李 磊， 趙俊杰， 劉瑩瑩， 甄 靜， 李亮亮， 陳國(guó)參， 慕 琦， 王繼雯

(1. 河南省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450000；2. 河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司，鄭州 450000)

根結(jié)線蟲(chóng)屬于線蟲(chóng)門、側(cè)尾腺綱、墊刃目、異皮科、根結(jié)線蟲(chóng)屬[1]，其主要危害作物的根部，能侵染根部細(xì)胞，使根部輸導(dǎo)組織遭到破壞，從而失去吸收養(yǎng)分和水分的能力，導(dǎo)致作物營(yíng)養(yǎng)不良而早衰，甚至整株干枯死亡。1885年，Berkeley最先[2]在黃瓜根際發(fā)現(xiàn)根結(jié)線蟲(chóng)，此后不斷有新種被發(fā)現(xiàn)。約有80多種根結(jié)線蟲(chóng)種類被報(bào)道[3]，而我國(guó)記錄的有效種有39個(gè)[4]。蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)寄生范圍廣、繁殖速度快、侵染具有掩蔽性且能通過(guò)病土、病苗和灌水等方式傳播[5-6]，防治比較困難，給蔬菜生產(chǎn)造成巨大的損失，因此對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防治已經(jīng)成為一項(xiàng)非常重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)任務(wù)。

已有的根結(jié)線蟲(chóng)病害的防治措施主要包括化學(xué)防治、物理防治、農(nóng)業(yè)防治、抗病育種和生物防治等[7]。生物防治是近年來(lái)新興起的一種防治方法，生物防治所篩選的目標(biāo)拮抗物均來(lái)源于自然環(huán)境中，對(duì)土壤環(huán)境友好，不污染環(huán)境，綠色環(huán)保，具有可持續(xù)性，符合綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展要求，是一種比較理想的防治技術(shù)[8]。

生物防治蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)病害的前提是獲得具有生防作用的菌株，而如何高效地篩選出生防菌株是最為關(guān)鍵的問(wèn)題[9]。馬金慧等[10]研究表明哈茨木霉菌株TRI2發(fā)酵液在48 h時(shí)可以100%殺死根結(jié)線蟲(chóng)，Zhang等[11]研究表明長(zhǎng)枝木霉菌株T6對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的二齡幼蟲(chóng)具有較強(qiáng)的寄生和致死作用。Bokhari等[12]的研究發(fā)現(xiàn)哈茨木霉、康寧木霉、綠色木霉和鉤狀木霉均有防治爪哇根結(jié)線蟲(chóng)的活性。翟明娟等[13]研究表明綠色木霉菌株Tvir-6發(fā)酵液在24 h內(nèi)對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)的校正死亡率高達(dá)98.5%，Burgwyn等[14]研究表明哈茨木霉和綠色木霉發(fā)酵濾液均能顯著降低南方根結(jié)線蟲(chóng)卵的孵化和二齡幼蟲(chóng)的活性。卵是根結(jié)線蟲(chóng)生活史中的一個(gè)重要階段，也是真菌防治作用最敏感的一個(gè)時(shí)期[15]。根結(jié)線蟲(chóng)的外殼有脂質(zhì)層、幾丁質(zhì)層和卵黃層組成，其中幾丁質(zhì)的含量約占整個(gè)卵殼成分的40%[16-17]。在根結(jié)線蟲(chóng)卵殼中幾丁質(zhì)層結(jié)構(gòu)堅(jiān)固是防止真菌侵染的重要屏障[18]。真菌寄生根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵是在細(xì)胞機(jī)械壓力和酶類共同作用下完成的,高活性的幾丁質(zhì)酶可以軟化根結(jié)線蟲(chóng)卵殼降低其卵殼通透性有利于真菌菌絲對(duì)卵殼的穿透[19]。因此，幾丁質(zhì)酶的活性是評(píng)價(jià)真菌生防潛力的重要指標(biāo)。目前對(duì)棘孢木霉的研究多集中在其對(duì)尖孢鐮刀菌[20]和葉枯病菌[21]等病原菌的防治作用上，關(guān)于棘孢木霉對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)有生防作用卻未見(jiàn)報(bào)道。本研究以產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活性和離體拮抗試驗(yàn)為篩選指標(biāo)，建立一種有效的體系，能夠篩選出具有防治根結(jié)線蟲(chóng)潛力的生防菌株，獲得能夠?qū)嶋H應(yīng)用于蔬菜生產(chǎn)中防治根結(jié)線蟲(chóng)的有效菌種資源，為蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)生防菌劑的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

