張 哲，于瑞海，李海昆，馬培振，李玲蔚，王永旺

(1.海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國海洋大學(xué))，山東 青島 266003；2.青島國信藍(lán)色硅谷發(fā)展有限責(zé)任公司，山東 青島 266200)

長牡蠣(Crassostreagigas)又稱太平洋牡蠣，其適應(yīng)能力強(qiáng)、生長迅速，是中國重要的牡蠣經(jīng)濟(jì)種[1-2]。近年來，牡蠣市場(chǎng)的需求量較大，中國長牡蠣的養(yǎng)殖規(guī)模迅速擴(kuò)大，產(chǎn)量提高的同時(shí)其品質(zhì)在下降，如傳統(tǒng)的固著基養(yǎng)殖方式，商品牡蠣大小不一，殼形不規(guī)則，這嚴(yán)重影響了中國牡蠣的國際市場(chǎng)價(jià)格，迫切需要提高牡蠣的品質(zhì)和檔次[3]。1970年代，國外學(xué)者通過特殊的固著基處理或者用藥物對(duì)即將變態(tài)的牡蠣幼蟲進(jìn)行誘導(dǎo)首次獲得單體牡蠣[4-5]，其生長過程中生長空間不受限制，因而殼形規(guī)整、規(guī)格統(tǒng)一，這無疑打破了傳統(tǒng)養(yǎng)殖方式下牡蠣的生長弊端，使得養(yǎng)殖牡蠣的品質(zhì)大大提升[4-7]。國內(nèi)單體牡蠣的研究最早是從太平洋牡蠣[8]開始，之后在褶牡蠣(Crassostreasp.)[9]、僧帽牡蠣(Saccostreacucullata)[10]、熊本牡蠣(C.sikamae)[11]、近江牡蠣(C.ariakensis)[12]、香港牡蠣(C.hongkongensis)[13]、葡萄牙牡蠣(C.angulata)[3]中相繼展開了單體牡蠣的研究。

目前，關(guān)于單體牡蠣的研究多集中于幼蟲的誘導(dǎo)和單體牡蠣試養(yǎng)技術(shù)[6,9]，關(guān)于單體牡蠣稚貝的中間培育技術(shù)國內(nèi)報(bào)道較少，而大規(guī)格單體牡蠣苗種培育技術(shù)是限制單體牡蠣規(guī)?；B(yǎng)殖的關(guān)鍵問題。“海大1號(hào)”長牡蠣是經(jīng)過12年的良種選育，成功培育出殼型規(guī)則、生長快、產(chǎn)量高的長牡蠣優(yōu)良品種，本研究以“海大1號(hào)”長牡蠣為材料，從培育模式、水流量、培育密度三個(gè)方面探究單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝培育模式，旨在提高大規(guī)格單體“海大1號(hào)”長牡蠣苗種的生產(chǎn)效率，為我國牡蠣養(yǎng)殖業(yè)提質(zhì)增效打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料為單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝苗。挑選性腺發(fā)育成熟的“海大1號(hào)”長牡蠣親貝洗刷干凈，通過陰干、流水刺激等方式刺激親貝排精、排卵，受精后通過常規(guī)培育方式將幼蟲培育至眼點(diǎn)幼蟲期，經(jīng)80目篩絹(180 μm)篩選，用腎上腺素進(jìn)行不附著變態(tài)的誘導(dǎo)，方法同Coon等[5]，誘導(dǎo)結(jié)束后將幼蟲濃縮至100目篩絹中，用海水流水沖洗1 h除去殘留的藥物，將誘導(dǎo)后的眼點(diǎn)幼蟲放入20 m3的水泥池中暫養(yǎng)24 h，之后使用60目(250 μm)篩絹將誘導(dǎo)后的幼蟲篩選15～20次，獲得大小(420.32±34.23) μm的單體牡蠣貝苗。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培育模式對(duì)單體長牡蠣稚貝存活生長的影響 分別在處于下降流、上升流、靜水狀態(tài)下的單體培育設(shè)備中加入誘導(dǎo)獲得的規(guī)格為(420.32±34.23) μm的單體牡蠣7.0×104粒，上升流及下降流設(shè)備水流量設(shè)置為65 mL/s，靜水培育設(shè)備關(guān)閉管道閥門水流量為0 mL/s，定期對(duì)牡蠣的生長及存活情況進(jìn)行記錄。

