王春萍, 楊小苗, 李怡斐, 雷開(kāi)榮, 黃啟中, 黃任中, 林清, 吳紅*, 張世才*

重慶加工型辣椒種質(zhì)資源抗疫病鑒定的分子標(biāo)記篩選

王春萍1*, 楊小苗2*, 李怡斐2, 雷開(kāi)榮1, 黃啟中2, 黃任中2, 林清1, 吳紅1**, 張世才2**

(1. 重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所逆境農(nóng)業(yè)研究重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 重慶 401329；2. 重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所, 重慶 401329)

為篩選出適用于重慶加工型辣椒疫病抗性鑒定的分子標(biāo)記，以63份重慶加工型辣椒種質(zhì)資源為材料，研究了12個(gè)辣椒疫病抗性相關(guān)分子標(biāo)記的篩選效率。結(jié)果表明，7個(gè)分子標(biāo)記在種質(zhì)間無(wú)差異條帶，2個(gè)分子標(biāo)記的擴(kuò)增結(jié)果不穩(wěn)定，只有ZL6203、ZL6726和E73等3個(gè)分子標(biāo)記在種質(zhì)間能擴(kuò)增出差異條帶。ZL6203篩選高抗、抗性和中抗材料的效率分別為87.50%、77.78%和63.64%；ZL6726篩選抗性和感病材料的效率分別為100.00%和66.67%；E73篩選抗性和高抗材料的效率分別為77.78%和62.50%。因此，同一辣椒抗疫病分子標(biāo)記對(duì)不同抗性材料篩選效率存在較大差異，ZL6203、ZL6726和E73適用于重慶地區(qū)加工型辣椒抗疫病材料的鑒定。

辣椒；種質(zhì)資源；疫??；分子標(biāo)記

辣椒()是我國(guó)第二大蔬菜作物，但其產(chǎn)值和效益居蔬菜之首[1–2]。疫病是影響辣椒生產(chǎn)的主要病害之一[3]，我國(guó)自1940年首次在江蘇發(fā)生辣椒疫病以來(lái)[4]，西北[5–6]、東北[7]、西南[8–9]、東部沿海[10]等多個(gè)省份辣椒種植區(qū)都有此病發(fā)生。目前普遍的辣椒疫病防治方法是化學(xué)殺菌[11]，然而，辣椒疫霉菌()易產(chǎn)生抗藥性，并且長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑容易對(duì)土壤造成污染，不利于辣椒生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展。培育抗病品種是解決疫病危害的最理想措施，但常規(guī)育種田間篩選工作量大、周期長(zhǎng)，同時(shí)還受到環(huán)境影響。隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，采用抗疫病分子標(biāo)記輔助選育能夠大大提高育種效率[12–14]。

目前已開(kāi)發(fā)出大量與辣椒抗疫病相關(guān)的分子標(biāo)記[15–16]，然而，由于辣椒疫病抗性遺傳機(jī)理復(fù)雜，利用不同抗性材料開(kāi)發(fā)出的抗性相關(guān)分子標(biāo)記在不同種質(zhì)上差異較大，因此，針對(duì)不同的辣椒疫病抗性材料篩選出適宜的分子標(biāo)記，是開(kāi)展分子標(biāo)記輔助抗疫病育種的前提條件。重慶是加工型辣椒的主產(chǎn)區(qū)和集中消費(fèi)區(qū)之一[17]，然而，重慶冬、春兩季雨水較多，夏秋兩季高溫高濕，加上辣椒連年種植，極易引起疫病的大面積發(fā)生，給辣椒穩(wěn)定高產(chǎn)帶來(lái)了巨大隱患[9]。因此，本研究以63份重慶加工型辣椒種質(zhì)資源為主要材料，對(duì)已報(bào)道的12個(gè)辣椒抗疫病相關(guān)分子標(biāo)記進(jìn)行了篩選，以期為加工型辣椒疫病抗性資源鑒定和抗疫病品種選育提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

65份辣椒()種質(zhì)材料由重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所保存，其中PI201234-1和Early Calwonder分別為疫病抗性和感病對(duì)照材料，其余63份種質(zhì)材料為加工型辣椒，H201406-1、H201606-1、H201604-3、H201604-4、H201604-9-1、H201605-1-1、H201605-8-1、H201607-7和H201607-8等9份種質(zhì)材料為利用花藥培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)制的DH系,另外54份材料為經(jīng)多代提純獲得的高代自交系。

