季泓源，張建英，王 巧，張新漸，左愛學*，王洪云*

1云南中醫(yī)藥大學中藥學院暨云南省南藥可持續(xù)利用重點實驗室，昆明 650500；2保山中醫(yī)藥高等?？茖W校，保山 678000

番荔枝科哥納香屬(Goniothalamus)植物約160種，分布于亞洲熱帶、亞熱帶地區(qū)。該屬植物在南亞多個國家民間作為風濕、水腫及墮胎藥使用[1]，在我國南方省區(qū)用作鎮(zhèn)痛、解毒、殺蟲、止痢、抗瘧藥物使用[2]。哥納香屬植物我國產10種，主要分布在廣西，云南，海南，臺灣等省區(qū)[3]。目前國內外學者已從哥納香屬植物中發(fā)現苯乙烯內酯、生物堿、萜類、黃酮、番荔枝內酯等成分，其中番荔枝內酯和苯乙烯內酯為哥納香屬植物的特征成分，具有較強的抗腫瘤活性，被喻為“明日抗癌之星”[4]。

云南哥納香(G.yunnanensis)為番荔枝科哥納香屬植物，是中國特有品種。生長于海拔350 m的地區(qū)，多生長于山地林下，主要分布于中國的云南等地。目前還未見云南哥納香的化學成分及生物活性的研究報道，為了探索云南哥納香中生物活性物質，課題組開展了云南哥納香的化學成分及體外抗腫瘤作用研究，以期為利用我國寶貴的野生植物資源以及抗腫瘤藥物的開發(fā)提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Bruker Avance III 400 MHz、Bruker DRX 500 MHz超導核磁共振儀(德國Bruker公司，四甲基硅烷(TMS)為內標)；半制備液相(北京賽普銳思)，半制備液相所用試劑為色譜純；旋轉蒸發(fā)儀(上海豫康科教儀器設備有限司)；SHZ-D(III)循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市予華儀器有限公司)；FA2004分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；YRT-3(硅油)熔點儀(天津市精拓儀器科技有限公司)。

硅膠(200～300目)和GF254薄層層析硅膠板(青島海洋化工有限公司)；凝膠SephadexLH-20(瑞典Pharmacia公司)；YMC-PackOSD-A半制備色譜柱(250 mm×20 mm，5 μm)為YMC有限責任公司產品；95%乙醇(云南楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司)；顯色劑：10%硫酸乙醇溶液。層析用試劑甲醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚等試劑為工業(yè)純或化學純；乙醇、正丁醇為分析純；水為純化水。

1.2 植物

云南哥納香樣品采自云南省金平縣，經云南中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室楊竹雅副教授鑒定為番荔枝科哥納香屬云南哥納香(G.yunnanensis)的莖葉，原植物標本(NO.20190407)現存于云南中醫(yī)藥大學中藥學院科研實驗室。

1.3 實驗方法

1.3.1 提取與分離

云南哥納香莖葉(12 kg)粉碎后以95%乙醇浸提3次，每次浸泡7天，回收溶劑得浸膏658 g。浸膏加適量的水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收各部分溶劑。取乙酸乙酯部位浸膏(400 g)，硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮梯度洗脫，合并相同組分，得到7個組分Fr.1～Fr.7。

Fr.3(44.2 g)部分經硅膠柱層析，用氯仿∶丙酮(10∶1→1∶1，V/V)梯度洗脫，合并成6個部分Fr.3A～Fr.4F。Fr.3D部分經硅膠柱層析，用環(huán)己烷-氯仿-丙酮混合溶劑梯度洗脫，重結晶得到化合物1(134 mg)和化合物4(10 mg)。Fr.3E經Sephadex-LH20(氯仿∶甲醇=1∶1，V/V)純化，得到化合物12(45 mg)。Fr.3F部分經硅膠柱分離，用環(huán)己烷∶乙酸乙酯(25∶1→15∶1)體系梯度洗脫，合并薄層色譜相同部分，重結晶得到化合物14(20 mg)和化合物10(144.2 mg)。

Fr.4(14.7 g)部分經硅膠柱層析，用環(huán)己烷∶丙酮(30∶1→5∶1，V/V)梯度洗脫，收集洗脫劑，薄層色譜檢查，合并色點相同流分得到9個部分Fr.4A～Fr.4I。將Fr.4C部分經ODS半制備色譜柱層析，以甲醇∶水(40%～100%)梯度洗脫，再經硅膠柱色譜，以石油醚∶丙酮(15∶1→10∶1，V/V)體系梯度洗脫，重結晶得到化合物6(17.7 mg)。Fr.4D經Sephadex-LH20(氯仿∶甲醇=1∶1，V/V)純化，重結晶得到化合物13(26.9 mg)。Fr.4D經ODS半制備色譜(30%～100%甲醇-水)純化得到化合物5(49.1 mg)和化合物2(10 mg)。

