鄒淑君，于夢(mèng)雪，張又天，許樹軍，韓甜甜，楊夢(mèng)茹

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心，黑龍江 哈爾濱150040）

前 言

遼東楤木（Aralia elata（Miq.）Seem）是五加科楤木屬的一種藥食兩用植物，在我國(guó)主產(chǎn)于黑龍江、吉林、遼寧等地區(qū)[1]。其嫩芽是一種名貴的山野菜；根、莖通常以皮入藥，具有補(bǔ)氣安神、活血祛風(fēng)、利濕消腫之作用，用于治療神經(jīng)衰弱、腎虛陽(yáng)痿、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、胃十二指腸潰瘍、慢性胃炎、胃痙攣、肝炎、肝癌、動(dòng)脈硬化、糖尿病、腎炎、水腫等疾病[1～7]；葉具有抗腫瘤、保肝作用[8～9]。遼東楤木的主要活性成分為三萜皂苷、黃酮和多糖[10～11]，藥用多以提取的三萜皂苷為主要物質(zhì)。弄清遼東楤木根、莖、葉這幾個(gè)不同的部位成分是否有明顯差別, 意味著可以判斷其根、莖、葉是否具有相近的藥用價(jià)值。另外，一直以來(lái)，遼東楤木的根、莖部位均以皮入藥，這可能是基于植物根、莖的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、藥效、儲(chǔ)存空間等多種因素考慮而將皮以內(nèi)的部分拋棄。由于根、莖再生緩慢、藥用價(jià)值高，從充分利用藥材資源的角度考慮，可對(duì)根、莖的皮以內(nèi)的部分（簡(jiǎn)稱皮內(nèi)質(zhì)）的成分進(jìn)行考察，以確定皮內(nèi)質(zhì)部分的藥用價(jià)值。

薄層色譜法（TLC）具有能同時(shí)分離多種樣品、固定相和流動(dòng)相的選擇與變換靈活性大、可利用多種定性檢測(cè)技術(shù)（如物理和化學(xué)方法等）等特點(diǎn)。且所需設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、分離速度快是TLC 固有的優(yōu)勢(shì)[11-13]。TLC 廣泛應(yīng)用于藥物分析及藥物質(zhì)量評(píng)價(jià)方面[14]。為了解和區(qū)分遼東楤木的不同部位藥用差別，用乙醇水溶液對(duì)不同部位進(jìn)行超聲提取，采用高效薄層色譜對(duì)遼東楤木葉、根皮、根皮內(nèi)質(zhì)、莖皮、莖皮內(nèi)質(zhì)中提取的總皂苷進(jìn)行分離比較，從而判斷不同部位的皂苷類成分的異同，并確定根、莖的皮內(nèi)質(zhì)部分的藥用價(jià)值。為充分利用遼東楤木資源及后續(xù)更深入研究該植物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

HR-20 型多功能粉碎機(jī)，上海哈瑞斯電器有限公司；薄層層析鋁箔硅膠G 板，上海盛亞化工有限公司；GoodLook-1000 型薄層色譜成像系統(tǒng)，上?？普苌萍加邢薰?。

遼東楤木（黑龍江省五常鳳凰山，采于2018 年8 月，為6～9 年生）。甲酸、濃硫酸（98%）、正丁醇、氨水、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇均為國(guó)產(chǎn)分析純。對(duì)照品（實(shí)驗(yàn)室自制，結(jié)構(gòu)式見圖1）

圖1 對(duì)照品a～f 的結(jié)構(gòu)Fig.1 The structures of reference samples a～f

2 方 法

2.1 樣品的制備

取遼東楤木中干燥的根、莖和葉，其中根和莖用橡膠錘反復(fù)敲擊，使其分離為根皮、根皮內(nèi)質(zhì)、莖皮、莖皮內(nèi)質(zhì)。各部位粉碎，過(guò)100 目篩，得樣品粉末。分別精密稱取樣品粉末5.0g 置于100mL 具塞錐形瓶中，加入70%乙醇溶液25mL，超聲提取1h，放冷，過(guò)濾，濾液放于蒸發(fā)皿中濃縮至固體，加水20mL 混懸，用等體積水飽和的正丁醇溶液萃取3次，合并正丁醇萃取液，蒸干，得固體試樣，備用。精密稱取上述固體試樣0.02g，加入正丁醇1.5mL，超聲5min，再加入正丁醇飽和氨試液2mL，振蕩搖勻，超聲20min，以3000r·min-1的速度離心15min 后，取上層清液，得樣品溶液。

