趙 麗 ，陳子龍 ，閔 朕 ，呂 倩 ，胡本祥

（1. 陜西省渭南市食品藥品檢驗所，陜西 渭南 714000； 2. 陜西中醫(yī)藥大學，陜西 西安 712046）

胃力通膠囊是由陜西中醫(yī)藥大學生藥教研室胡本祥教授開發(fā)研制的治療胃病的中藥制劑，由太白米、朱砂七、黃芪、延胡索制成［1］。方中，君藥太白米性溫，味辛、微甘苦，具有寬胸理氣、健胃、鎮(zhèn)痛等功效［2－4］；臣藥朱砂七性涼，味苦、微澀，具有清熱解毒、涼血、活血等功效［5－6］；佐藥黃芪性微溫，味甘，補氣升陽，生津養(yǎng)血，固表止汗［7－8］，既與太白米共增理氣之功效，又能佐助朱砂七清熱活血之功效；延胡索性溫，味辛、苦，具有活血、行氣、止痛功效［9－10］，既助君臣藥之功，又可調(diào)和諸藥。全粉末膠囊用量大，使用不便。本研究中優(yōu)化了胃力通膠囊的提取及制備工藝，為藥學研究和臨床開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2596 型高效液相色譜儀（美國沃特世公司），配有2996 型紫外檢測器；SL 型科偉水浴鍋（余姚長豐儀表廠）；DHG－924A 型電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；GB204 型梅特勒電子天平（梅特勒－托利多公司，精度為萬分之一）；賽多利斯MSA125P－CE 型電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司，精度為十萬分之一）；SX2 型實驗電阻爐（常州市昊江電熱器材廠）；KQ－200KDE 型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為200 W，頻率為40 kHz）；RE －52cs 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ －D（Ⅲ）型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.2 試藥

大黃素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110756－200110，含量以100%計）；甲醇（色譜純，美國Fishers 公司）；水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。太白米（購自陜西省太白縣）；朱砂七，黃芪（批號為171101），延胡索（批號為 170701），均購自陜西省西安市藥材市場。上述藥材均經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學生藥教研室胡本祥教授鑒定為正品［11］。

2 方法與結(jié)果

2.1 太白米出粉率考察

取太白米適量，粉碎，過80 目篩，備用。取粉末3 份，每份 100 g，80 ℃烘2 h，粉碎，過80 目篩，計算出粉率。結(jié)果出粉率分別為 97.74% ，97.15% ，97.21% ，平均出粉率為97.37%。

2.2 大黃素含量測定［12］

2.2.1 大黃素提取物制備

按處方量的1／7 稱取朱砂七、黃芪和延胡索藥材，置燒杯中，加水煎煮1 h，濾過，濾液蒸干，粉碎，過80 目篩，備用。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：HypersilGoldC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇 － 水（85 ∶15，V ／ V）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。理論板數(shù)以大黃素峰計不低于3 000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.emodinA. Reference solution B.Test solutionFig.1 HPLC chromatograms

2.2.3 溶液制備

取大黃素對照品10.0 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，精密量取2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取樣品粉末0.05 g，精密稱定，置 25 mL 容量瓶中，加甲醇15 mL，超聲使其溶解完全，放冷，加甲醇稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液5 mL，加鹽酸1 mL，加熱水解30 min，將水解液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水20 mL，用氯仿萃取3 次（20，10，10 mL），合并氯仿液，揮干，殘渣加甲醇溶解，并分次轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，作為供試品溶液。

2.2.4 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取2.2.3 項下對照品溶液 1，2，4，6，8，10 μL，按 2.2.2 項下色譜條件進樣測定。以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y ＝ 3 865 851.697 4 X －8 962.331 5（ R2＝ 0.999 8，n ＝ 6）。結(jié)果表明，大黃素進樣量在 0.02 ～ 0.20 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