Fr.5(32.4 g)部分經硅膠柱層析，用環(huán)己烷∶乙酸乙酯(7∶1→3∶1，V/V)體系梯度洗脫，合并色點相同流分得到3個部分Fr.5A～Fr.5C。Fr.5A經Sephadex-LH20(氯仿∶甲醇=1∶1，V/V)純化，重結晶得到化合物7(5.6 mg)。Fr.5 B部分經硅膠柱分離，用氯仿∶丙酮(5∶1，V/V)進行洗脫，重結晶得到化合物8(12.6 mg)和19(7.2 mg)。Fr.5C經Sephadex-LH20(氯仿∶甲醇=1∶1，V/V)純化，重結晶得到化合物9(7.1 mg)和化合物18(24.2 mg)。

Fr.7(22.6g)部分經硅膠柱層析，用氯仿∶甲醇(15∶1→5∶1，V/V)體系梯度洗脫，合并色點相同流分得到4個流分Fr.7A～Fr.7D。Fr.7A經Sephadex-LH20(氯仿∶甲醇=1∶1，V/V)純化，重結晶得到化合物11(99 mg)。Fr.7B經ODS半制備色譜(60%～100%甲醇-水)純化得到化合物3(43 mg)和化合物15(24.2 mg)。Fr.7C部分經硅膠柱層析，氯仿∶丙酮(5∶1，V/V)洗脫，純化得到化合物16(185.2 mg)和化合物17(15.4 mg)。

1.3.2 抗腫瘤活性測試

選取3種常見的腫瘤細胞株，對其中9個單體化合物進行了抗腫瘤活性測試。取對數生長期的三陰性乳腺癌HCC1806、結直腸癌HCT116、宮頸癌Hela細胞，用磺酰羅丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B，SRB)進行測試。

根據預實驗測定細胞生長速率的結果，調整細胞密度為3×104個/mL，吸取100 μL接種于96孔培養(yǎng)板中，細胞培養(yǎng)過夜后，加入合物，將各化合物以一定濃度梯度(50、25、12.5、6.2、3.125、1.563 μM)生理鹽水稀釋，按每孔10 μL加入96孔板培養(yǎng)板中，每個濃度3個復孔。5%CO2、37 ℃條件下培養(yǎng)細胞72h后，倒去培養(yǎng)液，用預冷的10%TCA在4 ℃固定細胞1h后用自來水洗滌5次，在空氣中自然干燥。然后每孔加入由1%冰醋酸配制的SRB(4mg/mL)溶液60 μL，室溫染色20 min，棄染色液，1%酸酸洗滌5次，空氣中自然干燥。最后每孔加入非緩沖溶液Tris-base堿液(10 mmol/L，pH=10.5)150 μL溶解，在酶標儀上均勻振蕩混勻，以560 nm波長測定吸光度OD值，計算抑制率，公式為抑制率=[1-(對照組OD值-給藥組OD值)/對照組OD值]×100%，根據抑制率，計算出IC50。

2 實驗結果

2.1 結構鑒定

化合物1黃色粉末；EI-MS：m/z265 [M]+，C16H11NO3；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：10.81(1H，br s，NH)，10.30(1H，s，3-OH)，9.10(1H，J= 7.5 Hz，H-5)，7.91(1H，d，J= 7.3 Hz，H-8)，7.60(1H，s，H-2)，7.51～7.58(2H，m，H-6，7)，7.09(1H，s，H-9)，4.01(3H，s，4-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：168.5(C=O)，122.4(C-1)，113.4(C-2)，152.2(C-3)，148.9(C-4)，121.8(C-4a)，125.9(C-4b)，126.0(C-5)，125.3(C-6)，127.3(C-7)，129.0(C-8)，134.9(C-8a)，104.0(C-9)，135.3(C-10)，120.4(C-10a)，59.5(4-OCH3)。以上數據與文獻[5]對照基本一致，故鑒定該化合物為aristolactam AII，結構見圖1。

圖1 云南哥納香中化合物結構Fig.1 Compounds from G.yunnanensis

化合物2黃色粉末；EI-MS：m/z295 [M]+，C17H13NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：10.79(1H，s，NH)，10.12(1H，s，3-OH)，8.61(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，7.83(1H，s，H-9)，7.40(1H，s，H-2)，7.32(1H，t，J= 7.9 Hz，H-6)，7.04(1H，d，J= 5.1 Hz，H-7)，4.03(3H，s，4-OCH3)，3.99(3H，s，8-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：168.4(C=O)，125.8(C-1)，109.9(C-2)，154.2(C-3)，150.6(C-4)，124.0(C-4a)，118.0(C-5a)，121.6(C-5)，123.3(C-6)，112.2(C-7)，153.8(C-8)，127.1(C-8a)，98.7(C-9)，133.9(C-10)，120.2(C-10a)，59.9(4-OCH3)，57.2(8-OCH3)；以上數據與文獻[6]對照基本一致，故鑒定該化合物為enterocarpam II。