參照張世才等[18]的方法, 從重慶石柱、綦江等辣椒主產(chǎn)地患病辣椒植株上分離并保存。

1.2 病原菌接種及抗性鑒定

挑選飽滿一致的辣椒種子播于裝有育苗基質(zhì)的50孔穴盤中，穴盤下放一塑料托盤以便保濕。待幼苗長(zhǎng)至5～6片真葉時(shí)，在距離辣椒幼苗根系約1 cm處基質(zhì)中用手術(shù)刀切一條1 cm長(zhǎng)的縫隙，取含1.0× 104CFU/mL的辣椒疫霉菌(生理小種為race 3)混合孢子懸浮液3 mL注入縫隙中，接種期間適時(shí)澆水，保持土壤濕度接近飽和狀態(tài)，室內(nèi)溫度28℃～30℃，光照12 h/d。10 d后參照NY/T2060.1-2011《辣椒抗疫病鑒定技術(shù)規(guī)程》調(diào)查疫病發(fā)病情況，對(duì)辣椒幼苗疫病進(jìn)行分級(jí)評(píng)價(jià)。

1.3 疫病抗性分子標(biāo)記篩選

參照前人[19–25]報(bào)道的12個(gè)辣椒疫病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記設(shè)計(jì)引物(表1)，其中RGA-STS1200[19]為STS標(biāo)記(共顯性)，WDY[20]和OpD04[22]為SCAR標(biāo)記(顯性), E73[23]為EST-SSR標(biāo)記(共顯性), GZH[21]為AFLP標(biāo)記(顯性)，其余7個(gè)標(biāo)記為SSR標(biāo)記(共顯性)。以辣椒基因組DNA為模版，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)總體系為10L，包含5L 2× EsMaster-Mix (康為世紀(jì))，0.5L DNA模版(100 ng/L)，上下游引物各0.5L (10mol/L), ddH2O補(bǔ)足體積。PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min; 94℃變性30 s、55℃～62℃退火30 s、72℃延伸30 s～2 min，共35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min，具體引物序列和PCR退火溫度見(jiàn)表1。擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物利用3%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果和分析

2.1 發(fā)病情況

室內(nèi)接種疫霉病菌后進(jìn)行發(fā)病情況調(diào)查。結(jié)果表明，65份材料中鑒定出高抗材料8份，包含DH系材料5份和高代自交系3份，其中2份DH系材料(H201604-4和H201607-7)未發(fā)現(xiàn)任何植株感病;抗病材料9份；中抗材料33份和感病材料15份(表2)。對(duì)照材料PI201234被鑒定為抗性，而Early Car- wondery在所有材料中對(duì)疫病菌表現(xiàn)最敏感, 說(shuō)明接種鑒定準(zhǔn)確率較高。

表1 分子標(biāo)記的引物信息

2.2 疫病抗性分子標(biāo)記篩選

12對(duì)引物擴(kuò)增結(jié)果表明(圖1)，ZL6203、ZL6726和E73引物在65份材料中能擴(kuò)增出差異條帶, OpD04、GZH引物的擴(kuò)增結(jié)果不穩(wěn)定，其余7對(duì)引物在65份材料中都能擴(kuò)增出目標(biāo)條帶，但無(wú)差異條帶。

2.3 分子標(biāo)記的篩選效率

結(jié)合疫病抗性鑒定情況，對(duì)ZL6726、ZL6203和E73標(biāo)記的篩選效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，不同標(biāo)記在不同抗性等級(jí)區(qū)段的篩選效率不同，ZL6203對(duì)高抗材料的篩選效率最高，達(dá)87.50%，對(duì)抗性材料的篩選效率為77.78%，對(duì)中抗材料的篩選效率為63.64%, 對(duì)感病材料的篩選效率只有33.33%; ZL6726對(duì)抗性材料的篩選效率可達(dá)100.00%，對(duì)感病材料的篩選效率也較高，達(dá)66.67%，但對(duì)高抗材料的篩選效率只有12.50%；E73篩選抗性材料的效率達(dá)到77.78%，篩選高抗材料的效率達(dá)62.50%。因此, ZL6203適于篩選高抗、抗性和中抗材料, E73適于篩選抗性和高抗材料，ZL6726適于抗性和感病材料的篩選。

