張 歡， 張鳳英， 楊伊真， 劉 訊, 張延威

(貴州師范學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)550018)

茶樹籽渣料是茶樹籽榨油后的剩余物，又名茶籽餅粕，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分。其粗脂肪、粗蛋白、粗纖維和粗皂苷的含量為3.85%、16.36%、20.32%和22.46%[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2011年全國(guó)茶園面積已達(dá)22.07萬(wàn)hm2，按每667 m2茶園產(chǎn)茶樹籽50 kg進(jìn)行計(jì)算，全國(guó)茶樹籽可產(chǎn)茶樹籽油近5萬(wàn)t[2]，其剩余物茶樹籽渣料產(chǎn)量十分可觀。但長(zhǎng)期以來，茶樹籽渣料沒有得到合理利用，除可用于茶皂素生產(chǎn)及農(nóng)家肥料[1]外，多數(shù)作為廢料丟棄，不僅形成資源浪費(fèi)，還在一定程度上造成環(huán)境污染。目前，關(guān)于茶樹籽渣料的資源利用途徑研究較少，多為其同科同屬植物種子油茶籽出油后殘?jiān)馁Y源利用。如在食用菌栽培方面的利用研究，目前以油茶籽渣料為多。葉子茂等[3]利用油茶餅替代棉籽殼進(jìn)行平菇栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)油茶餅和棉籽殼添加比例低于1∶1時(shí)，菌絲吃料速度增加，且油茶餅和棉籽殼添加比例各為40%時(shí)，平菇菌絲體生長(zhǎng)最好。王海營(yíng)[4]研究油茶餅粕代料栽培3種食用菌的結(jié)果表明，不同菌類的菌絲體及子實(shí)體在油茶餅粕代料木屑的培養(yǎng)基上均能正常生長(zhǎng)，且具有較高的生物學(xué)效率。劉云[5]研究油茶枯餅為栽培基質(zhì)培養(yǎng)紫木耳、平菇，為油茶枯餅的綜合利用提供了科學(xué)依據(jù)。郭秋明等[6]研究油茶餅代料栽培金針菇表明，油茶餅廢渣代替麥麩和白糖栽培食用菌是可行的。綜上，茶樹籽渣料與油茶籽渣料作為同科同屬植物的殘?jiān)?，能否用作食用菌的栽培基質(zhì)尚未可知，需開展進(jìn)一步的研究。

茶樹籽渣料產(chǎn)出大且富含可利用的營(yíng)養(yǎng)成分，因此，選用茶樹籽出油后的渣料作為栽培基質(zhì)添加料，進(jìn)行平菇栽培，為平菇的栽培探索新的栽培原料，為茶樹籽渣料的資源化利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種與茶樹籽渣料 菌種：平菇Pleurotus ostreatus，由貴州大學(xué)提供。

茶樹籽渣料：茶樹籽出油后的渣料。由貴州元亨山茶葉籽生物科技有限公司提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 PDA固體培養(yǎng)基：稱取馬鈴薯200 g，切塊，水煮30 min，過濾，取濾液，加入葡萄糖20 g，瓊脂15 g，加熱溶解，補(bǔ)水至1 000 mL。滅菌條件：121℃，30 min。

菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：稱取馬鈴薯200 g，切塊，水煮30 min，過濾，取濾液，加入蛋白胨2 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，氯化鈉0.1 g，維生素B1 4 mg，補(bǔ)水至1 000 mL。滅菌條件：121℃，30 min。

1.2 方法

1.2.1 菌種活化與發(fā)酵 制備PDA固體培養(yǎng)基平板，將平菇菌種接種到平板上，于26℃下恒溫培養(yǎng)7 d，活化菌種。將活化好的平板菌種，接種于裝有150 mL菌種發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，置于搖床，于26℃、220 r/min條件下培養(yǎng)6 d。

1.2.2 栽培料制備 茶樹籽渣料預(yù)處理：茶樹籽渣料平攤晾曬1個(gè)月。將茶樹籽渣料預(yù)處理好后，按設(shè)計(jì)栽培料配方(表1)進(jìn)行制備。按照設(shè)定的栽培料配方，定量計(jì)算各處理物料的質(zhì)量，稱量，將不溶于水的原料干拌拌勻，溶于水的原料加水溶解，后再與干料拌勻。拌勻后物料含水量保持在60%～65%(感官指標(biāo)是用手抓一把培養(yǎng)料，指縫中有水，但不往下滴)。采用半熟料堆置方法，將拌好的物料悶堆1 d后，裝于12 cm×24 cm聚乙烯袋中，每個(gè)處理12袋，每袋裝料300 g。完成后將栽培袋放入高壓蒸汽鍋內(nèi)于121℃下滅菌2 h。