2.2 薄層色譜（TLC）法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試

精密吸取樣品溶液1.5μL，分別點(diǎn)于硅膠G 高效預(yù)制薄層板上，點(diǎn)樣間距12mm，上行展開距離150mm，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水（9.5∶10∶20∶0.5∶5）為展開劑，展開結(jié)束后取出自然揮干，噴10%硫酸乙醇溶液，置于100℃加熱板上加熱，直至顯色清晰，冷卻后，置于薄層色譜成像系統(tǒng)中檢視，拍照，獲得樣品熒光薄層色譜圖。

2.3 數(shù)據(jù)及圖像處理

運(yùn)用ImageJ、Get Data Graph Digitizer 及Origin軟件對(duì)樣品熒光薄層色譜圖進(jìn)行處理。將熒光薄層色譜圖生成灰度圖片并轉(zhuǎn)換為曲線，將曲線進(jìn)行積分可得出積分面積數(shù)據(jù)。用SPSS 25.0 進(jìn)行相似度分析。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同部位薄層色譜斑點(diǎn)成分比較

圖2 及圖3 是遼東楤木不同部位及對(duì)照品的薄層色譜圖。

圖2 遼東楤木不同部位的總皂苷TLC 圖Fig.2 The TLC of total saponins in different parts of Aralia elata

圖中L、SC、SB、RC、RB 分別代表葉、莖皮內(nèi)質(zhì)、莖皮、根皮內(nèi)質(zhì)、根皮。圖2 是根皮內(nèi)質(zhì)、根皮、莖皮、莖皮內(nèi)質(zhì)及葉的樣品薄層色譜圖，每個(gè)樣品重復(fù)點(diǎn)樣3 次。由圖2 可見，同種樣品的同一斑點(diǎn)展距基本相同，但是由于各種效應(yīng)的影響，也會(huì)導(dǎo)致不同原點(diǎn)的相同樣品其展距略有差別。對(duì)于葉來(lái)說(shuō)，在距離點(diǎn)樣原點(diǎn)較近的地方，一些斑點(diǎn)有拖尾或滯后現(xiàn)象；而距離原點(diǎn)較遠(yuǎn)的地方，尤其是越接近薄層板邊緣、離原點(diǎn)越遠(yuǎn)的斑點(diǎn)，展距要比正常偏大。圖3 是薄層色譜成像系統(tǒng)在365nm 熒光燈下拍攝圖片經(jīng)由Image J 軟件轉(zhuǎn)化生成的灰度圖，灰度圖比薄層色譜成像系統(tǒng)拍攝圖清晰。圖中S1～S6是對(duì)照品a～f，S 是空白溶劑。參考圖2，結(jié)合遼東楤木不同部位的總皂苷及對(duì)照品熒光色譜圖，對(duì)圖3進(jìn)行斑點(diǎn)確認(rèn)，編號(hào)1～26 號(hào)代表遼東楤木不同部位的樣品在薄層板上所呈現(xiàn)的熒光斑點(diǎn)，a～f 是對(duì)照品呈現(xiàn)的斑點(diǎn)。葉、根皮、根皮內(nèi)質(zhì)、莖皮內(nèi)質(zhì)、莖皮中總共呈現(xiàn)出26 個(gè)斑點(diǎn)。整體看，葉與根部、莖部差別較大，根部與莖部差別不大。各部位斑點(diǎn)成分差異為：（1）葉呈現(xiàn)15 個(gè)斑點(diǎn)成分，莖皮內(nèi)質(zhì)、莖皮、根皮、根皮內(nèi)質(zhì)各呈現(xiàn)18 個(gè)斑點(diǎn)。葉部、根部和莖部的共有斑點(diǎn)成分為3、6、7、8、15、18、19 和24這7 個(gè)斑點(diǎn)。（2）葉部斑點(diǎn)多集中在薄層板中下部，比較聚集且色深。說(shuō)明葉部絕大部分成分極性較大，不同成分極性相差不大，成分含量較大。（3）根部和莖部斑點(diǎn)分散度較大，且顏色深淺差別較大。說(shuō)明這兩個(gè)部位的成分極性差別較大，含量差別也較大。根部、莖部斑點(diǎn)數(shù)量及斑點(diǎn)展距很相似。且根皮與莖皮更相近、根皮內(nèi)質(zhì)與莖皮內(nèi)質(zhì)更相近。（4）根部與莖部的主要區(qū)別是，根部10 和25 號(hào)斑點(diǎn)成分含量明顯大于莖部。（3）皮內(nèi)質(zhì)部與皮部總體相似，主要區(qū)別在于，皮內(nèi)質(zhì)部中1、2、3 號(hào)斑點(diǎn)顏色比皮部的深很多，說(shuō)明皮內(nèi)質(zhì)部這3 個(gè)斑點(diǎn)成分含量明顯高于皮部。