2.4 分子標(biāo)記在育種中的初步應(yīng)用

以抗疫病材料PI201234為母本，分別以感病材料1031-1-1和1019-1-1為父本，配制雜交組合，獲得雜交后代。根據(jù)親本分子標(biāo)記擴(kuò)增特點(diǎn)，分別利用篩選出的2對(duì)引物(ZL6726和E73)對(duì)F2代群體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，2對(duì)引物均擴(kuò)增出了特異條帶, 能夠清晰地分辨出F2群體的分離情況(圖2, 3)。

3 結(jié)論和討論

前人已開(kāi)展了一些利用分子標(biāo)記鑒定辣椒抗疫病材料的研究，郭爽等[26]利用WDY和OpD04分子標(biāo)記對(duì)35份辣椒高代自交系進(jìn)行了抗疫病評(píng)價(jià), 其中26份材料的分子標(biāo)記鑒定結(jié)果與田間疫病調(diào)查結(jié)果一致；馬壽賓等[27]利用WDY、OpD04、E73和E318等4個(gè)分子標(biāo)記對(duì)1份野生辣椒和3份甜椒材料進(jìn)行了抗疫病鑒定，結(jié)果只有OpD04的穩(wěn)定性和重復(fù)性較高；張愛(ài)民等[28]用18個(gè)抗疫病相關(guān)的分子標(biāo)記對(duì)1份高抗和2份高感辣椒材料及其雜交F2代的抗性篩選適用性進(jìn)行了研究，結(jié)果只有GZH標(biāo)記適于高抗材料和1份高感材料的抗病性鑒定。這些說(shuō)明辣椒抗疫病分子標(biāo)記的群體特異性，為分子標(biāo)記輔助辣椒抗疫病育種提供了重要參考。本研究選取前人開(kāi)發(fā)的12個(gè)辣椒抗疫病相關(guān)分子標(biāo)記對(duì)63份重慶加工型辣椒種質(zhì)資源的抗疫病進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，ZL6203、ZL6726和E73等3個(gè)標(biāo)記能夠用于加工型辣椒抗疫病鑒定。同時(shí)，本研究還進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)了這3個(gè)標(biāo)記對(duì)不同抗性材料的篩選效率，即進(jìn)一步對(duì)抗疫病分子標(biāo)記的篩選范圍進(jìn)行了細(xì)化，能夠?yàn)槔苯房挂卟∠嚓P(guān)分子標(biāo)記的選用提供更多參考。

表2 疫病抗性鑒定情況

HR: 高抗; R: 抗; MR: 中抗; S: 感病。

HR: High resistant; R: Resistant; MR: Moderate resistant; S: Susceptible.

圖1 ZL6203、ZL6726和E73的擴(kuò)增結(jié)果。M: Marker; 1～27: 27份辣椒。

表3 分子標(biāo)記的篩選效率

A: 接種數(shù)量; B: 鑒定出的數(shù)量; C: 篩選效率。

A: Number of inoculation; B:Number of identification; C: Screening efficiency.

圖2 ZL6726對(duì)PI201234-1×1031-1-1 F2代的PCR擴(kuò)增圖譜。M: Marker; 1: PI201234-1; 2: 1031-1-1; 3～30: 28個(gè)F2代單株。

圖3 E73對(duì)PI201234-1×1019-1-1 F2代的PCR擴(kuò)增圖譜。M: Marker; 1: PI201234-1; 2: 1031-1-1; 3～30: 28個(gè)F2代單株。