1.2.2 水流量對(duì)單體長牡蠣稚貝存活生長的影響 使用培育稚貝效果最好的培育模式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用水桶和秒表計(jì)量每秒水流量，水流量分別調(diào)節(jié)為：20、35、50、65、80和95 mL/s,每個(gè)設(shè)備中投入規(guī)格為(420.32±34.23) μm的單體牡蠣苗種7×104粒，定期對(duì)牡蠣的生長及存活情況進(jìn)行記錄。

1.2.3 稚貝培養(yǎng)密度對(duì)單體長牡蠣稚貝存活生長的影響 使用最佳培育模式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將規(guī)格為(420.32±34.23) μm的單體牡蠣苗投入到10 L塑料桶中攪拌均勻，使用移液槍吸取1 mL計(jì)數(shù)，取5次求得平均密度。在培育設(shè)備中分別投入7萬、14萬、21萬、28萬、35萬和42萬個(gè)單體牡蠣苗種，稚貝苗密度分別為2.5、5、7.5、10、12.5和15個(gè)/mL，水流量設(shè)置為65 mL/s，并將單體苗種在篩絹上均勻播撒。

1.3 日常管理

投喂餌料以球等鞭金藻(Isochrysisgalbana)為主，新月菱形藻(Nitzschiaclosterium)為輔，每日分6次投喂，日投餌量為8×104～12×104細(xì)胞/mL；培育海水鹽度29，培育溫度26～28 ℃；每日用軟毛刷清潔桶壁，每日2次，防止苗種因次生殼的生長固定到篩絹網(wǎng)上，同時(shí)輕輕用水沖洗苗種以去除污物。

1.4 測(cè)量及數(shù)據(jù)處理

培育過程中記錄稚貝死亡率及生長狀況。前10日內(nèi)每3日記錄1次生長及死亡率，后20日內(nèi)每5日記錄一次。每次取30個(gè)稚貝記錄殼高，取平均值。使用吸管吸取50粒單體苗種置于顯微鏡下觀察，估算死亡率，每次測(cè)量重復(fù)3次。

所有數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean ± SD)的形式表示，使用SPSS 18.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，采用單因素方差分析比較各組之間的差異，并進(jìn)行Duncan多重比較，顯著性差異水平為0.05。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同培育模式對(duì)單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝生長及存活的影響

3種培育模式對(duì)單體牡蠣稚貝的生長影響如圖1所示。培養(yǎng)初期3種模式之間的差異不顯著(P>0.05)，在3種培育模式下稚貝前期的生長速度均較快，稚貝在14 d內(nèi)迅速生長到接近1 000 μm；在第14 天之后，上升流和下降流培育的稚貝依舊保持較快的生長速度，上升流中稚貝殼高在第29天時(shí)最大達(dá)(1 521.44±85.23) μm；靜水培育的稚貝除第29天外，在14 d之后稚貝殼高均顯著小于上升流和下降流培育的稚貝(P<0.05)。稚貝生長過程中的死亡情況如圖2所示，在不同模式下，培育29 d后上升流設(shè)備中稚貝死亡率最低，為(34.37±2.56)%，下降流設(shè)備中的死亡率次之，為(41.26±2.12)%，而靜水養(yǎng)殖的單體苗種死亡率則達(dá)到了(86.12±6.23)%，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組單體牡蠣苗死亡率差異顯著(P<0.05)；單體牡蠣培育的第5天開始，靜水培育的單體牡蠣苗死亡率顯著高于流水培育(P<0.05)，第7天開始，上升流培育單體牡蠣苗的死亡率顯著高于下降流(P<0.05)；單體牡蠣苗的大量死亡集中于培育階段的前10 d內(nèi)，10 d后的死亡速度逐漸減慢。