表1 平菇5種茶樹籽渣料栽培配方

1.2.3 栽培袋接種與菌絲體培養(yǎng) 將滅菌的栽培袋于超凈工作臺(tái)中接種制備好的液體菌種，之后轉(zhuǎn)入到恒溫培養(yǎng)箱中，于26℃條件下進(jìn)行恒溫培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，溫箱內(nèi)空氣相對(duì)濕度保持在60%～65%，每天通風(fēng)1～2次。自菌絲開始萌發(fā)且吃料定植后開始記錄各處理菌絲體生長(zhǎng)速率。菌絲體生長(zhǎng)速率測(cè)定采用王海營(yíng)等[7]的方法，每個(gè)處理隨機(jī)抽取5袋，沿菌絲生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行劃線，每隔5 d劃線1次，利用刻度尺測(cè)量記錄兩條線之間的距離，取平均值除以天數(shù)，即為菌絲體生長(zhǎng)速率。

1.2.4 出菇期管理 菌絲體長(zhǎng)滿袋后繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)栽培袋表面出現(xiàn)大量的黃褐色水珠時(shí)，將栽培袋自恒溫培養(yǎng)箱移至室內(nèi)，進(jìn)入出菇期管理。將菌袋口打開，室內(nèi)溫度控制在20～25℃，濕度控制在85%～95%。當(dāng)子實(shí)體達(dá)到八九分成熟，即菌蓋的顏色從外圍到內(nèi)側(cè)由淺變深，菌蓋外圍開始向上卷起，菌體孢子還沒有大面積向外擴(kuò)散時(shí)及時(shí)采收，采收時(shí)記錄子實(shí)體的重量(鮮重)。

全部采收后，將各處理各栽培袋中的栽培料分別取出，烘干，稱量并記錄。

1.2.5 生物學(xué)效率和碳氮比測(cè)定 生物學(xué)效率測(cè)定：生物學(xué)效率=(M1/M2)×100%。其中，M1為各處理各袋的平菇子實(shí)體鮮重(g)，M2為各處理各袋采收后的栽培料干重(g)。

碳氮比測(cè)定：有機(jī)碳采用重鉻酸鉀外加熱法[8]，氮含量測(cè)定采用半微量開氏法[9]。分別測(cè)定各處理栽培料栽培前與出菇后的有機(jī)碳和總氮含量，計(jì)算碳氮比。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel和SPSS，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配方茶樹籽渣料對(duì)平菇生長(zhǎng)的影響

2.1.1 平菇菌絲體生長(zhǎng)速率 接種平菇菌種后的栽培袋，自第3天起菌絲體開始生長(zhǎng)。從圖1可知，對(duì)照(CK)的菌絲體生長(zhǎng)速率最高，為0.41 cm/d，其他處理的菌絲體生長(zhǎng)速率隨著茶樹籽渣料比例的增加而下降，G4處理的菌絲體生長(zhǎng)速率最低，為0.31 cm/d。方差檢驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照的菌絲體生長(zhǎng)速率與G1處理無明顯差異，G1、G2、G3之間和G2、G3、G4之間的生長(zhǎng)速率也無明顯差異，G1與G4間差異顯著。

圖1 平菇菌絲體在不同配方茶樹籽渣料的生長(zhǎng)速率

2.1.2 平菇子實(shí)體產(chǎn)量及栽培料生物學(xué)效率 從表2可知，各處理平菇子實(shí)體產(chǎn)量均高于對(duì)照，且差異顯著，添加茶樹籽渣料處理的子實(shí)體產(chǎn)量明顯增加。各處理子實(shí)體產(chǎn)量隨茶樹籽渣料含量的提高而下降，其中G1處理的子實(shí)體產(chǎn)量最高，為140.69 g/袋，但與G2和G3處理的子實(shí)體產(chǎn)量無顯著差異。各處理的生物學(xué)效率均高于對(duì)照，且差異顯著，添加茶樹籽渣料后的培養(yǎng)料的生物學(xué)效率均明顯提高。各處理的生物學(xué)效率也隨茶樹籽渣料含量的提高而下降，其中G1處理的生物學(xué)效率最高，為99.80%。

表2 不同配方茶樹籽渣料平菇的產(chǎn)量及其生物學(xué)效率

2.1.3 不同配方茶樹籽渣料含量與平菇生長(zhǎng)指標(biāo)的相關(guān)性 經(jīng)計(jì)算，茶樹籽渣料與菌絲體生長(zhǎng)速率、平菇子實(shí)體產(chǎn)量及栽培料的生物學(xué)效率的相關(guān)系數(shù)分別為-0.444、-0.487和-0.794。平菇的菌絲體生長(zhǎng)速率與茶樹籽渣料含量呈顯著負(fù)相關(guān)；平菇子實(shí)體產(chǎn)量與茶樹籽渣料含量呈極顯著負(fù)相關(guān)；栽培料的生物學(xué)效率與茶樹籽渣料含量呈極顯著負(fù)相關(guān)。