辣椒對(duì)疫病的抗性表現(xiàn)十分復(fù)雜，存在垂直抗性和水平抗性，或者兩種抗性共存，其抗病性遺傳方式也呈多樣化，表現(xiàn)為單基因遺傳、寡基因遺傳和多基因遺傳。目前還未見(jiàn)報(bào)道對(duì)疫病免疫的辣椒品種，但越來(lái)越多的抗性資源被發(fā)掘[29]，代表性抗疫病材料主要有PI201234、CM334和Perennial等，PI201234的抗性由1個(gè)顯性主效基因控制[25,30], CM334的抗性至少由2個(gè)非連鎖的隱性基因控制[31],而Perennial的抗性為多基因遺傳[32]。本研究篩選出的2個(gè)分子標(biāo)記(ZL6203和ZL6726)是從PI201234中開(kāi)發(fā)出來(lái)的[25]，E73則是從高抗疫病的甜椒材料N1345中開(kāi)發(fā)出來(lái)的，N1345對(duì)疫病的抗性由2對(duì)加性-顯性-上位性主基因控制[23]。這說(shuō)明重慶加工型辣椒抗疫病遺傳特性與這2類材料相似性較高, 主要由單個(gè)或2個(gè)主效基因控制，其遺傳背景相對(duì)簡(jiǎn)單，理論上有利于抗病新品種的培育。另外, 本研究篩選出的8份高抗材料中有5份為DH系材料，說(shuō)明花藥培養(yǎng)技術(shù)能夠快速穩(wěn)定疫病抗性基因。利用花藥培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合分子標(biāo)記輔助篩選是目前創(chuàng)制辣椒抗疫病材料的最有效途徑之一[13], 隨著越來(lái)越多的辣椒抗疫病分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，辣椒抗疫病育種將會(huì)變得越來(lái)越精準(zhǔn)高效。

[1] SHAO Y J, WU W W, SHEN S X, et al. Genetic study on genic male sterility of pepper and its application in hybrid breeding [J]. J Trop Subtrop Bot, 2013, 21(1): 93–99. doi: 10.3969/j.issn.1005-3395.2013.01.014.

邵元健, 吳雯雯, 沈素香, 等. 辣椒雄性核不育基因的遺傳研究及其在雜交育種中的應(yīng)用[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào), 2013, 21(1): 93– 99. doi: 10.3969/j.issn.1005-3395.2013.01.014.

[2] ZHANG Q Q, LIANG S, WANG Y, et al. Genetic diversity analysis of 57 germplasms ofbased on phenotypic traits and SSR markers [J]. J Trop Subtrop Bot, 2020, 28(4): 356–366. doi: 10. 11926/jtsb.4185.

張強(qiáng)強(qiáng), 梁賽, 王艷, 等. 基于表型性狀和SSR標(biāo)記的57份辣椒種質(zhì)遺傳多樣性分析[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào), 2020, 28(4): 356–366. doi: 10.11926/jtsb.4185.

[3] BARCHENGER D W, LAMOUR K H, BOSLAND P W. Challenges and strategies for breeding resistance into the multifarious pathogen,[J]. Front Plant Sci, 2018, 9: 628. doi: 10.3389/fpls.2018.00628.

[4] FANG Z D, LU J Y, YE Z Y. Chinese Agricultural Encyclopedia, Volume Plant Pathology [M]. Beijing: China Agricultural Publishing House, 1996: 274–275.

方中達(dá), 陸家云, 葉鐘音. 中國(guó)農(nóng)業(yè)百科全書: 植物病理學(xué)卷[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1996: 274–275.

[5] JIA J S. On the chilli pepperblight and it’s control in Xinjiang [J]. Acta Phytopathol Sin, 1992, 22(3): 257–263. doi: 10. 13926/j.cnki.apps.1992.03.021.

賈菊生. 新疆辣椒疫病及防治研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào), 1992, 22(3): 257–263. doi: 10.13926/j.cnki.apps.1992.03.021.

[6] CHANG C T, GONG Z H, WANG M. Studies on the pathogen of pepperblight in Shanxi [J]. Acta Agric Boreali-Occid Sin, 1993, 2(1): 87–90.

常彩濤, 鞏振輝, 王鳴. 陜西辣椒疫病菌種的鑒定[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 1993, 2(1): 87–90.

[7] XIAO S Q, LU X H, LIU T R. Investigation on pepper blight of Heilongjiang Province [J]. Heilongjiang Agric Sci, 2002(5): 45–46. doi: 10.3969/j.issn.1002-2767.2002.05.017.

肖淑芹, 陸秀華, 劉惕若. 黑龍江省辣椒疫病發(fā)生情況調(diào)查[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2002(5): 45–46. doi: 10.3969/j.issn.1002-2767.2002.05.017.

