王巖

(項(xiàng)城市第一人民醫(yī)院輸血科， 河南 周口 466200)

新生兒同種免疫性溶血病為新生兒常見(jiàn)病，其發(fā)生是由于母嬰血型不合發(fā)生免疫性溶血，主要發(fā)生在Rh血型、ABO血型，以ABO最常見(jiàn)，臨床表現(xiàn)為肝脾腫大、黃疸、貧血、水腫等，若治療不及時(shí)，則可引發(fā)膽紅素腦病，發(fā)生不可逆性神經(jīng)損傷，對(duì)新生兒生長(zhǎng)發(fā)育及身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1-3]。臨床對(duì)同種免疫性溶血病早期進(jìn)行準(zhǔn)確診斷并采取針對(duì)性治療措施可降低膽紅素腦病發(fā)生率，提高治療效果[4]。既往針對(duì)同種免疫性溶血病臨床多通過(guò)試管檢測(cè)法對(duì)患兒血液進(jìn)行檢測(cè)，其步驟繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，且在檢查過(guò)程中受到的干擾因素較多，無(wú)法確保檢測(cè)準(zhǔn)確性[5]。卡式微柱凝膠技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單迅速、標(biāo)本用量少、敏感性高、結(jié)果判斷容易等優(yōu)勢(shì)，對(duì)疾病診斷具有積極意義[6]。本文選擇本院269例疑似同種免疫性溶血病新生兒作為研究對(duì)象，旨在探究卡式微柱凝膠技術(shù)的應(yīng)用效果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2018年10月至2020年12月疑似同種免疫性溶血病新生兒269例作為研究對(duì)象，其中女125例，男144例，日齡1～23 d，平均(12.36±4.32)d；體質(zhì)量2527～4236 g，平均(3354.17±124.87)g；119例A型，150例B型。研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有同種免疫性溶血病新生兒均符合《胎兒新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)》[7]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有患兒生命體征平穩(wěn)，意識(shí)清醒；均存在不同程度黃疸、貧血、肝脾大等癥狀，母親血型均為O型；均采用卡式微柱凝膠技術(shù)、傳統(tǒng)試管技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)；家屬均知情本研究，簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：重要器官功能障礙；先天性畸形、腦癱、心臟?。淮嬖谳斞?、換血史；合并嚴(yán)重感染性疾病。

1.3 方法

1.3.1 試劑、儀器

安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司提供的大容量低速離心機(jī)(KDC-1044L)、戴安娜全自動(dòng)血型儀、戴安娜公司提供的新生兒ABO凝膠卡(DG GEL Newborn)、戴安娜公司提供的抗人球蛋白卡(DG Gel Coombs)、上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞試劑、上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的抗人球蛋白試劑、瑞士DiaMed公司提供的37 ℃恒溫孵育箱、雙鶴藥業(yè)公司提供的0.9%氯化鈉溶液。

1.3.2 卡式微柱凝膠技術(shù)

抽取約3 mL靜脈血置于內(nèi)含乙二胺四乙酸的抗凝管內(nèi)，搖勻后進(jìn)行離心(轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)間10 min，半徑8 cm)，分離血漿后，采用三洗紅細(xì)胞將紅細(xì)胞進(jìn)行紅細(xì)胞懸液制備，完成制備后，加入新生兒ABO凝膠卡并實(shí)施離心，再對(duì)樣本中血型、直接抗人球蛋白試驗(yàn)觀察、記錄；檢測(cè)完成后將血清、紅細(xì)胞放散液加入標(biāo)注A、B、O孔抗人球凝膠卡中，再將標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞試劑滴入對(duì)應(yīng)抗人球凝膠卡中，對(duì)其抗體放散及抗體游離情況實(shí)施分析、記錄。

1.3.3 傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)

抽取約3 mL靜脈血置于內(nèi)含乙二胺四乙酸的抗凝管內(nèi)，搖勻后進(jìn)行離心(轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)間10 min，半徑8 cm)，采用0.9%氯化鈉溶液對(duì)血液樣本中紅細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)清洗3次，配制有效懸液，將1滴紅細(xì)胞懸液加入到含有2滴抗人球蛋白試劑試管中，然后離心(轉(zhuǎn)速2000 r/min，時(shí)間1 min，半徑8 cm)處理，觀察記錄抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果；標(biāo)記相關(guān)試管，再向試管內(nèi)加入紅細(xì)胞試劑，再加入離心處理的患兒血清，置于37℃環(huán)境下靜置孵育1 h，培養(yǎng)完成后，采用0.9%氯化鈉溶液清洗試管，清洗完畢后將抗人球蛋白試劑加入并離心(轉(zhuǎn)速2000 r/min，時(shí)間3 min，半徑8 cm)，結(jié)束后由檢測(cè)人員對(duì)抗體放散、抗體游離結(jié)果實(shí)施分析、記錄。

1.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)均為陽(yáng)性則可確診為同種免疫性溶血?。环派⒃囼?yàn)為陽(yáng)性即可確診；抗體游離、直接抗人球蛋白均為陽(yáng)性可確診；只有抗體游離或直接抗人球蛋白陽(yáng)性則為疑似；三者均為陰性即可排除同種免疫性溶血病。

