劉 偉，白 婧，尹可欣，韓喜榮，施麗飛（北京市海淀區(qū)疾病預(yù)防控制中心，北京 100094）

致瀉大腸埃希氏菌（diarrheagenic Escherichia coli, DEC）是一類能引起人體以腹瀉癥狀為主的大腸埃希氏菌，可經(jīng)過污染食物引起人類發(fā)病。常見的DEC主要包括腸道致病性大腸埃希氏菌（EPEC）、腸道侵襲性大腸埃希氏菌（EIEC）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌（ETEC）、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌（STEC）[包括腸道出血性大腸埃希氏菌（EHEC）]和腸道集聚性大腸埃希氏菌（EAEC）[1]，為了解海淀區(qū)DEC 的型別分布特點(diǎn)和耐藥性情況，為食源性疾病的防控和治療提供參考，我們將2015～2019年海淀區(qū)開展食源性疾病監(jiān)測(cè)的2 家哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本進(jìn)行了DEC 的分離培養(yǎng)、生化鑒定、多重實(shí)時(shí)熒光PCR 毒力基因測(cè)定和藥敏檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2015～2019年海淀區(qū)開展食源性疾病監(jiān)測(cè)的2 家哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本，病例定義為由食品或懷疑由食品引起的，以腹瀉為主要癥狀的病例，每日腹瀉≥3 次且糞便性狀異常的就診患者。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 試劑：麥康凱、三糖鐵、營(yíng)養(yǎng)瓊脂購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，GN 細(xì)菌生化鑒定卡購(gòu)自美國(guó)生物梅里埃公司，五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京卓成惠生生物科技股份有限公司；革蘭陰性需氧菌藥敏檢測(cè)板購(gòu)自上海星佰生物技術(shù)有限公司，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 儀器：VITEK 2 compact 全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)由美國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)，7500fast 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀器由美國(guó)AB 公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 DEC 檢測(cè)方法：將糞便直接劃線接種在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng),挑選5 個(gè)以上可疑菌落進(jìn)行生化鑒定，然后用五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)試劑盒對(duì)菌株進(jìn)行特征性基因檢測(cè)。

1.3.2 藥敏試驗(yàn)方法：對(duì)確認(rèn)為DEC 的菌株用微量肉湯稀釋法測(cè)定其藥物敏感性，用商品化藥敏板進(jìn)行檢測(cè)，肉眼對(duì)藥敏板進(jìn)行判讀，得到最低抑菌濃度（minimum inbibitory concentration, MIC）值。對(duì)照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)獲得相應(yīng)敏感(S)、中度敏感(I)和耐藥(R)的結(jié)果。選擇大腸埃希氏菌ATCC 25922 作為藥敏試驗(yàn)質(zhì)控菌株。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本DEC 檢出情況 見表1。1 810 份糞便標(biāo)本檢出DEC 214 株，檢出率為11.8%，各年度檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.858，P=0.028）。檢出DEC 共有四種型別，分別為EAEC 96 株（44.9%），ETEC 89 株（41.6%）EPEC 24 株（11.2%），EIEC 5 株（2.3%）。

表1 2015～2019年各種DEC 分布情況[株（%）]

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見表2。藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示214 株菌除對(duì)亞胺培南無耐藥外，對(duì)其余11 種抗生素均有不同程度的耐藥。

表2 214 株DEC 對(duì)12 種藥物敏感檢測(cè)結(jié)果[株（%）]

2.3 214 株DEC 各年度耐藥率 見表3。結(jié)果顯示頭孢西丁、頭孢他啶和氯霉素呈現(xiàn)較低的耐藥性，而氨芐西林、復(fù)方磺胺、頭孢噻肟和四環(huán)素均呈現(xiàn)較嚴(yán)重的耐藥性。

表3 214 株DEC 各年度耐藥率[n（%）]