(具有相同字母表示實(shí)驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05),具有不同字母表示實(shí)驗(yàn)組之間差異顯著(P<0.05)，下同。The same letters mean no significant difference (P>0.05), the different letters mean significant difference (P<0.05), the same meaning was described as below. )

圖2 三種培育模式下稚貝的死亡率Fig.2 Death rates of spat in three kinds of cultivation mode

2.2 水流量對(duì)單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝生長及存活的影響

不同的水流量條件下單體牡蠣稚貝的生長、存活情況如圖3、4所示。生長速度方面，在培育的前14 d內(nèi)各組稚貝的生長速度較快，隨后生長逐漸減慢；在其他條件相同的情況下，水流量小于65 mL/s時(shí)稚貝的生長速度隨著水流速度的增加而加快；培育至29 d時(shí)，水流量大于65 mL/s的單體牡蠣稚貝殼高均超過1 500 μm，65 mL/s的水流量下單體牡蠣稚貝殼高最大，達(dá)到(1 534.81±65.23) μm。稚貝的死亡率方面，在前3 d時(shí)各個(gè)水流速度組的死亡率差異不顯著(P>0.05)，從第4天開始死亡率會(huì)隨著流水流速的加快而降低；第9天后，流速20和35 mL/s水流組的單體牡蠣稚貝死亡率顯著的高于其他各組(P<0.05)，在第29天時(shí)2組稚貝的死亡率均超過70%，20 mL/s組稚貝死亡率最高，達(dá)到(75.32±3.42)%，當(dāng)水流速度大于65 mL/s時(shí)各組死亡率差異不顯著(P>0.05)，且稚貝的死亡率較低。

2.3 培育密度對(duì)單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝生長與存活的影響

不同的培育密度對(duì)單體牡蠣稚貝生長、存活的影響如圖5、6所示。單體牡蠣稚貝密度低于7.5個(gè)/mL時(shí)，各組的稚貝在整個(gè)培養(yǎng)階段生長較快，無顯著性差異(P>0.05)；培育前5 d內(nèi)各密度組稚貝的規(guī)格差異不顯著(P>0.05)，但隨著單體牡蠣稚貝的逐漸生長，培育密度較大組的稚貝生長速度減慢，在培育9 d后，密度大于7.5 個(gè)/mL時(shí)各組稚貝規(guī)格顯著小于密度小于7.5個(gè)/mL時(shí)各組的稚貝規(guī)格(P<0.05)；單體牡蠣稚貝培育至29 d，密度為7.5個(gè)/mL時(shí)稚貝規(guī)格最大，達(dá)(1 520.63±51.72)μm，而密度15個(gè)/mL組僅為(1 096.42±43.53)μm。在死亡率方面，培育密度小于7.5個(gè)/mL的實(shí)驗(yàn)組中死亡率較低，且組間無顯著差異(P>0.05)；密度大于7.5個(gè)/mL實(shí)驗(yàn)組中，稚貝的死亡率隨培育密度增高而逐漸升高；29 d時(shí)，密度大于7.5個(gè)/mL實(shí)驗(yàn)組的稚貝死亡率均超過40%，密度15個(gè)/mL組稚貝的死亡率最高，達(dá)(65.32±3.01)%。

圖4 不同水流量下稚貝死亡率Fig.4 The death rate of spat in different water flow

圖 5 不同培育密度下稚貝的生長Fig.5 The growth in different cultivation density

3 討論

3.1 單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝中間培育死亡原因分析

單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝中間培育初期出現(xiàn)了大量死亡的現(xiàn)象，主要是有以下幾方面原因：一方面是腎上腺素對(duì)誘導(dǎo)后的稚貝有一定的毒害作用，在用腎上腺素誘導(dǎo)熊本牡蠣[11]、珠母貝(Pinctadamargaritifera)[15]、硬殼蛤(Mercenariamercenaria)[16]獲得單體時(shí)均發(fā)現(xiàn)該藥物對(duì)誘導(dǎo)對(duì)象會(huì)有一定的毒害作用；另一方面幼蟲受刺激后的延遲變態(tài)會(huì)導(dǎo)致幼蟲在培育初期的大量死亡[17-18]；此外由于牡蠣的生活習(xí)性發(fā)生改變，單體牡蠣稚貝大量聚集，造成水質(zhì)惡化，引起死亡。

