使用去離子水、Vc分別作為空白和陽性對(duì)照。根據(jù)公式計(jì)算DPPH清除率：

式中，A0為空白對(duì)照吸光度值，Ai為樣品溶液加DPPH溶液吸光度值，Aj為樣品溶液加無水乙醇吸光度值。

(2)清除羥基自由基能力的測(cè)定

測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[22]。將9 mmol/L FeSO47H2O、9 mmol/L水楊酸(無水乙醇配制)、樣品溶液、8.8 mmol/L H2O2按體積比1∶1∶1∶1的比例混合，于37℃水浴15 min，取100 μL反應(yīng)液于96孔板中，在510 nm處測(cè)定吸光度值，平行測(cè)定3次，使用去離子水、Vc分別作為空白和陽性對(duì)照。樣品溶液為不同濃度(0，0.5，1，2，4，8，10 mg/mL)的胞外多糖溶液。根據(jù)公式計(jì)算羥基自由基清除率：

式中，B0為空白對(duì)照吸光度值，Bi為樣品吸光度值，Bj為去離子水代替H2O2溶液的吸光度值。

(3)鐵離子螯合能力測(cè)定

測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[23]。向1 mL不同濃度(0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mg/mL)的胞外多糖溶液中加入0.1 mL 2 mmol/L的FeCl2溶液和0.2 mL 5 mmol/L的菲洛嗪試劑，室溫反應(yīng)15 min后于562 nm處測(cè)定吸光度值，平行測(cè)定3次，使用去離子水、EDTA分別作為空白和陽性對(duì)照。根據(jù)公式計(jì)算螯合率：

式中，C0為空白對(duì)照吸光度值，C1為樣品吸光度值。

1.2.7 酪氨酸酶抑制活性的測(cè)定

測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[24]。取0.5 mL左旋多巴溶液(2 mmol/L)與0.4 mL磷酸鹽緩沖液(25 mmol/L，pH值為6.8)混合，加入不同濃度(0，2，4，6，8，10 mg/mL)的胞外多糖溶液，37℃孵育10 min后，加入0.05 mL酪氨酸酶液(500 U/mL)，37℃孵育30 min后，于475 nm處記錄吸光值，平行測(cè)定3次，使用去離子水、曲酸分別作為空白和陽性對(duì)照。根據(jù)抑制率公式計(jì)算：

式中，X1為樣品吸光值，X2為樣品背景吸光值，X3為空白對(duì)照吸光值，X4為空白對(duì)照的背景吸光值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用OriginPro 2018軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖發(fā)酵的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同發(fā)酵條件對(duì)微桿菌XL1胞外多糖產(chǎn)量的影響如圖1所示。從圖1a可以看出，幾種碳源中蔗糖對(duì)胞外多糖產(chǎn)量影響最為顯著，達(dá)到28 g/L，是以果糖(1.5 g/L)作為碳源的18倍，因此，蔗糖為最佳碳源。從圖1b可以看出，以酵母提取物、胰蛋白胨、尿素、硝酸鈉、硫酸銨為氮源的多糖產(chǎn)量分別為26，21.5，22.5，22，22 g/L，選擇產(chǎn)量最高的氮源，即酵母提取物為最佳氮源。接著分別優(yōu)化了培養(yǎng)基中最佳碳氮源，即蔗糖和酵母提取物的最適添加量，分別為20%和0.3%(圖1c,d)，蔗糖含量為20%時(shí)產(chǎn)量達(dá)到最高75 g/L。但此后隨蔗糖含量繼續(xù)增加，胞外多糖產(chǎn)量反而下降，這可能是由于培養(yǎng)基中蔗糖含量過高，導(dǎo)致菌體內(nèi)外滲透壓失衡，其生長(zhǎng)受到抑制。后續(xù)又優(yōu)化了培養(yǎng)基的發(fā)酵溫度、初始pH以及發(fā)酵時(shí)間，微桿菌XL1在溫度為15-25℃(圖1e)時(shí)，多糖產(chǎn)量較高，其中在20℃條件下產(chǎn)量達(dá)到最高值80 g/L；該菌適合在中性偏堿的環(huán)境中大量產(chǎn)糖，在pH值為8 (圖1f)時(shí)達(dá)到最高，為91 g/L；發(fā)酵培養(yǎng)基中多糖產(chǎn)量隨發(fā)酵時(shí)間增加而增多(圖1g)，在24 h達(dá)到最高值92 g/L，之后隨著發(fā)酵時(shí)間增加，多糖產(chǎn)量變化不大。因此，經(jīng)過對(duì)發(fā)酵條件單因素優(yōu)化后，得到最佳培養(yǎng)條件如下：蔗糖為碳源、酵母提取物為氮源、20%蔗糖、0.3%酵母提取物、溫度20℃、pH值為8.0、發(fā)酵時(shí)間24 h。