3.2 不同部位相似度分析

利用Image J 軟件對(duì)圖3 的斑點(diǎn)進(jìn)行Analyze-Gels-Plot lanes 曲線轉(zhuǎn)換，并利用Get Data Graph Digitizer 將曲線轉(zhuǎn)化為數(shù)據(jù)，將數(shù)據(jù)作曲線圖，通過(guò)Analysis-Peaks and Baseline-Peak Analyzer-Open dialog 軟件對(duì)曲線進(jìn)行人工創(chuàng)作基線、尋峰、積分，得到曲線峰的位置和峰面積積分。其中峰至原點(diǎn)的距離為樣品高效薄層色譜熒光斑點(diǎn)的展距，峰面積積分?jǐn)?shù)值體現(xiàn)薄層色譜斑點(diǎn)成分的含量大小。對(duì)每一個(gè)樣品斑點(diǎn)的展距及峰面積積分?jǐn)?shù)值利用SPSS Statistics V25.0 進(jìn)行相似性分析，得到遼東楤木不同部位相似性結(jié)果，表現(xiàn)相似性強(qiáng)弱的相關(guān)數(shù)據(jù)見表1。

表1 遼東楤木不同部位總皂苷高效薄層色譜相似度Table 1 The similarity of total saponins in different parts of Aralia elata by TLC

相關(guān)系數(shù)越大，相似的程度越大，完全一樣時(shí)，相關(guān)系數(shù)等于1.000，從表1 可以看出，其中L 與RC、SC、SB、RB 的相關(guān)系數(shù)都小于0.700，相似程度較低；RC、SC、SB、RB 兩兩之間相關(guān)系數(shù)均大于0.900?？梢?，遼東楤木葉中總皂苷成分種類和含量明顯不同于根部和莖部。根部、莖部的皮內(nèi)質(zhì)部總皂苷成分種類和含量相似度較大。

3.3 不同部位分離成分與已知對(duì)照品比較

圖4 遼東楤木不同部位總皂苷及對(duì)照品TLC 熒光點(diǎn)灰度曲線圖（A：所有測(cè)試樣品的圖，B：僅含L 及S1 的放大圖）Fig.4 The gray scale curve of TLC fluorescence point of total saponins in different parts of Aralia elata and control substance（A：Diagram of all test samples，B：Enlarged view with only L and S1）