檢測限與定量限考察：吸取2.2.3 項下對照品溶液適量，用甲醇逐級稀釋，按2.2.2 項下色譜條件進樣測定，分別以信噪比（S ／ N）為 3 ∶1 和 10 ∶1 時計算檢測限和定量限。結(jié)果大黃素的檢測限為0.02 μg，定量限為 0.04 μg。

精密度試驗：精密吸取2.2.3 項下對照品溶液10μL，按2.2.2 項下色譜條件于1 d 內(nèi)重復進樣測定6 次，連續(xù)3 d，記錄峰面積。結(jié)果大黃素日內(nèi)精密度的 RSD 為0.31% （n ＝ 6），日間精密度的 RSD 為 1.03% （n ＝ 3），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取供試品溶液10 μL，分別于配制后 0，2，4，6，8，12，24 h 時按 2.2.2 項下色譜條件測定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD 為 0.50% （n ＝ 7），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取樣品6 份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按2.2.2 項下色譜條件進樣測定，并計算含量。結(jié)果的 RSD 為 0.67%（n ＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品粉末6 份，精密稱定，每份0.025 g，分別加入大黃素對照品 0.810 0 mg，依法制備供試品溶液，按2.2.2 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。詳見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n ＝6）Tab.1 Results of the recovery test（n ＝ 6）

2.3 提取工藝優(yōu)選

2.3.1 工藝優(yōu)選

取處方量1／7 的朱砂七、黃芪和延胡索藥材，精密稱定，根據(jù)預試驗水提單因素結(jié)果及文獻［12］以加水量（因素 A）、煎煮次數(shù)（因素 B）、煎煮時間（因素 C）為水提取工藝的考察因素進行 L9（34）正交試驗。設計因素水平見表2。

表2 提取工藝 L9（34）正交試驗因素水平表Tab.2 Factors and levels of the L9（34）orthogonal test for the extraction process

表3 和表 4 中均以出膏率（a）和大黃素含量（b）為評價指標。由表3可知，以出膏率為評價指標3 個因素的極差值大小排列順序為B ＞A ＞C，以大黃素含量為評價指標3 個因素的極差值大小排列順序為A ＞B ＞C。根據(jù)出膏率和大黃素含量各因素對應的 K1，K2，K3綜合分析得理論最佳提取工藝為A3B3C1。由表4 方差分析結(jié)果可知，以出膏率為評價指標，加水量、煎煮次數(shù)有顯著差異，煎煮時間無顯著差異；以大黃素含量為評價指標，加水量、煎煮次數(shù)和煎煮時間均有顯著差異。綜合考慮，確定理論最佳工藝為A3B3C1，即加15 倍量水，煎煮3 次，每次1 h。

表3 提取工藝 L9（34）正交試驗結(jié)果Tab.3 Results of the L9（34）orthogonal test for the extraction process

表4 提取工藝 L9（34）正交試驗方差分析結(jié)果Tab.4 Results of ANOVA of the L9（34）orthogonal test for the extraction process

2.3.2 驗證試驗

按處方量的1／7 稱取藥材，按優(yōu)化工藝制備3 批樣品，濾過，濾液蒸干，粉碎，過80 目篩，依法制備供試品溶液測定大黃素的含量；將試驗濾液濃縮，置恒重蒸發(fā)皿中水浴蒸干，殘渣105 ℃干燥3 h，轉(zhuǎn)移至干燥器中冷卻30 min，迅速稱定質(zhì)量，測定出膏率。結(jié)果大黃素含量分別為 11.193 7，11.390 0，11.678 4 mg ／g，平均含量為 11.420 7 mg ／g，RSD 為 2.13% （n ＝3）；出膏率分別為 40.10% ，41.07% ，41.03% ，平均出膏率為40.73% ，RSD 為 1.35% （n ＝3），表明優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、可靠。