[8] YANG X H, YUAN J, XIE H C. Identification onblight resistance in major cultivars of pepper in Guizhou Province [J]. SW China J Agric Sci, 2005, 18(6): 791–793. doi: 10.3969/j.issn.1001- 4829.2005.06.027.

楊學(xué)輝, 袁潔, 謝海呈. 貴州省辣椒主栽品種抗疫病性鑒定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2005, 18(6): 791–793. doi: 10.3969/j.issn.1001-4829. 2005.06.027.

[9] ZHANG S C, Lü Z H, HUANG R Z, et al. Integrated control against major diseases of processing-purpose hot pepper in Chongqing [J]. J China Capsi, 2012(3): 33–34,36. doi: 10.3969/j.issn.1672-4542.2012.03.010.

張世才, 呂中華, 黃任中, 等. 重慶加工型辣椒主要病害的綜合防治技術(shù)[J]. 辣椒雜志, 2012(3): 33–34,36. doi: 10.3969/j.issn.1672- 4542.2012.03.010.

[10] LI Z J, LONG W P, ZHENG J R, et al. Isolation and identification ofin Guangdong province and measurement of their pathogenicity and physiological race differentiation [J]. J S China Agric Univ, 2007, 28(1): 50–54. doi: 10.3969/j.issn.1001-411X.2007.01.012.

李智軍, 龍衛(wèi)平, 鄭錦榮, 等. 廣東辣椒疫霉菌分離鑒定及其致病力和生理小種分化研究[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 28(1): 50–54. doi: 10.3969/j.issn.1001-411X.2007.01.012.

[11] ZHAI M T, WANG K Y, XU H, et al. Induction and charcteristics ofisolates resistant to fluopicolide [J]. Acta Phyto- pathol Sin, 2014, 44(1): 88–96. doi: 10.13926/j.cnki.apps.2014.01.010.

翟明濤, 王開(kāi)運(yùn), 許輝, 等. 抗氟吡菌胺辣椒疫霉菌株的誘導(dǎo)及其生物學(xué)特性的研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào), 2014, 44(1): 88–96. doi: 10. 13926/j.cnki.apps.2014.01.010.

[12] FU Y B, YANG M H, ZENG F Q, et al. Searching for an accurate marker-based prediction of an individual quantitative trait in molecular plant breeding [J]. Front Plant Sci, 2017, 8: 1182. doi: 10.3389/fpls. 2017.01182.

[13] LI Y F, ZHANG S C, JIANG X Y, et al. Creation of new germplasm withblight resistance for processing type pepper by anther culture [J]. Mol Plant Breed, 2019, 17(12): 4030–4035. doi: 10. 13271/j.mpb.017.004030.

李怡斐, 張世才, 蔣曉英, 等. 利用花藥培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)制加工型辣椒抗疫病新種質(zhì)[J]. 分子植物育種, 2019, 17(12): 4030–4035. doi: 10. 13271/j.mpb.017.004030.

[14] WANG L H, ZHANG B X, ZHANG Z H, et al. Research progress in genetics and breeding of[J]. Acta Hort Sin, 2020, 47(9): 1727–1740. doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0487.

王立浩, 張寶璽, 張正海, 等. 辣椒遺傳育種研究進(jìn)展[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2020, 47(9): 1727–1740. doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0487.

[15] KIM N, KANG W H, LEE J, et al. Development of clustered resistance gene analogs-based markers of resistance toin Chili pepper [J]. BioMed Res Int, 2019, 2019: 1093186. doi: 10.1155/ 2019/1093186.

[16] PARISI M, ALIOTO D, TRIPODI P. Overview of biotic stresses in pepper (spp.): Sources of genetic resistance, molecular breeding and genomics [J]. Int J Mol Sci, 2020, 21(7): 2587. doi: 10. 3390/IJMS21072587.

[17] HUANG R Z, HUANG Q Z, Lü Z H, et al. Present situation and deve- lopment of countermeasures of dry pepper industry in China [J]. China Veget, 2015, 1(2): 9–11. doi: 10.3969/j.issn.1000-6346.2015.02.004.