用已知的幾種皂苷成分做對(duì)照品確定部分薄層色譜斑點(diǎn)成分。圖4 給出了不同部位總皂苷和對(duì)照品高效薄層色譜熒光斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)的曲線圖，圖中S線是空白對(duì)照線，S1～S6 線是對(duì)照品a～f 的曲線。點(diǎn)樣原點(diǎn)的位置定為0cm，展開劑前沿距原點(diǎn)為15cm，斑點(diǎn)的灰度曲線峰的位置到原點(diǎn)的距離稱為展距，以D 代表。對(duì)照品a 是3-O-β-D-葡萄吡喃糖基常春藤皂苷元，D 為8.63cm，結(jié)合圖2、圖3 及邊緣效應(yīng)綜合分析，確定根、莖沒有此成分，葉含有此成分，即23 號(hào)斑點(diǎn)峰（圖4 中A 是各樣品的總圖，導(dǎo)致葉L 曲線的23 號(hào)峰不明顯，為了能夠清晰展示23 號(hào)峰，給出只含有葉L 與標(biāo)準(zhǔn)品a 的放大圖B，從圖B 可以清晰看出23 號(hào)峰與a 的關(guān)系）；對(duì)照品b 是3-O- [β-D- 葡萄吡喃糖基（1 →2）][β-D-葡萄吡喃糖基（1→3）-β-D-葡萄吡喃糖基（1→3）]-β-D-葡萄吡喃糖基常春藤皂苷元，D 為2.73cm，根、莖、葉都含有此成分，即7 號(hào)斑點(diǎn)峰；對(duì)照品c 是3-O- [β-D- 吡喃葡萄糖基（1 →2）][β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖基- 齊墩果酸-28-O-β-D- 吡喃葡萄糖酯，D 為1.47cm，根、莖有此成分，葉沒有該成分，即5 號(hào)斑點(diǎn)峰；對(duì)照品d 是3-O-[β-D-葡萄吡喃糖基（1→3）][β-D-葡萄吡喃糖基（1→3）]-β-D-葡萄吡喃糖基- 刺囊酸-28-O-β-D- 葡萄吡喃糖酯，D 為2.02cm，根、莖、葉都有此成分，即6 號(hào)斑點(diǎn)峰；對(duì)照品e 是3-O-[β-D- 吡喃葡萄糖基（1→3）][β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖基-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯，展距為1.28cm，葉含有該成分，根、莖沒有該成分，即4 號(hào)斑點(diǎn)峰；對(duì)照品f 是3-O- [β-D- 葡萄吡喃糖基（1→2）][β-D-葡萄吡喃糖基（1→3）]-β-D-葡萄吡喃糖基-常春藤皂苷元，D 為3.50cm，葉有該成分，根、莖不含該成分，即8 號(hào)斑點(diǎn)峰。通過(guò)對(duì)照品比較可以確定，以70%乙醇溶液提取的遼東楤木不同部位獲得的成分以三萜皂苷為主。

4 結(jié) 論

通過(guò)薄層色譜判斷，遼東楤木葉、根、莖均含有多種三萜皂苷類成分。我們應(yīng)該充分發(fā)掘遼東楤木不同部位的應(yīng)用價(jià)值。

（1）葉中不同皂苷成分極性較為相近，說(shuō)明葉中的成分分離有一定難度。葉中三萜皂苷種類與根、莖對(duì)比有很大差別，成分含量差別也較大。葉中有些成分在根、莖中沒有，由此推理葉部可能有一些特殊藥用價(jià)值，這些藥用價(jià)值可能是根、莖部分所不具備的。另外，葉部由于每年都可再生，可循環(huán)利用，因此葉的利用價(jià)值很高。

（2）根、莖中含有的不同皂苷成分極性差別較大，所以根、莖里的三萜皂苷成分可能相對(duì)容易進(jìn)行分離。根皮、莖皮、根皮內(nèi)質(zhì)、莖皮內(nèi)質(zhì)中的三萜皂苷成分種類相同，只是個(gè)別成分含量差別略大。總體看根部與莖部相似度很大，因此根部與莖部藥學(xué)用途應(yīng)相似，可無(wú)差別使用。

（3）皮部與皮內(nèi)質(zhì)部對(duì)比，雖然有少數(shù)成分在含量上有較大差別，但成分類別基本一致，因此在利用根部與莖部時(shí)，皮內(nèi)質(zhì)部不應(yīng)該被廢棄掉，也應(yīng)被充分利用起來(lái)。

充分認(rèn)識(shí)到遼東楤木不同部位成分上的異同，結(jié)合不同部位的相關(guān)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和評(píng)價(jià)，可以為有效利用遼東楤木這種植物資源提供明確依據(jù)。