2018年6月于安陽(yáng)滑縣根結(jié)線蟲(chóng)病害發(fā)病的蔬菜大棚中采集了番茄根際土樣和根結(jié)組織樣品，于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基：磷酸二氫鉀1 g，蛋白胨5 g，硫酸鎂0.5 g，葡萄糖10 g，瓊脂20 g，孟加拉紅水溶液3 mL，蒸餾水定容至1 000 mL，pH自然，121 ℃滅菌30 min。臨用前，每100 mL培養(yǎng)基加入1%鏈霉素0.3 mL。

PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g，切成小塊，加入蒸餾水煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入蔗糖20 g，瓊脂20 g，補(bǔ)蒸餾水定容至1 000 mL，pH自然，121 ℃滅菌30 min。

篩選培養(yǎng)基：蔗糖3 g，硝酸鈉2 g，磷酸氫二鉀1 g，氯化鉀0.5 g，硫酸亞鐵0.5 g，硫酸鎂0.5 g，加入膠體幾丁質(zhì)2 g，瓊脂20 g，蒸餾水定容至1 000 mL，pH 7.0，121 ℃滅菌30 min。

種子培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g，切成小塊，加入蒸餾水煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入蔗糖20 g，補(bǔ)蒸餾水定容至1 000 mL，pH自然，121 ℃滅菌30 min。

測(cè)定培養(yǎng)基：硝酸鈉2 g，磷酸氫二鉀1 g，蔗糖3 g，氯化鉀0.5 g，硫酸亞鐵0.5 g，硫酸鎂0.5 g，加入膠體幾丁質(zhì)2 g，蒸餾水定容至1 000 mL，pH 7.0，121 ℃滅菌30 min。

發(fā)酵培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g，切成小塊，加入蒸餾水煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入蔗糖20 g，補(bǔ)蒸餾水定容至1 000 mL，pH自然，121 ℃滅菌30 min。

1.2 方法

1.2.1 真菌菌株分離純化

稱取根際土樣10 g，溶于裝有90 mL無(wú)菌水的250 mL三角瓶中，搖床振蕩10 min，搖勻即為10-1稀釋液，將樣品依次稀釋至10-4，分別涂布于分離培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，挑取單菌落，純化，保存?zhèn)溆谩?/p>

用自來(lái)水將根結(jié)組織上的泥土沖洗干凈，用0.5%次氯酸鈉溶液浸泡5 min，無(wú)菌水沖洗3次，用已滅菌的剪刀將根組織剪成0.5 cm長(zhǎng)的小段，用滅菌的鑷子夾取3～5段根組織接于分離培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待根組織周圍長(zhǎng)出菌絲體，純化，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 幾丁質(zhì)平板透明圈法初篩

選取菌絲體生長(zhǎng)良好的菌株平板，用打孔器打孔，得到直徑為5 mm的菌塊，將菌塊接于篩選培養(yǎng)基上，每個(gè)篩選培養(yǎng)基上接3個(gè)菌塊，每個(gè)處理重復(fù)3次，25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d，觀察菌塊周圍是否出現(xiàn)水解透明圈，測(cè)量透明圈直徑(D)和菌落直徑(d)。

1.2.3 幾丁質(zhì)酶活的測(cè)定

將初篩選出的菌株接于種子培養(yǎng)基(裝液量50 mL/250 mL)中，25 ℃，180 r/min培養(yǎng)48 h后，按0.5%接種量接入測(cè)定培養(yǎng)基(裝液量50 mL/250 mL)中，25 ℃，180 r/min培養(yǎng)48 h后培養(yǎng)液用濾紙過(guò)濾。取10 mL離心管兩支，分別加入1 mL濾液和1 mL含量為1%幾丁質(zhì)膠體，一支離心管于4 ℃放置作為對(duì)照，另一支離心管于40 ℃水浴60 min，水浴結(jié)束后，在樣品和對(duì)照中均加入1 mL DNS溶液，沸水浴10 min，冷卻室溫后，加入2 mL蒸餾水，4 000 r/min離心10 min，取上清液于540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，每個(gè)處理重復(fù)3次。根據(jù)N-乙?；?D-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖含量。酶活力單位定義：在上述條件下，1 min催化底物生產(chǎn)1 μmol N-乙?；?D-氨基葡萄糖所需要的酶量作為1個(gè)酶活力單位(U)。