黃任中, 黃啟中, 呂中華, 等. 我國(guó)干制辣椒產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].中國(guó)蔬菜, 2015, 1(2): 9–11. doi: 10.3969/j.issn.1000-6346.2015.02.004.

[18] ZHANG S C, XIONG Y, HUANG R Z, et al. Isolation and cultivation ofand identification of physiological race in Chongqing [J]. Plant Protec, 2015, 41(3): 183–187. doi: 10.3969/j.issn. 0529-1542.2015.03.036.

張世才, 熊艷, 黃任中, 等. 重慶地區(qū)辣椒疫霉菌的分離培養(yǎng)及生理小種鑒定[J]. 植物保護(hù), 2015, 41(3): 183–187. doi: 10.3969/j.issn. 0529-1542.2015.03.036.

[19] LI Y X, GONG Z H, LI D W, et al. Development and utilization of a co-dominant RGA-STS marker associated with resistance toin pepper [J]. Acta Agric Boreali-Occid Sin, 2011, 20(6): 123–127. doi: 10.3969/j.issn.1004-1389.2011.06.027.

李永新, 鞏振輝, 李大偉, 等. 辣椒疫病抗性相關(guān)的共顯性RGA- STS標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2011, 20(6): 123–127. doi: 10.3969/j.issn.1004-1389.2011.06.027.

[20] WANG D Y, AN K, LI Y, et al. A molecular marker-assisted selection method for anti-epidemic breeding of pepper: CN, 100447254C [P]. 2008-12-31.

王得元, 安康, 李穎, 等. 一種辣椒抗疫病育種的分子標(biāo)記輔助選擇方法: 中國(guó), 100447254C [P]. 2008-12-31.

[21] GONG Z H, LIU K K, LU M H, et al. A method of eliminating breeding materials of pepper sensory disease by molecular markers: CN101487049B [P]. 2011-04-06.

鞏振輝, 劉珂珂, 逯明輝, 等. 一種利用分子標(biāo)記淘汰辣椒感疫病育種材料的方法: 中國(guó)101487049B [P]. 2011-04-06.

[22] QUIRIN E A, OGUNDIWIN E A, PRINCE J P, et al. Development of sequence characterized amplified region (SCAR) primers for the detection of, a major QTL for resistance toLeon. in pepper [J]. Theor Appl Genet, 2005, 110(4): 605–612. doi: 10.1007/s00122-004-1874-7.

[23] ZHANG X F, HAN H L, CHEN B, et al. Genetic and molecular marker analysis of resistance toin sweet pepper [J]. Acta Hort Sin, 2011, 38(7): 1325–1332. doi: 10.16420/j.issn.0513-353x. 2011.07.017.

張曉芬, 韓華麗, 陳斌, 等. 甜椒疫病抗性遺傳及相關(guān)基因分子標(biāo)記研究[J]. 園藝學(xué)報(bào), 2011, 38(7): 1325–1332. doi: 10.16420/j.issn. 0513-353x.2011.07.017.

[24] SUGITA T, YAMAGUCHI K, KINOSHITA T, et al. QTL analysis for resistance toblight (Leon.) using an intraspecific doubled- haploid population of[J]. Breed Sci, 2006, 56(2): 137–145. doi: 10.1270/jsbbs.56.137.

[25] WANG P Y, WANG L R, GUO J J, et al. Molecular mapping of a gene conferring resistance toLeonian race 2 in pepper line PI201234 (L.) [J]. Mol Breed, 2016, 36(6): 66. doi: 10.1007/S11032-016-0464-0.

[26] GUO S, HUANG Z, CHANG S D, et al. Identification of resistance toblight in hot pepper using molecular marker [J]. Chin Agric Sci Bull, 2012, 28(13): 163–166. doi: 10.3969/j.issn.1000-6850. 2012.13.030.

郭爽, 黃貞, 常紹東, 等. 利用分子標(biāo)記鑒定辣椒抗疫病材料[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2012, 28(13): 163–166. doi: 10.3969/j.issn.1000-6850. 2012.13.030.

[27] MA S B, SUN Y, WANG C, et al. Molecular marker assisted selection of pepper materials with resistance toblight [J]. N Hort, 2013(10): 107–110.

馬壽賓, 孫艷, 王琛, 等. 分子標(biāo)記輔助選擇辣椒抗疫病新種質(zhì)研究[J]. 北方園藝, 2013(10): 107–110.

