邱彤

（錦州市全民健康保障中心，遼寧 錦州 121000）

血液安全一直是獻(xiàn)血站永恒不變的主題，至1998 年頒布《中華人民共和國(guó)獻(xiàn)血法》以來(lái)，獻(xiàn)血站不斷完善質(zhì)量管理體系。隨著醫(yī)療檢測(cè)設(shè)備的更新，相關(guān)檢測(cè)試劑不斷組合優(yōu)化，靈敏度也不斷提升[1]。近年來(lái)，無(wú)償獻(xiàn)血的招募策略也不斷創(chuàng)新，醫(yī)療機(jī)構(gòu)中臨床用血質(zhì)量要求逐步提高，輸血安全性、有效率成為提高治療的重要環(huán)節(jié)。雖然輸血引發(fā)的傳染病事件明顯減少，但仍需加強(qiáng)保障醫(yī)護(hù)和患者的安全。臨床中ELISA的檢測(cè)仍存在較長(zhǎng)的“窗口期”，在慢性攜帶、變異、靜默感染等低病毒載量檢測(cè)中存在漏檢情況，因此，還需提高血液篩查的高效手段[2]。核酸檢測(cè)（nucleicacid test，NAT）是一種新型的血液篩查技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于國(guó)外臨床，可有效彌補(bǔ)ELISA檢測(cè)的不足，將其用在獻(xiàn)血志愿者血樣檢測(cè)中，對(duì)保障輸血安全、縮短血液檢測(cè)的“窗口期”發(fā)揮積極作用。但其在我國(guó)的使用尚處于起步階段?；诖?，本研究旨在探討NAT 在無(wú)償獻(xiàn)血中對(duì)HBV 的篩查價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本中心2017 年1 月至2019 年12 月無(wú)償獻(xiàn)血者150 名作為研究對(duì)象，其中男67 名，女83 名；年齡18～48 歲，平均（30.58±10.27）歲。本研究已通過(guò)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[3]相關(guān)規(guī)定；年齡18～50 歲；意識(shí)清晰、溝通順利，無(wú)精神障礙者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有遺傳病史者；經(jīng)期女性志愿者。

1.2 方法 血液樣本采集：所有血液樣本均取3份，約5 mL依次置于抗凝管（EDTA-K2）和核酸專用管中，提前做好樣管標(biāo)記。4 ℃下3 000 r/min，1 600 g離心20 min，保存于2～8 ℃環(huán)境下，于48 h 內(nèi)行完成檢測(cè)。如實(shí)記錄樣本采集日期、編碼等信息。

儀器設(shè)備：離心機(jī)、多功能酶標(biāo)儀、STAR全自動(dòng)加樣儀（瑞士，帝肯）、COBAS-201 核酸檢測(cè)儀（美國(guó)，羅氏）、BEP全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)（瑞士，帝肯）、COBAS AmpliPrep 全自動(dòng)核酸提取儀、COBASAmpliPrep 全自動(dòng)PCR 分析儀（美國(guó)，羅氏）。

樣本檢測(cè)：所有操作均由專人嚴(yán)格遵守設(shè)備說(shuō)明進(jìn)行；①ELISA檢測(cè)：每份血液標(biāo)本均開展HBsAg 檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和室內(nèi)質(zhì)控品組。判定標(biāo)準(zhǔn)如下：陽(yáng)性，樣本光密度值-臨界值（S/CO）≥1；此時(shí)血樣檢測(cè)結(jié)果不合標(biāo)準(zhǔn)；S/CO為0.5～1.0為灰區(qū)，此時(shí)檢測(cè)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)；陰性：S/CO＜0.5，檢測(cè)結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)。②NAT 檢測(cè)：混樣法，每級(jí)設(shè)置6 個(gè)混合樣本，同時(shí)設(shè)定內(nèi)對(duì)照，混合測(cè)定為陰性者即為陰性，混合測(cè)定結(jié)果為陽(yáng)性者再進(jìn)行拆分；拆分后檢測(cè)為陰性即為NAT 陰性，反之為NAT 陽(yáng)性。③追蹤隨訪：對(duì)于NAT 陽(yáng)性、核酸陽(yáng)性，但“兩對(duì)半”和核酸均為陰性者開展追蹤隨訪，于2 個(gè)月后進(jìn)行重新采樣。

1.3 觀察指標(biāo) 參考ECLIA 的檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)兩種檢測(cè)方法HBV的準(zhǔn)確度、靈敏性和特異性。敏感度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）。特異度=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

ECLIA 檢測(cè)中，血液樣本 HBV 陽(yáng)性 37 份 ，陰性 113 份，陽(yáng)性率為24.67%。NAT檢測(cè)準(zhǔn)確度為97.30%（36/37），靈敏度為100.00%（10/10），特異度為96.30%（26/27），見表1；ELISA 法準(zhǔn)確度為 75.68%（28/37），靈敏度為 60.00%（6/10），特異度為77.78%（21/27），見表2；兩種檢測(cè)方法準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.400、5.000、4.103，P=0.007、0.025、0.043）。