3.2 單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝不同培育模式探討

研究發(fā)現(xiàn)單體牡蠣稚貝在流水培育模式下生長快、存活率高，而在靜水培育模式下生長狀況較差。腎上腺素能夠誘導(dǎo)幼蟲的變態(tài)，但不會(huì)誘導(dǎo)幼蟲附著變態(tài)[11-12,19-20]，因而大部分“海大1號(hào)”長牡蠣眼點(diǎn)幼蟲在經(jīng)過誘導(dǎo)后喪失了游泳能力聚集在培育設(shè)施底部。靜水模式下無水流的交換，聚集于底部的幼蟲或者已變態(tài)的稚貝無法通過水動(dòng)力作用獲得食物[21]，攝食量無法保證，導(dǎo)致其生長緩慢且死亡率高；另一方面，牡蠣在攝食不適時(shí)會(huì)排出假糞，這些物質(zhì)的沉積有可能造成局部的氨氮過高，溶解氧降低，導(dǎo)致苗種死亡[22-23]。在上升流和下降流的兩種流水培育模式中由于有水流的存在，牡蠣的濾食可以正常進(jìn)行，同時(shí)水流也會(huì)將一部分污物帶走，因而單體牡蠣稚貝生長較優(yōu)。因此在培育單體牡蠣稚貝時(shí)，要選取合適的養(yǎng)殖設(shè)備，采取上升流和下降流相互配合的流水方式進(jìn)行培育。

圖6 不同培育密度下稚貝死亡率Fig.6 The death rate in different cultivation density

3.3 單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝不同培育水流量探討

水流量是影響單體牡蠣稚貝生長的重要因素，在適宜的水流范圍內(nèi)增加水流量會(huì)促進(jìn)單體牡蠣稚貝的生長。水流量增加可提高單體牡蠣稚貝的濾水率，從而促進(jìn)攝食，但水流過大會(huì)影響正常攝食，進(jìn)而影響正常的生長和存活[21,24]；此外水流量的增加，能夠避免水質(zhì)惡化，保障了稚貝的生長環(huán)境，李石磊等[14]在做單體牡蠣的筏式養(yǎng)殖研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，水流交換好的環(huán)境下個(gè)體生長狀況較好。所以建議在單體牡蠣稚貝中間培育的過程中，適當(dāng)?shù)脑黾铀髁俊?/p>

3.4 單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝不同培育密度探討

本研究發(fā)現(xiàn)，各個(gè)密度組單體牡蠣稚貝的存活和生長情況在培育初期差異較小，但隨著苗種逐漸變大，密度的擠迫效應(yīng)逐漸表現(xiàn)出來[14]，高密度組的稚貝死亡率逐漸升高，生長速度逐漸變緩。稚貝培育密度較高時(shí)，其餌料和生長空間會(huì)受到限制，導(dǎo)致稚貝生長緩慢，同時(shí)水中的溶解氧降低，造成稚貝的大量死亡[22-23]。陳亨等[3]用腎上腺素處理普通的長牡蠣實(shí)驗(yàn)中，培育至第5天長牡蠣殼高僅為400 μm。本實(shí)驗(yàn)中單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝密度為7.5 個(gè)/mL培育至第5天殼高超過600 μm，第9天殼高超過900 μm，這說明單體“海大1號(hào)”長牡蠣較普通的長牡蠣單體具有一定的生長優(yōu)勢(shì)，具有一定的開發(fā)潛力。

4 結(jié)論

培育模式、水流量、培育密度對(duì)單體“海大1號(hào)”長牡蠣稚貝的生長有較大的影響，單體“海大1號(hào)”長牡蠣中間培育的最佳條件：采用上升流和下降流相互配合的培育模式，水流量控制在65～80 mL/s，培育密度為7.5個(gè)/mL。