圖1 微桿菌XL1胞外多糖產(chǎn)量的單因素優(yōu)化結(jié)果

2.2 吸濕保濕性能測(cè)定

在一定相對(duì)濕度(43%和81%)的密閉環(huán)境中，所有樣品的吸濕率都隨著時(shí)間增加而增大，但是，相對(duì)濕度越大，樣品在相同時(shí)間達(dá)到的吸濕率越高。在相對(duì)濕度為81%時(shí)，甘油吸濕率隨處理時(shí)間增加一直上升，并在24 h時(shí)達(dá)到73.16%，遠(yuǎn)高于胞外多糖的25.38%；但此時(shí)胞外多糖的吸濕率比透明質(zhì)酸、殼聚糖分別高出2.61%、10.18%(圖2a、b)。因此，雖然微桿菌XL1胞外多糖的吸濕性能比甘油差，但與透明質(zhì)酸、甘油相比，仍具有良好的吸濕性能。

在保濕性能實(shí)驗(yàn)中，利用相對(duì)濕度由高到低的變化，觀察樣品的保濕性能。在前2 h，胞外多糖、殼聚糖和透明質(zhì)酸的保濕率均有一定幅度下降，其中，甘油的保濕率大幅度下降，失水速率遠(yuǎn)超其他3種樣品；在2 h之后，各樣品的保濕率基本保持穩(wěn)定(圖2c)。相比較而言，這4種樣品的保濕性能排序?yàn)闅ぞ厶?胞外多糖>透明質(zhì)酸>甘油。因此，微桿菌XL1胞外多糖同樣具有較好的保濕性能，在化妝品行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。

圖2 胞外多糖吸濕率(a、b)、保濕率(c)與時(shí)間變化曲線

2.3 抗氧化活性

2.3.1 DPPH自由基的清除能力

如圖3所示，在一定范圍內(nèi)，隨著濃度增大，微桿菌XL1胞外多糖和Vc對(duì)DPPH自由基的清除率越高。其中，陽性對(duì)照Vc濃度為1 mg/mL時(shí)，清除率即可達(dá)到最大值96%，且在此后保持穩(wěn)定。胞外多糖對(duì)DPPH自由基的清除作用在8 mg/mL時(shí)達(dá)到最大，清除率達(dá)到72%，其IC50值為1.2 mg/mL。因此，微桿菌XL1胞外多糖對(duì)DPPH自由基具有一定的清除效果。

圖3 胞外多糖的DPPH自由基清除活性

2.3.2 羥基自由基的清除能力

如圖4所示，微桿菌XL1胞外多糖和Vc隨著濃度增大，對(duì)羥基自由基的清除率均呈現(xiàn)逐漸升高再趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)。陽性對(duì)照Vc濃度為1 mg/mL時(shí)，清除率即可達(dá)到最高值97%。胞外多糖在8 mg/mL時(shí)，對(duì)羥基自由基清除率達(dá)到最高，為93%，比Vc僅低5%，其IC50值為0.8 mg/mL。因此，微桿菌XL1胞外多糖對(duì)羥基自由基具有較好的清除效果。

圖4 胞外多糖的羥基自由基清除活性

2.3.3 鐵離子螯合能力

通過與EDTA比較，評(píng)價(jià)微桿菌XL1胞外多糖對(duì)鐵離子的螯合作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照EDTA在0.1 mg/mL時(shí)，對(duì)鐵離子的螯合率達(dá)到最大值99%；胞外多糖在濃度為0.6 mg/mL時(shí)，對(duì)鐵離子的螯合率達(dá)到最大值96%，其IC50值為0.3 mg/mL比陽性對(duì)照EDTA僅低3%(圖5)。因此，微桿菌XL1胞外多糖對(duì)鐵離子具有較好的螯合作用。