2.4 多重耐藥性結(jié)果 214株DEC中，70株（32.7%）全部敏感，有144 株（67.3%）耐藥。在耐藥株中，28 株（19.4%）單耐藥，17 株（11.8%）雙耐藥，3種到9 種抗生素多重耐藥株有99 株（68.8%）。有63 種耐藥譜，單耐藥譜AMP 有15 株（10.4%），然后依次是AMP-CXT-CFZ 耐藥譜11 株（7.6%）、TET-SXT 耐 藥 譜8 株（5.6%），TE，AMP-TETSXT，AMP-AMS-TET-SXT，AMP-TET-GEN-SXT這4 種耐藥譜各5 株菌（3.5%），其它耐藥譜的菌株數(shù)在1～4 株不等。AMP，TET，AMS 等抗生素在三種及三種以上的多重耐藥譜中出現(xiàn)的次數(shù)最多。

3 討論

本研究結(jié)果顯示5年來北京市海淀區(qū)DEC 的總檢出率同北京市懷柔區(qū)[2]2014～2018年檢出率（11.6%）相近，與北京市豐臺(tái)區(qū)[3]2017年（12.43%）、北京市順義區(qū)[4]2013～2015年（8.55%）檢出率相比略有差異。同其他省份地區(qū)相比高于淮安市[5]2014～2015年（7.10%）和沈陽(yáng)地區(qū)[6]2012～2014年（6.65%）的檢出率，低于濟(jì)南市[7]2014～2018年（28.55%）和貴陽(yáng)市[8]2010年（34.65%）的檢出率。海淀區(qū)檢出的DEC 以EAEC 和ETEC 為優(yōu)勢(shì)型別，其次是EPEC，與濟(jì)南市[7]檢出的各型別DEC 排序完全一致，優(yōu)勢(shì)型別方面與淮安市[5]、沈陽(yáng)地區(qū)[6]、貴陽(yáng)市[8]一致，與北京市其它區(qū)[2-4]和上海市寶山區(qū)[9]存在差異。說明不同地區(qū)DEC 檢出率以及優(yōu)勢(shì)型別分布各不相同，出現(xiàn)這種情況的原因可能與各地區(qū)所處的環(huán)境條件、衛(wèi)生狀況、居民衛(wèi)生安全意識(shí)有關(guān)，農(nóng)村和城鄉(xiāng)結(jié)合部地區(qū)的檢出率可能就會(huì)高于城市，同時(shí)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和檢測(cè)手段也可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)差異。另外有資料[10]顯示DEC 可疑暴露食物種類陽(yáng)性檢出率最高的飲料冷凍飲品、肉類制品和水果類制品與DEC 常污染的食物相一致。

藥敏結(jié)果顯示，檢出的DEC 除有2 株中介外，其余212 株均對(duì)亞胺培南（IMP）敏感，與北京市豐臺(tái)區(qū)[3]報(bào)道的全部敏感基本一致，說明IMP 對(duì)治療本地區(qū)DEC 感染非常有效。頭孢他啶、氯霉素和頭孢西丁的藥敏結(jié)果提示在臨床治療時(shí)可以在這幾種抗生素做適當(dāng)?shù)倪x擇。在耐藥性方面，不同菌株的耐藥情況差別很大，種類繁多的耐藥譜為臨床醫(yī)生的治療選擇帶來壓力。在各種多重耐藥譜中AMP-CXT-CFZ 耐藥譜所占的比例最大。所有耐藥株中對(duì)氨芐西林耐藥性最高，其次是四環(huán)素和復(fù)方磺胺，對(duì)3 種及以上抗生素產(chǎn)生多重耐藥的菌株達(dá)68.8%，最嚴(yán)重的耐藥株對(duì)9 種抗生素產(chǎn)生多重耐藥。檢測(cè)數(shù)據(jù)提示海淀區(qū)DEC 耐藥情況不容樂觀,而且多重耐藥譜廣，給臨床合理選擇抗生素以及合理聯(lián)合用藥帶來了挑戰(zhàn)。

本研究通過對(duì)DEC 毒力基因測(cè)定來確定各種DEC 型別的分布以及對(duì)菌株的耐藥性檢測(cè)，為DEC 的流行、溯源和臨床治療參考提供了可靠的數(shù)據(jù)，同時(shí)也提示要加強(qiáng)對(duì)抗生素的合理使用及管理，延緩耐藥株的產(chǎn)生和傳播。