胡春霞，計(jì)曉蘭，繆鑫霞

（蘇州市吳江區(qū)兒童醫(yī)院兒內(nèi)科，江蘇 蘇州 215200）

支氣管哮喘是小兒呼吸系統(tǒng)的常見病，其是一種以氣道高反應(yīng)性和可逆性氣道狹窄為特征的氣道慢性炎癥，且肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞共同參與慢性氣道炎癥反應(yīng)過程。肺炎支原體（MP）是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，小兒在感染了MP后，不僅會(huì)誘發(fā)并加重呼吸道上黏膜細(xì)胞慢性炎癥，同時(shí)也可對(duì)機(jī)體的免疫功能產(chǎn)生影響，主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞表達(dá)水平異常，同時(shí)免疫球蛋白水平也會(huì)相應(yīng)改變[1]。有研究表明，MP感染與小兒支氣管哮喘存在相關(guān)性，但MP感染誘發(fā)或加重小兒支氣管哮喘的作用機(jī)制尚未完全明確，多認(rèn)為支氣管哮喘可能與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān)[2-3]。基于此，本文對(duì)小兒支氣管哮喘合并MP感染的免疫功能指標(biāo)的改變及臨床意義展開探討，旨在為臨床治療及預(yù)后判斷提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取蘇州市吳江區(qū)兒童醫(yī)院2019年12月至2021年4月收治的120例支氣管哮喘患兒作為觀察組，按照血漿MP抗體（MP-IgM）表達(dá)水平分為MP-IgM陽性組（67例）及MP-IgM陰性組（53例），其中MP-IgM的檢測(cè)結(jié)果按照明膠顆粒載體的間接凝集試驗(yàn)法判斷，若MP-IgM滴度≥?1∶80為陽性；另選取同期行健康體檢的健康兒童60例作為對(duì)照組，開展前瞻性研究。對(duì)照組研究對(duì)象中男童、女童分別為32、28例；年齡2～13歲，平均（5.24±1.09）歲。MP-IgM陽性組中男、女患兒分別為36、31例；年齡2～10歲，平均（5.14±1.22）歲。MP-IgM陰性組中男、女患兒分別為28、25例；年齡1～11歲，平均（5.20±1.32）歲。3組研究對(duì)象一般資料相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），組間具有可比性。支氣管哮喘患兒納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《兒童支氣管哮喘診斷和防治指南（2016年版）》[4]中關(guān)于支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)者；年齡在14歲以下者；在入組前4周內(nèi)未接受糖皮質(zhì)激素或者免疫調(diào)節(jié)劑治療者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并重要臟器損傷或功能障礙者；因肺炎以及肺結(jié)核所引起的慢性咳嗽或者氣管異物誘發(fā)的支氣管癥狀者；伴有自身免疫性疾病者等。所有研究對(duì)象的法定監(jiān)護(hù)人對(duì)本研究知情并簽署知情同意書，且本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 檢驗(yàn)方法 入組后采集3組研究對(duì)象空腹靜脈血6 mL，分成兩部分，其中一部分血樣靜置60 min后，做離心處理，離心轉(zhuǎn)速為2 000 r/min，離心時(shí)間為10 min，提取血清后，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀（株式會(huì)社日立制作所，型號(hào)：7600型）及配套試劑，通過免疫比濁法測(cè)量免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）及免疫球蛋白M（IgM）的水平；采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)Th1細(xì)胞因子γ- 干擾素（IFN-γ）及Th2細(xì)胞因子白介素 -4（IL-4）水平，并以IFN-γ/IL-4表示Th1/Th2比值。一部分血樣采用流式細(xì)胞儀（美國貝克曼庫爾特有限公司，型號(hào)：FC 500）檢測(cè)外周靜脈血T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比），并計(jì)算CD4+/CD8+比值。全部操作均由同一組醫(yī)護(hù)人員完成，并且嚴(yán)格按照說明書及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較對(duì)照組和觀察組研究對(duì)象免疫球蛋白水平。②比較MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒免疫球蛋白水平。③比較對(duì)照組和觀察組研究對(duì)象T淋巴細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2比值。④比較MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒T淋巴細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。以P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與觀察組研究對(duì)象免疫球蛋白水平 觀察組患兒血清IgA、IgG及IgM水平均顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），見表1。

表1 對(duì)照組與觀察組研究對(duì)象免疫球蛋白水平比較( ?±s?, g/L)