2.4 制備工藝優(yōu)選

2.4.1 輔料選擇

輔料種類：考察不同輔料（乳糖、淀粉、糊精）對浸膏粉吸濕性和休止角的影響，結(jié)果糊精對粉末流動性和吸濕性改善程度最優(yōu)，為最佳輔料。詳見表5。

表5 不同輔料對休止角和吸濕性的影響Tab.5 Effects of different excipients on the angle of repose and hygroscopicity

糊精用量：取浸膏粉與糊精，分別按不加糊精，以及4 ∶1，3 ∶1，2 ∶1（m ／ m）的比例混勻，制成顆粒，依據(jù)《表面活性劑粉體和顆粒休止角的測定》GB11986－89 固定漏斗法測定休止角，考察不同輔料比例處方粉末的流動性，休止角分別為 45.25°，34.52°，31.16°，29.21°。最終選擇浸膏粉與糊精比例為 2 ∶1（ m ／ m）。

2.4.2 潤濕劑

取浸膏粉適量，共4 份，分別加入糊精混勻，并噴入水和不同體積分數(shù)乙醇，混勻，用40 目篩網(wǎng)制成濕顆粒，考察軟材過篩情況和顆粒合格率，最終選擇90%乙醇為最佳潤濕劑。詳見表6。

表6 不同潤濕劑對軟材過篩情況和顆粒合格率的影響Tab.6 Effects of different wetting agents on the screening of soft material and the qualification rate of granules

2.4.3 成型顆粒物休止角和吸濕性考察

顆粒休止角測定：按2.3.1 項下優(yōu)選工藝制備5 批試驗品，依據(jù)《表面活性劑 粉體和顆粒休止角的測量》GB11986 － 89 固定漏斗法測定其休止角，結(jié)果5 批試驗品的休止角分別為 28.32°，27.26°，27.53°，26.69°，28.16°，休止角平均值為 27.59°。填充物粉末的休止角均小于40°，流動性較好，適合直接填充膠囊。

顆粒吸濕率測定：將制備好的顆粒干燥至恒重，采用過飽和溶液法測定顆粒吸濕率，結(jié)果6，12，24，48，60 h 時 的 顆 粒 吸 濕 率 分 別 為 2.36% ，3.15% ，4.78% ，6.74% ，9.26% 。吸濕性較好，適合直接填充膠囊。

2.4.4 堆密度測定及空膠囊殼選擇

采用量筒法測定3 批試驗品的堆密度，結(jié)果平均堆密度為 0.566 1 g ／ mL。結(jié)合實際日服用劑量及次數(shù)，每粒裝 0.35 g 內(nèi)容物，得藥粉體積為 0.62 mL，而0 號膠囊容積為 0.67 mL，滿足裝量要求，故選擇0 號膠囊。

3 討論

胃力通膠囊是由太白米、朱砂七、黃芪、延胡索制成的復方制劑。君藥太白米選擇打粉入藥，臣藥朱砂七活性成分主要為二苯乙烯類和蒽醌類［5］，故選擇蒽醌類成分大黃素作為指標性成分進行含量測定。采用HPLC 法測定大黃素含量時，曾考察柱溫、流速、流動相的種類及配比。最終確定2.2.2 項下色譜條件，各目標峰峰形和分離度均好。

由正交試驗的直觀分析和方差分析結(jié)果初步確定了工藝條件，并兼顧生產(chǎn)成本、實際生產(chǎn)操作、能源節(jié)約等綜合因素，最終確定最佳提取工藝。并參考文獻［13 －14］進行驗證試驗，以確保工藝穩(wěn)定、合理、可行。制備工藝優(yōu)選中，曾考察休止角和吸濕性，不斷優(yōu)化輔料種類及配比，最終確定制備工藝為輔料與糊精按 2 ∶1 （ m ／ m ）比例混合，加 90% 乙醇潤濕。

不同提取方法可能造成提取物成分差異，最終影響藥物療效。為保證藥效，并全面反映提取工藝優(yōu)劣，下一步將對其藥效學進行綜合評價及研究。