1.2.4 菌株鑒定

真菌菌株的鑒定綜合其形態(tài)學(xué)特征與rDNA-ITS(Internal Transcribed Spacer)序列分子鑒定結(jié)果。其中真菌形態(tài)學(xué)的鑒定參照《真菌鑒定手冊(cè)》，將真菌接種于PDA固體培養(yǎng)基中，25 ℃培養(yǎng)7 d后觀察菌落的顏色、菌絲形態(tài)、生長(zhǎng)速率等特征，同時(shí)采用顯微鏡觀察其孢子的形態(tài)特征。

分子生物學(xué)鑒定采用真菌試劑盒提取菌體總DNA。以提取的總DNA為模板，利用ITS通用引物 ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGC-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCT TAT TGATATGC-3′)擴(kuò)增供試菌的片段。PCR體系為50 μL體系：DNA模板2 μL，上游引物2 μL，下游引物2 μL，10×PCR buffer 5 μL，dNTP 4 μL，Taq酶1 μL，dd H2O 34 μL。PCR 反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，循環(huán)40次；72 ℃再延伸10 min。PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，檢測(cè)后進(jìn)行測(cè)序分析。測(cè)序結(jié)果使用NCBI中(National Center Forbiotechnology Information)的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast同源性比對(duì)。選取同源性較高的模式菌株的ITS序列，采用mega 5.0軟件中的鄰接(neighbor joining，NJ)法進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。

1.2.5 菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵的寄生試驗(yàn)

將初篩選出的菌株在PDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng)7 d，使菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)平板。用無(wú)菌水沖洗長(zhǎng)滿菌絲體的平板，經(jīng)無(wú)菌濾布過(guò)濾，收集得到孢子懸液。采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整孢子懸液濃度為1×107CFU/mL。將病根洗凈，在解剖鏡下直接挑取新鮮的卵塊，用1%次氯酸鈉震蕩解離卵塊，收集游離卵，經(jīng)2%次氯酸鈉表面消毒后無(wú)菌水沖洗，制成100個(gè)卵/mL的懸浮液。取無(wú)菌12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種1 mL孢子懸液和1 mL卵懸液。每個(gè)處理重復(fù)3次。以加無(wú)菌水作為對(duì)照。在pH自然溫度為25 ℃條件下，培養(yǎng)7 d后，觀察卵的寄生情況，并計(jì)算卵的寄生率。計(jì)算公式：卵寄生率=(被寄生卵數(shù)/加入卵總數(shù))×100%。

1.2.6 菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵孵化的抑制作用

將篩選出的菌株接入種子液培養(yǎng)基(裝液量50 mL/250 mL)中，在pH自然，25 ℃條件下，180 r/min培養(yǎng)48 h后，按0.5%接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基(裝液量50 mL/250 mL)中，在25 ℃條件下，180 r/min培養(yǎng)72 h后，獲得發(fā)酵液，10 000 r/min離心10 min，經(jīng)濾膜孔徑為0.22 μm過(guò)濾器過(guò)濾得到上清液。取無(wú)菌12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種1 mL發(fā)酵上清液和1 mL卵懸液。每個(gè)處理重復(fù)3次。以空白發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照。在25 ℃條件下，分別培養(yǎng)1、3、5、7和9 d后，觀察卵的孵化情況，并計(jì)算卵孵化的相對(duì)抑制率。計(jì)算公式：相對(duì)抑制率=(對(duì)照孵化線蟲(chóng)數(shù)-處理孵化線蟲(chóng)數(shù))/對(duì)照孵化線蟲(chóng)數(shù)×100%。