表1 對(duì)照組與觀察組研究對(duì)象免疫球蛋白水平比較( ?±s?, g/L)

注：IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M。

組別 例數(shù) I g A I g G I g M對(duì)照組 6 0 1.1 6±0.3 5 7.3 6±2.7 5 1.3 6±0.4 2觀察組 1 2 0 1.7 8±0.3 0 1 2.0 2±3.6 4 2.6 3±0.8 5 t值 1 2.3 5 2 8.7 4 3 1 0.9 1 5 P值 <0.0 5 <0.0 5 <0.0 5

2.2 MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒免疫球蛋白水平 MP-IgM陽性組患兒血清IgA、IgG及IgM水平均顯著高于MP-IgM陰性組患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），見表 2。

表2 MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒免疫球蛋白水平比較 ( ?±s?, g/L)

表2 MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒免疫球蛋白水平比較 ( ?±s?, g/L)

注：MP-IgM：肺炎支原體抗體。

組別 例數(shù) I g A I g G I g M M P-I g M陽性組 6 7 1.8 5±0.4 1 1 3.6 9±4.2 5 2.8 4±0.9 2 M P-I g M陰性組 5 3 1.6 2±0.3 0 9.3 5±3.0 1 2.4 3±0.6 5 t值 3.4 2 2 6.2 8 8 2.7 4 6 P值 <0.0 5 <0.0 5 <0.0 5

2.3 對(duì)照組與觀察組研究對(duì)象T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2比值 觀察組患兒CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），而兩組研究對(duì)象CD8+百分比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），見表3。

表3 對(duì)照組與觀察組研究對(duì)象T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2比值比較( ?±s)

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ Th1/Th2對(duì)照組 60 72.33±6.54 41.28±6.20 28.35±4.55 1.46±0.38 5.52±2.74觀察組 120 60.38±7.74 34.96±6.54 28.98±4.83 1.21±0.41 3.39±1.48 t值 10.263 6.217 0.841 3.950 6.776 P值 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 <0.05

2.4 MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2比值 MP-IgM陽性組患兒CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均顯著低于MP-IgM陰性組患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P< 0.05），而兩組患兒CD8+百分比相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），見表4。

表4 MP-IgM陽性組和MP-IgM陰性組患兒T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2比值比較( x ±s)

3 討論

小兒支氣管哮喘合并MP感染的發(fā)生、發(fā)展多與機(jī)體的免疫功能失調(diào)具有密切的相關(guān)性，當(dāng)機(jī)體免疫功能降低時(shí)，外源性致敏原則被抗原遞呈細(xì)胞所吞噬，并對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)的激活作用，由此過程所產(chǎn)生的大量炎性因子及各種活性物質(zhì)開始對(duì)氣道平滑肌產(chǎn)生較強(qiáng)的刺激激活作用，導(dǎo)致氣道平滑肌細(xì)胞的收縮以及分泌物增多，引起相應(yīng)的臨床癥狀及病理改變[5]。免疫功能紊亂后，還可在吞噬炎性細(xì)胞期間，釋放出大量的細(xì)胞因子以及炎性介質(zhì)，由此導(dǎo)致氣道受到炎性因子長(zhǎng)時(shí)間的影響與刺激，加重病情[6]。

有研究表明，體液免疫功能異常直接參與肺炎支原體感染后疾病的進(jìn)展，其中IgA是機(jī)體黏膜防御系統(tǒng)的主要成分，能夠抑制微生物在呼吸道上皮附著，有重要的免疫屏障作用；IgM是MP感染后早期出現(xiàn)的免疫球蛋白，具有殺菌、激活補(bǔ)體、免疫調(diào)節(jié)等作用；IgG則在MP感染后較晚期出現(xiàn)，可以發(fā)揮中和游離毒素、調(diào)理吞噬細(xì)胞的作用[7]。支氣管哮喘患兒合并MP感染后，機(jī)體主要通過B淋巴細(xì)胞分泌免疫球蛋白、T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及補(bǔ)體系統(tǒng)而發(fā)揮免疫應(yīng)答作用，這時(shí)患兒體內(nèi)B淋巴細(xì)胞免疫功能亢進(jìn)，多存在著B淋巴細(xì)胞過度激活及增殖的表現(xiàn)，引起宿主細(xì)胞膜抗原結(jié)構(gòu)改變，從而導(dǎo)致免疫球蛋白分泌增加，導(dǎo)致免疫性損傷，進(jìn)一步損傷肺部，加重機(jī)體免疫功能紊亂的情況，進(jìn)而易誘發(fā)肺外器官多器官以及多系統(tǒng)的損傷，導(dǎo)致患兒本身病情遷延[8]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒血清IgA、IgG及IgM水平均顯著高于對(duì)照組研究對(duì)象，且MP-IgM陽性組患兒血清IgA、IgG及IgM水平均顯著高于MP-IgM陰性組患兒，表明支氣管哮喘患兒IgA、IgG及IgM水平高于健康兒童，且支氣管哮喘患兒MP-IgM陽性的免疫球蛋白水平表現(xiàn)更加顯著。