1.5 觀察指標(biāo)

分析臨床檢查結(jié)果，比較兩種檢查方式行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床檢查結(jié)果

269例疑似同種免疫性溶血病新生兒經(jīng)檢查結(jié)果確診為同種免疫性溶血病79例，陽(yáng)性率為29.37%，其中A型43例，B型36例。見(jiàn)表1。

表1 臨床檢查結(jié)果(n)

2.2 兩種檢查方式陽(yáng)性檢出率比較

采用卡式微柱凝膠技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病檢出率均高于傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩種檢查方式陽(yáng)性檢出率比較[n(%)]

3 討論

新生兒同種免疫性溶血病是由于在遺傳過(guò)程中胎兒從父親基因中繼承部分母親不具備的紅細(xì)胞抗原，或新生兒與母親不合所致，當(dāng)胎兒紅細(xì)胞從臍帶流入母親身體內(nèi)，母體會(huì)發(fā)生免疫性抗體，這一抗體再經(jīng)過(guò)胎盤或臍帶對(duì)胎兒紅細(xì)胞產(chǎn)生影響，進(jìn)而出現(xiàn)貧血、肝臟腫大、黃疸、水腫等癥狀，嚴(yán)重者可造成死亡[8-9]。為保證胎兒健康，早發(fā)現(xiàn)、早確診溶血病并予以針對(duì)性治療可減少相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生，改善預(yù)后效果。

針對(duì)新生兒同種免疫性溶血病，臨床多通過(guò)傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行診斷，其在檢查過(guò)程中需反復(fù)清洗血液樣本中紅細(xì)胞，且步驟較為繁瑣，易受到人為操作影響，導(dǎo)致檢查準(zhǔn)確度較低，影響疾病早期治療[10]。近年來(lái)，隨科學(xué)技術(shù)水平發(fā)展，我國(guó)臨床檢測(cè)技術(shù)也得到了發(fā)展、提升，卡式微柱凝膠技術(shù)逐漸應(yīng)用于新生兒同種免疫性溶血病的診斷中，可有效提高其檢測(cè)效率，提升診斷準(zhǔn)確度；檢測(cè)原理上卡式微柱凝膠技術(shù)通過(guò)應(yīng)用稀釋液，進(jìn)而使凝膠配置工作有效開(kāi)展，配置過(guò)程中，若抗體與紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，其反應(yīng)產(chǎn)物可在凝膠中聚集或在凝膠表面漂浮，便于檢測(cè)人員觀察檢測(cè)結(jié)果；若抗體與紅細(xì)胞無(wú)反應(yīng)結(jié)合，則會(huì)沉積在凝膠底部，以此判斷患兒為陰性[11]。此外，在卡式微柱凝膠技術(shù)再通過(guò)合理使用抗人球蛋白試劑可進(jìn)一步提升試驗(yàn)敏感度。對(duì)于新生兒同種免疫性溶血病的診斷中常用方式有抗體放散、抗體游離、直接抗人球蛋白試驗(yàn)等，其中抗體放散試驗(yàn)通過(guò)放散將附著在紅細(xì)胞上抗體放散出，再與相應(yīng)抗原結(jié)合表現(xiàn)為陽(yáng)性，說(shuō)明紅細(xì)胞被母體抗體致敏，以此進(jìn)行判斷，其靈敏度較高；直接抗人球蛋白試驗(yàn)可檢測(cè)紅細(xì)胞是否由IgG抗體產(chǎn)生反應(yīng)，但陽(yáng)性率較低，這是由于新生兒發(fā)育尚未完全，紅細(xì)胞上抗原較少，造成抗體吸附也較少，難以實(shí)現(xiàn)凝集反應(yīng)，故陽(yáng)性率較低；抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性與母體內(nèi)IgG抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)有關(guān)，其陽(yáng)性可表明患兒存在同種免疫性溶血病，但由于游離抗體在患兒體內(nèi)存在時(shí)間較短，故其準(zhǔn)確度較差[12-13]。因此為避免漏診情況發(fā)生，臨床多將3項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷，同時(shí)為防止樣本抗凝效果不佳出現(xiàn)纖維蛋白進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，臨床工作人員需對(duì)標(biāo)本質(zhì)量嚴(yán)格把關(guān)。本文中269例疑似同種免疫性溶血病新生兒經(jīng)檢查結(jié)果確診為同種免疫性溶血病79例，陽(yáng)性率為29.37%，分別采用卡式微柱凝膠技術(shù)和傳統(tǒng)試管檢測(cè)法行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)，結(jié)果顯示，采用卡式微柱凝膠技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病檢出率均高于傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)(P<0.05)，可見(jiàn)采用卡式微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病進(jìn)行檢查可提高檢出率，可為臨床治療方案制定提供參考，進(jìn)而改善預(yù)后效果。

綜上所述，采用卡式微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病進(jìn)行檢查可提高檢出率，可為臨床治療方案制定提供參考，進(jìn)而改善預(yù)后效果。