圖5 胞外多糖的鐵離子螯合能力

2.4 酪氨酸酶活性的抑制效果

酪氨酸酶是黑色素形成的主要原因，研究其酶活性抑制具有重要意義。如圖6所示，曲酸和微桿菌XL1胞外多糖對(duì)酪氨酸酶的抑制率都具有劑量依賴關(guān)系，隨著濃度增加抑制速率變緩。陽性對(duì)照曲酸在10 mg/mL時(shí)，對(duì)酪氨酸酶抑制活性達(dá)到最大值80%；胞外多糖濃度為60 mg/mL時(shí)，酪氨酸酶抑制活性達(dá)到55%，胞外多糖的IC50值為14 mg/mL。雖然胞外多糖對(duì)酪氨酸酶活性的抑制性能與曲酸仍然有一定差距，但是胞外多糖作為純天然產(chǎn)物，具有安全、綠色無污染等優(yōu)點(diǎn)。因此，微桿菌XL1胞外多糖在抑制黑色素形成方面仍具有應(yīng)用潛力。

圖6 曲酸(a)和胞外多糖(b)的酪氨酸酶抑制活性

3 討論

微桿菌XL1胞外多糖發(fā)酵優(yōu)化后產(chǎn)量達(dá)到92 g/L，是未優(yōu)化前的2.3倍。比較而言，MicrobacteriumTL13多糖產(chǎn)量為36.25 g/L[18]，MicrobacteriumFSW-25多糖產(chǎn)量為34.64 g/L[19]，微桿菌XL1是一株高產(chǎn)胞外多糖的菌株。在優(yōu)化發(fā)酵條件過程中，蔗糖及蔗糖添加量對(duì)胞外多糖產(chǎn)量的提升至關(guān)重要，以蔗糖作為碳源的產(chǎn)量是果糖的18倍。Han等[25]也是以蔗糖作為唯一碳源來優(yōu)化微生物發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖，使產(chǎn)量得到大幅度提升。后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn)微生物在發(fā)酵過程中分泌出特定水解蔗糖合成果聚糖的蔗糖果糖酶[26]。因此，推測(cè)微桿菌XL1在發(fā)酵過程中分泌蔗糖果糖酶合成果聚糖，而且蔗糖含量越高酶活越高，故下一步可對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基中多糖合成酶及胞外多糖組分進(jìn)行研究。

透明質(zhì)酸吸濕保濕性能優(yōu)良，被廣泛應(yīng)用于化妝品、醫(yī)療美容中，而胞外多糖的吸濕保濕性能與透明質(zhì)酸相似，在化妝品行業(yè)應(yīng)用前景廣泛。微桿菌XL1胞外多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性，對(duì)羥基自由基的清除率和鐵離子的螯合率分別達(dá)到93%和96%，與Vc抗氧化效果幾乎一致，與MicrobacteriumFSW-25[19]胞外多糖相比具有更好的抗氧化效果，可作為抗氧化劑應(yīng)用于食品行業(yè)中。目前國(guó)內(nèi)對(duì)微生物胞外多糖的酪氨酸酶抑制活性研究較少，微桿菌XL1胞外多糖對(duì)酪氨酸酶的抑制率可達(dá)55%，雖然與EDTA的酪氨酸酶抑制效果有一定差距，但是微生物胞外多糖作為天然生物大分子，具有安全無毒、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。此外，為滿足實(shí)際應(yīng)用的需求，通過化學(xué)修飾可以改變多糖官能團(tuán)，如硫酸化、羧甲基化、乙?；确椒?，從而獲得具有更高或新的生物活性的多糖衍生物[27]。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)有望通過對(duì)微桿菌XL1胞外多糖進(jìn)行化學(xué)修飾，增強(qiáng)其酪氨酸酶抑制活性。

4 結(jié)論

單因素法優(yōu)化結(jié)果顯示：微桿菌XL1發(fā)酵產(chǎn)胞外多糖的最佳培養(yǎng)基成分為FeSO47H2O 0.01 g/L、CaCl20.1 g/L、K2PO41 g/L、MgCl20.15 g/L、酵母提取物3 g/L、蔗糖200 g/L，pH值8.0；最佳培養(yǎng)條件為接種量4%，20℃搖床培養(yǎng)24 h。微桿菌XL1胞外多糖產(chǎn)量最高可達(dá)92 g/L，該胞外多糖具有優(yōu)良的吸濕保濕性能、抗氧化活性以及抑制酪氨酸酶活性，可作為一種天然活性物質(zhì)在化妝品、食品行業(yè)進(jìn)一步開發(fā)利用，并有望擴(kuò)大規(guī)模進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。