1.2.7 菌株對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死作用

從洗凈的病根上直接挑取新鮮的卵塊于孵化裝置中進(jìn)行孵化，24 h后開(kāi)始收集幼蟲(chóng)，制備濃度為100 條/mL幼蟲(chóng)懸液。真菌發(fā)酵液的制備方法與上述1.2.5相同。取無(wú)菌12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種1 mL發(fā)酵上清液和1 mL幼蟲(chóng)懸液。每個(gè)處理重復(fù)3次。以空白發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照。在pH自然，25 ℃條件下，分別培養(yǎng)12、24、36、48和60 h后，觀察二齡幼蟲(chóng)的致死情況，線蟲(chóng)僵直不動(dòng)并用挑針觸動(dòng)不動(dòng)者為死蟲(chóng)，線蟲(chóng)呈彎曲蠕動(dòng)狀態(tài)或挑針觸動(dòng)后活動(dòng)者為活蟲(chóng)。計(jì)算公式：致死率=(幼蟲(chóng)死亡數(shù)/幼蟲(chóng)總數(shù))×100%；校正致死率=[(處理線蟲(chóng)致死率-對(duì)照線蟲(chóng)致死率)/(1-對(duì)照線蟲(chóng)致死率)]×100%。

1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

應(yīng)用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用DPS 7.05進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，樣品與樣品組之間用單因素方差分析中的圖基(Tukey)檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 幾丁質(zhì)平板透明圈初篩結(jié)果

從采集的根際土樣和根結(jié)組織上共分離獲得真菌168株。測(cè)定其在幾丁質(zhì)平板上形成透明圈直徑值 (D)和菌落直徑值(d)，得到10株具有較高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活潛力的菌株，結(jié)果見(jiàn)表1，10株菌株的D/d值均高于2，菌株SFC-3的D/d值最高。

表1 菌株透明圈測(cè)定結(jié)果

2.2 幾丁質(zhì)酶活的測(cè)定

對(duì)初篩得到的10株菌株，培養(yǎng)48 h后的幾丁質(zhì)酶活進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果(圖1)顯示，10株菌株的幾丁質(zhì)酶活均大于1 U/mL，與測(cè)定透明圈直徑/菌落直徑的值(D/d)結(jié)果相一致，D/d值較高的菌株，幾丁質(zhì)酶活值也較高。其中酶活性最高的菌株為SFC-3，其酶活為2.07 U/mL。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。圖1 不同菌株幾丁質(zhì)酶活Figure 1 Chitinase activity in different strains

2.3 菌株鑒定結(jié)果

菌株SFC-3在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落初期為白色，中心淺綠色，氣生菌絲纖細(xì)、羊毛狀，由中心向四周散布，菌落背面無(wú)色，菌落中期逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)闇\綠色，中心呈深綠色[圖2(a)]，氣生菌絲轉(zhuǎn)變?yōu)槊扌鯛?，菌落后期整體呈深綠色，在顯微鏡下觀察其分生孢子為綠色，形狀呈球形或橢球型，直徑約為3 μm[圖2(b)]。根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》初步判斷菌株SFC-3為木霉屬。將菌株SFC-3 的ITS序列的測(cè)定結(jié)果在GenBank上進(jìn)行Blast比對(duì)分析，選取與其相近的模式菌株構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖3所示。在進(jìn)化樹(shù)中，菌株SFC-3與棘孢木霉(Trichodermaasperellum)有最高相似度，同源性達(dá)到了99%。結(jié)合其形態(tài)學(xué)特征，鑒定菌株SFC-3為棘孢木霉(Trichodermaasperellum)。

圖2 SFC-3在PDA平板上形成的菌落(a)及顯微鏡下的孢子的形態(tài)特征(b)Figure 2 Morphological characteristics of colonies(a)and spores under microscope of SFC-3 on PDA plates(b)

圖3 基于ITS rDNA序列菌株SFC-3的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Figure 3 Phylogenetic tree of strain SFC-3 based on ITS rDNA sequences

2.4 不同菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵的寄生結(jié)果

不同菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的寄生結(jié)果如圖4所示。菌株對(duì)蟲(chóng)卵的寄生率與其產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活(表1)的值呈正相關(guān)，產(chǎn)酶活能力越強(qiáng)，對(duì)蟲(chóng)卵的寄生率越高，其中寄生率最低的菌株為SFC-1，寄生率為41.29%；寄生率最高的菌株為SFC-3，其寄生率達(dá)到了78.86%，與其他菌株相比差異極顯著(P<0.01)；其余8個(gè)菌株的寄生率為43%～75%。菌株SFC-3對(duì)卵的寄生作用如圖5所示，對(duì)照組中的蟲(chóng)卵其表面光滑，內(nèi)容物均勻[圖5(a)]，菌株SFC-3處理組中被寄生的卵長(zhǎng)滿菌絲體 [圖5(b)]。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。圖4 不同菌株對(duì)蟲(chóng)卵的寄生結(jié)果Figure 4 Parasitic results of different strains on eggs