[28] ZHANG A M, PENG G H, LIANG C J, et al. Molecular marker primers screening of identification on local pepper withblight resistance in Guizhou [J]. Guizhou Agric Sci, 2017, 45(11): 10– 14. doi: 10.3969/j.issn.1001-3601.2017.11.004.

張愛(ài)民, 蓬桂華, 梁傳靜, 等. 貴州地方辣椒材料疫病抗性鑒定的分子標(biāo)記引物篩選[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 45(11): 10–14. doi: 10. 3969/j.issn.1001-3601.2017.11.004.

[29] RETES-MANJARREZ J E, RUBIO-ARAGóN W A, MáRQUES- ZEQUERA I, et al. Novel sources of resistance toon pepper (sp.) landraces from Mexico [J]. Plant Pathol J, 2020, 36(6): 600–607. doi: 10.5423/PPJ.OA.07.2020.0131.

[30] BARKSDALE T H, PAPAVIZAS G C, JOHNSTON S A. Resistance to foliar blight and crown rot of pepper caused by[J]. Plant Dis, 1984, 68(6): 506–509. doi: 10.1094/PD-68-506.

[31] THABUIS A, PALLOIX A, PFLIEGER S, et al. Comparative mapping ofresistance loci in pepper germplasm: Evidence for conserved resistance loci across Solanaceae and for a large genetic diversity [J]. Theor Appl Genet, 2003, 106(8): 1473–1485. doi: 10. 1007/s00122-003-1206-3.

[32] LEFEBVRE V, PALLOIX A. Both epistatic and additive effects of QTLs are involved in polygenic induced resistance to disease: A case study, the interaction pepper-Leonian [J]. Theor Appl Genet, 1996, 93(4): 503–511. doi: 10.1007/BF00417941.

Molecular Marker Screening of Processed Pepper () Germplasm Resources against within Chongqing

WANG Chunping1*, YANG Xiaomiao2*,LI Yifei2, LEI Kairong1,HUANG Qizhong2, HUANG Renzhong2, LIN Qing1, WU Hong1**,ZHANG Shicai2**

(1. Chongqing Key Laboratory of Adversity Agriculture, Biotechnology Research Institute, Chongqing Academy of Agricultural Sciences, Chongqing 401329, China; 2. Vegetable and Flower Research Institute, Chongqing Academy of Agricultural Sciences,Chongqing 401329, China)

To screen out molecular markers suitable for identification ofresistant pepper in Chongqing, the screening efficiency of 12 molecular makers forblight resistance was studied in 63 processed pepper () germplasms in Chongqing. The results showed that there were no different amplification bands of 7 markers among the pepper germplasms, and the amplification results of 2 markers were unstable. Only 3 markers, such as ZL6203, ZL6726 and E73, could amplify different bands among pepper germplasms. For ZL6203, the efficiency of screening high resistant, resistant and medium resistant materials was 87.50%, 77.78% and 63.64%, respectively. For ZL6726, the efficiency of screening resistant and susceptible materials was 100.00% and 66.67%, respectively, and for E73, the efficiency of screening resistant and high resistant materials was 77.78% and 62.50%, respectively. Therefore, the screening efficiency of the same molecular marker for different resistance materials was quite different. ZL6203, ZL6726 and E73 markers were suitable for identification ofblight resistant of processed pepper in Chongqing.

;Germplasm resources;; Molecular marker

10.11926/jtsb.4404

2021-02-28

2021-05-13

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(CARS-24-A-04); 重慶市技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用發(fā)展專項(xiàng)項(xiàng)目(cstc2020jscx-msxmX0054; cstc2019jscx-gksbX0123)資助

This work was supported by the Special Fund for National Modern Agricultural Industrial Technology System Construction (Grant No. CARS-24-A-04), and the Project for Technology Innovation and Application Development in Chongqing (Grant No. cstc2020jscx-msxmX0054, cstc2019jscx-gksbX0123).

王春萍(1980～ )，女，副研究員，研究方向?yàn)槔苯纺婢成怼-mail: wcp49930000@sina.com

*共同第一作者

通信作者 Corresponding author. E-mail: wvvhong-1968@163.com, shicaiz@126.com