2.2 不同配方茶樹籽渣料在栽培前與出菇后的碳氮比變化

從表3可知，添加茶樹籽渣料后，各處理的碳氮比與對(duì)照相比均明顯下降。與對(duì)照組相比，各處理出菇后的有機(jī)碳含量均顯著減少，總氮含量變化較小。通過方差分析，除G4處理碳氮比下降率低于對(duì)照組，其于處理的碳氮比下降率與對(duì)照組均無顯著差異。

表3 不同栽培料栽培前與栽培后有機(jī)碳及總氮含量

3 結(jié)論與討論

研究以廢棄茶樹籽渣料為木屑料替代培養(yǎng)料，設(shè)計(jì)不同的平菇栽培基質(zhì)配方，以木屑料為對(duì)照組，以平菇子實(shí)體產(chǎn)量、菌絲體生長(zhǎng)速率、生物學(xué)效率及碳氮比為指標(biāo)，驗(yàn)證茶樹籽渣料替代木屑后的平菇栽培效果。研究表明，平菇菌絲體在不同比例茶樹籽渣料的栽培料中均能正常生長(zhǎng)，菌絲體生長(zhǎng)速率隨著茶樹籽渣料比例的增加而下降；栽培料中添加茶樹籽渣料后，平菇子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率均提高，且隨添加茶樹籽渣料比例的增加，子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率逐漸下降。綜合各指標(biāo)，篩選得到栽培效果最好的配方為G1，即茶樹籽渣料10%、玉米芯88%、石膏1%、石灰1%的配方為最佳栽培配方。

平菇栽培中，栽培料中茶籽渣料比例與菌絲體生長(zhǎng)、子實(shí)體產(chǎn)量及生物學(xué)效率負(fù)相關(guān)。王海營(yíng)等[7]對(duì)油茶餅粕栽培平菇的研究表明，不添加或低比例添加油茶餅粕時(shí)，平菇的生物學(xué)效率和菌絲體生長(zhǎng)速率是較高的，超出20%的添加量后，隨著栽培料中油茶餅粕含量的增加，平菇的生物學(xué)效率逐漸降低，菌絲體生長(zhǎng)速率也變緩慢，其原因可能是油茶餅粕中殘留的茶皂素達(dá)到一定量會(huì)抑制菌絲體生長(zhǎng)和子實(shí)體的形成。余嬌[10]研究不同食用菌栽培利用油茶粕的結(jié)果表明，平菇的菌絲生長(zhǎng)隨栽培料中油茶餅的增加而越來越緩慢，其原因是受茶皂素含量的影響。試驗(yàn)表明，添加不同比例茶樹籽渣料的處理與對(duì)照組(木屑料)相比，子實(shí)體產(chǎn)量及生物學(xué)效率均高于對(duì)照，其原因可能是茶樹籽渣料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，有利于平菇菌絲體的生長(zhǎng)和子實(shí)體的形成。栽培料中茶樹籽渣料在10%～20%時(shí)，平菇的菌絲體生長(zhǎng)速率、子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率均相對(duì)較高，各處理的菌絲體生長(zhǎng)速率、平菇子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率都表現(xiàn)出隨著茶樹籽渣料比例的增加而下降的趨勢(shì)，這與王海營(yíng)等[7]的研究結(jié)果基本一致，其原因可能是茶樹籽渣料中含有的茶皂素影響平菇菌絲體生長(zhǎng)和子實(shí)體形成。

栽培料的碳氮比在食用菌栽培中非常重要。張潤(rùn)生等[11]研究結(jié)果表明，平菇在栽培料碳氮比為10∶1～90∶1均能形成正常的子實(shí)體。鐘雪美等[12-13]在研究碳氮比對(duì)平菇生長(zhǎng)影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，一定比例的碳氮比影響平菇菌絲體生長(zhǎng)及子實(shí)體的形成；平菇在栽培過程中，栽培料的碳氮比普遍下降；碳氮比在50∶1～60∶1時(shí)平菇產(chǎn)量和生物學(xué)效率均最高。試驗(yàn)表明，各處理栽培料的碳氮比在48∶1～71∶1，其子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率均高于對(duì)照，出菇后栽培料有機(jī)碳含量均顯著減少且碳氮比均下降；栽培效果最好的栽培料碳氮比60.32∶1，生物學(xué)效率達(dá)99.8%，與鐘雪美的研究結(jié)果一致。

研究表明，茶樹籽渣料作為平菇的栽培料是可行的，一定量的添加可明顯提高平菇的產(chǎn)量，同時(shí)也實(shí)現(xiàn)將茶樹籽渣料資源化利用。研究只是初步研究，在茶樹籽渣料的預(yù)處理、栽培料的合理碳氮比等方面還需進(jìn)行深入研究，以提高栽培平菇或其他食用菌的產(chǎn)量和茶樹籽渣料的利用率。