表1 NAT中HBV檢測(cè)情況

表2 ELISA中HBV檢測(cè)情況

3 討論

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）簡(jiǎn)稱“乙肝”，是因乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）所引起的慢性肝炎疾病，具有傳染性，主要通過(guò)性接觸、血液、母嬰進(jìn)行傳播，目前尚無(wú)治愈的可能性。AIDS 臨床主要表現(xiàn)為乏力、惡心、虛弱、厭油等癥狀，且癥狀不典型，一旦被HBV感染，通常會(huì)經(jīng)1～6 個(gè)月的潛伏期而發(fā)展為乙肝，期間病毒傳播的可能性最大[4]。HBV 由禽嗜肝和正嗜肝DNA 病毒組成，其中后者是誘發(fā)乙肝的主要菌屬。乙肝患者的血清學(xué)檢查一直是肝炎病毒的檢查金標(biāo)準(zhǔn)，主要通過(guò)檢測(cè)病毒表面抗原發(fā)現(xiàn)病毒的存在。HBV常用檢測(cè)指標(biāo)有HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 和抗-HBc，即俗稱的“乙肝五項(xiàng)”。其中前三項(xiàng)為陽(yáng)性者即為“大三陽(yáng)”，后三項(xiàng)為陽(yáng)性者即“小三陽(yáng)”[5]。

截至2011年，全球HBV攜帶者近3億，我國(guó)占30%。近年來(lái)，隨著世界衛(wèi)生組織、聯(lián)合國(guó)所部署的乙肝育齡婦女預(yù)防開展，母嬰傳播途徑已明顯被阻斷。最近的一項(xiàng)調(diào)查[6]發(fā)現(xiàn)，發(fā)展中國(guó)家的血液采集樣本中，5%～20%存在HBV、丙型肝炎、HIV 3 種病毒，且因輸血或非安全性注射所造成的HBV感染人數(shù)年均高達(dá)1 600萬(wàn)人，嚴(yán)重威脅我國(guó)人民的健康和社會(huì)的發(fā)展。為阻斷HBV的血液傳播，其最重要、最主要的途徑即提高獻(xiàn)血群體的血液篩查質(zhì)量。安全輸血的重要環(huán)節(jié)在于受篩查病毒的“窗口期”，即從被感染到能檢測(cè)出體內(nèi)對(duì)應(yīng)抗體的時(shí)間間隔，因無(wú)法檢測(cè)到抗體，窗口期中臨床不能及時(shí)確診，如患者的血液中已帶有病毒，并有傳染性，僅通過(guò)血液檢測(cè)無(wú)法檢出。

ECLIA 主要通過(guò)三聯(lián)吡啶釕與蛋白質(zhì)、半抗原激素、核酸等化合物進(jìn)行結(jié)合，檢查乙肝五項(xiàng)指標(biāo)，其免疫檢驗(yàn)期間無(wú)外來(lái)光源干擾，消除了光散射、噪音干擾，是HBV 標(biāo)志物的檢驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)[7]。ELISA作為臨床常用的HBV診斷方法，主要檢測(cè)HBsAg 指標(biāo)，憑借操作方便、快捷、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)在血液篩查中廣泛應(yīng)用。但由于HBV隱匿性、窗口期等問題，該技術(shù)的漏檢系數(shù)較高。作為一種新型的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，NAT 能補(bǔ)充血清學(xué)診斷中的缺陷。NAT 通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增后，經(jīng)PCR法進(jìn)行體外自然狀態(tài)下DNA分子復(fù)制，模擬形成核酸擴(kuò)增，快速定量樣本中HBV-DNA 的水平，直接反映HBV 的感染情況，該檢測(cè)方法本身較敏感，特異性、靈敏度均較高[8]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，NAT可將40%～75%HBV、丙型肝炎、HIV 病毒的“窗口期”縮短為25～60 d、7～15 d 和9～36 d內(nèi)，從而彌補(bǔ)ELISA法的缺陷，避免被漏檢的病毒感染者在血液輸送治療中出現(xiàn)病毒傳播、感染風(fēng)險(xiǎn)，明顯降低病毒經(jīng)輸血而造成的傳播風(fēng)險(xiǎn)，保障輸血治療安全性。本研究結(jié)果顯示，NAT檢測(cè)準(zhǔn)確率為97.30%、靈敏度為100.00%、特異性為96.30%，均高于對(duì)照組的75.68%、60.00%、77.78%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表明NAT 檢測(cè)顯著優(yōu)于ELISA 檢測(cè)；研究中的150 份樣本，共10 份HBV-DNA 陽(yáng)性標(biāo)本，無(wú)HCV-RNA及HIV-RNA陽(yáng)性情況，其原因可能是由于樣本在收集至檢測(cè)期間受溫度影響，病毒RNA 被降解所致；此外，本實(shí)驗(yàn)中所檢測(cè)的核酸標(biāo)本量較小，應(yīng)加大檢測(cè)力度，加強(qiáng)樣本從采集至檢測(cè)每個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量管控。

綜上所述，無(wú)償獻(xiàn)血血液標(biāo)本HBV篩查中，NAT檢測(cè)價(jià)值高于ELISA，可提高HBV檢出率，且特異性強(qiáng)、靈敏度高，值得臨床推廣應(yīng)用。