小兒MP感染后，除了影響體液免疫功能，細(xì)胞免疫功能也參與了病情的動(dòng)態(tài)變化。外周血T淋巴細(xì)胞參與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)，并在免疫應(yīng)答中起到重要的調(diào)節(jié)作用，其中CD3+可反映T淋巴細(xì)胞成熟程度，表示患兒細(xì)胞免疫功能狀態(tài)；當(dāng)患兒感染MP后，CD4+可輔助T、B淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫應(yīng)答的功能；CD8+則主要發(fā)揮細(xì)胞毒作用殺傷靶細(xì)胞，是早期抗MP感染的免疫細(xì)胞，而CD4+/CD8+可反映細(xì)胞免疫系統(tǒng)的總體功能狀態(tài)，CD4+和CD8+調(diào)節(jié)失衡，則表明患兒機(jī)體免疫功能減弱，病原菌侵襲的風(fēng)險(xiǎn)增加。

輔助性T淋巴細(xì)胞可分為Th1和Th2亞群，Th1可產(chǎn)生IFN-γ、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）等促炎介質(zhì)，具有較強(qiáng)的細(xì)胞免疫誘導(dǎo)作用，而Th2產(chǎn)生IL-4、粒 -?巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等細(xì)胞因子，具有較強(qiáng)的促進(jìn)增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答的效果，正常人體內(nèi)，Th1和Th2的前體細(xì)胞Th0按一定比例向Th1和Th2細(xì)胞分化，兩者相互拮抗，保證機(jī)體免疫及防御功能的穩(wěn)定性，而雙方中任何一方出現(xiàn)異常改變，或者呈現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，均可誘發(fā)免疫功能紊亂，增加外界病原菌侵犯人體的風(fēng)險(xiǎn)[9]。支氣管哮喘本身屬于一種慢性炎癥性反應(yīng)，體內(nèi)Th1/Th2已經(jīng)失衡，感染MP后，可進(jìn)一步促進(jìn)Th0細(xì)胞開始向著Th2細(xì)胞所分化，這就對(duì)Th1/Th2的平衡造成了較大的影響，以Th1功能降低作為主要表現(xiàn)，隨著Th1細(xì)胞水平的降低，也會(huì)對(duì)T淋巴細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞產(chǎn)生刺激激活作用，而釋放出更多的免疫抑制物質(zhì)，影響機(jī)體的免疫功能，在臨床表現(xiàn)上則是進(jìn)一步地加速了氣道狹窄的進(jìn)程，誘發(fā)出更加嚴(yán)重的哮喘癥狀及病理表現(xiàn)[10]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均顯著低于對(duì)照組研究對(duì)象，MP-IgM陽性組患兒CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均顯著低于MP-IgM陰性組患兒。表明在發(fā)生支氣管哮喘后，支氣管哮喘患兒體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞活化功能開始減弱，細(xì)胞免疫功能低下，且這種表現(xiàn)在MP-IgM陽性組中更加顯著。但MP-IgM陽性組患兒和MP-IgM陰性組患兒CD8+百分比相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與本研究納入樣本量較少有關(guān)。

綜上，支氣管哮喘患兒多存在著免疫調(diào)節(jié)功能紊亂的表現(xiàn)，其中免疫球蛋白呈現(xiàn)出了異常升高的趨勢(shì)，T淋巴細(xì)胞活化功能開始減弱，細(xì)胞免疫功能低下，且這種表現(xiàn)在合并MP感染患兒中更加顯著，在臨床工作中可指導(dǎo)治療以及對(duì)患兒預(yù)后進(jìn)行判斷，值得臨床進(jìn)一步進(jìn)行探討。