(a)對(duì)照CK;(b) 菌株SFC-3處理。圖5 菌株SFC-3對(duì)蟲(chóng)卵的寄生作用Figure 5 The parasitic effect of the strain SFC-3 on the eggs

2.5 菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵孵化的抑制作用

菌株SFC-3發(fā)酵濾液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化的影響如圖6所示：在第1 天菌株SFC-3發(fā)酵濾液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵孵化抑制率就達(dá)到了85%以上；第3 天，發(fā)酵液對(duì)蟲(chóng)卵的抑制率達(dá)到了90.81%；在第7天菌株SFC-3發(fā)酵濾液對(duì)線蟲(chóng)卵孵化抑制率最高達(dá)96.51%。這說(shuō)明菌株SFC-3對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵孵化有良好的抑制效果。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。圖6 菌株SFC-3對(duì)線蟲(chóng)卵孵化的相對(duì)抑制率Figure 6 Relative inhibition rate of the strain SFC-3 on hatching of nematode eggs

2.6 菌株對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死作用

菌株SFC-3對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死作用如圖7所示，隨著時(shí)間增加，菌株對(duì)二齡幼蟲(chóng)的校正致死率隨之增長(zhǎng)，在24 h達(dá)到了85.64%，在48 h達(dá)到最高點(diǎn)93.37%。這表明菌株SFC-3在防治根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)害中有良好的潛力。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。圖7 菌株SFC-3對(duì)二齡幼蟲(chóng)的校正致死率Figure 7 Corrected mortality of the strain SFC-3 against the second juveniles

3 討論與結(jié)論

根結(jié)線蟲(chóng)的生活史是從蟲(chóng)卵到四齡成蟲(chóng)，在整個(gè)階段中卵的孵化至二齡幼蟲(chóng)的形成階段是暴露在根外土壤中的，其余階段都是寄生在根組織中，因此從線蟲(chóng)卵孵化到二齡幼蟲(chóng)的形成是防治根結(jié)線蟲(chóng)的重要時(shí)期。研究表明:利用SFC-3發(fā)酵濾液作用根結(jié)線蟲(chóng)卵第1 天就對(duì)卵孵化抑制率達(dá)到了85%以上，因此，可以從蟲(chóng)卵孵化第1 天開(kāi)始使用菌株SFC-3發(fā)酵濾液來(lái)抑制蟲(chóng)卵孵化，不但對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)防治效果較好，而且可以有效節(jié)約防治時(shí)間和生產(chǎn)成本。菌株殺死蟲(chóng)卵主要是通過(guò)寄生作用，卵囊外層為膠質(zhì)，真菌菌絲可以進(jìn)行穿透，加上真菌在生長(zhǎng)過(guò)程中的一些分泌物及代謝產(chǎn)物如蛋白酶類，水解酶類會(huì)破壞卵的結(jié)構(gòu)影響其正常的發(fā)育從而殺死蟲(chóng)卵；菌株殺死二齡幼蟲(chóng)則主要靠其高活性的幾丁質(zhì)酶溶解二齡幼蟲(chóng)外殼致其死亡。從機(jī)理和抑制效果來(lái)看，該菌株在對(duì)蟲(chóng)卵的致死效果要優(yōu)于對(duì)二齡幼蟲(chóng)的致死效果。

研究從番茄根際土壤篩選到一株高效抗蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)的菌株SFC-3，經(jīng)鑒定為棘孢木霉。在實(shí)驗(yàn)室條件下，通過(guò)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵寄生實(shí)驗(yàn)和二齡幼蟲(chóng)致死率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：菌株SFC-3對(duì)蟲(chóng)卵的寄生率最高達(dá)78.86%，對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)蟲(chóng)卵孵化的相對(duì)抑制率最高達(dá)96.51%，對(duì)二齡幼蟲(chóng)的校正死亡率達(dá)到93.37%。因此，菌株SFC-3是一株具有潛力的抗根結(jié)線蟲(chóng)菌株。