化合物3黃色粉末；ESI-MS：m/z282 [M+H]+，C16H11NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：10.67(1H，s，NH)，10.22(1H，s，OH-3)，9.75(1H，s，OH-6)，8.55(1H，d，J= 2.4 Hz，H-5)，7.74(1H，d，J= 8.6 Hz，H-8)，7.59(1H，s，H-2)，7.07(1H，dd，J= 8.5，2.4 Hz，H-7)，6.99(1H，s，H-9)，3.98(3H，s，4-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：168.3(C=O)，122.6(C-1)，119.6(C-2)，155.2(C-3)，151.3(C-4)，111.7(C-4a)，127.3(C-4b)，116.9(C-5)，157.7(C-6)，121.8(C-7)，120.1(C-8)，127.6(C-8a)，104.2(C-9)，132.5(C-10)，113.2(C-10a)，59.5(4-OCH3)。以上數據與文獻[7]對照基本一致，故鑒定該化合物為aristolactam AIIIa。

化合物4黃色粉末；ESI-MS：m/z280 [M+H]+，C17H13NO3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：10.82(1H，s，NH)，9.14(1H，d，J= 8.2，1.7 Hz，H-5)，7.92(1H，dd，J= 7.9，1.9 Hz，H-8)，7.63(1H，s，H-2)，7.62(1H，s，H-9)，7.51～7.58(2H，m，H-6，7)，4.01(3H，s，4-OCH3)，3.87(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：170.4(C=O)，125.9(C-1)，109.6(C-2)，154.4(C-3)，151.9(C-4)，124.2(C-4a)，127.0(C-4b)，127.7(C-5)，126.9(C-6)，128.8(C-7)，129.0(C-8)，133.6(C-8a)，106.3(C-9)，134.8(C-10)，122.5(C-10a)，60.3(4-OCH3)，57.1(3-OCH3)。以上數據與文獻[8]對照基本一致，故鑒定該化合物為aristolactam BII。

化合物5淡黃色粉末；EI-MS：m/z295 [M]+，C17H13NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：10.63(1H，s，NH)，10.62(1H，s，4-OH)，8.88(1H，d，J= 8.5 Hz，H-5)，7.72(1H，s，H-2)，7.48(1H，t，J= 7.8 Hz，H-6)，7.42(1H，s，H-9)，7.16(1H，d，J= 8.0 Hz，H-7)，4.03(3H，s，8-OCH3)，3.98(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：168.4(C=O)，125.1(C-1)，107.4(C-2)，155.1(C-3)，149.6(C-4)，124.1(C-4a)，115.8(C-4b)，120.3(C-5)，124.1(C-6)，114.4(C-7)，155.1(C-8)，127.5(C-8a)，97.7(C-9)，134.7(C-10)，120.3(C-10a)，57.2(3-OCH3)，55.8(8-OCH3)。以上數據與文獻[9]對照基本一致，故鑒定該化合物為griffithinam。

化合物6黃色粉末；EI-MS：m/z295 [M]+，C17H13NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：10.10(1H，s，NH)，8.23(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，7.58(1H，dd，J= 8.2，2.1 Hz，H-7)，7.50(1H，m，H-6)，7.20(1H，s，H-9)，4.50(3H，s，2-OCH3)，4.02(3H，s，5-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：168.6(C=O)，125.6(C-1)，105.6(C-1)，154.3(C-2)，141.1(C-3)，156.1(C-4)，113.5(C-4a)，128.9(C-4b)，126.5(C-5)，125.9(C-7)，128.8(C-8)，125.4(C-8a)，105.3(C-9)，133.4(C-10)，125.1(C-10a)，61.4(2-OCH3)，60.8(5-OCH3)。以上數據與文獻[10]對照基本一致，故鑒定該化合物為胡椒內酰胺B。

化合物7黃色針晶體；EI-MS：m/z291 [M]+，C18H13NO3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：9.20(1H，m，H-11)，8.92(1H，d，J= 5.3 Hz，H-5)，8.60(1H，m，H-8)，7.82(1H，d，J= 5.3 Hz，H-4)，7.78(1H，m，H-9)，7.60(1H，m，H-10)，7.24(1H，s，H-3)，4.13(3H，s，1-OCH3)，4.05(3H，s，2-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：145.1(C-1)，119.8(C-1a)，121.8(C-3b)，152.5(C-2)，106.7(C-3)，135.9(C-3a)，122.3(C-4)，144.6(C-5)，157.2(C-6a)，182.9(C-7)，132.0(C-7a)，128.8(C-8)，128.7(C-9)，134.7(C-10)，129.0(C-11)，124.2(C-11a)，60.8(1-OCH3)，56.3(2-OCH3)。以上數據與文獻對照[11]基本一致，故鑒定該化合物為觀音蓮明堿。

化合物8白色粉末；ESI-MS：m/z282 [M-H]-，C17H17NO3；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.37(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，7.28(1H，d，J= 16.0 Hz，H-7)，7.00(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，6′)，6.70(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，5′)，6.38(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，6.36(1H，d，J= 16.0 Hz，H-8)，3.30(2H，dd，J= 6.5，6.8 Hz，H-8′)，2.63(2H，t，J= 7.2 Hz，H-7′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：130.0(C-1)，129.2(C-2，C-6)，115.8(C-3，C-5)，157.7(C-4)，139.6(C-7)，118.7(C-8)，165.3(C-9)，129.6(C-1′)，129.5(C-2′，6′)，115.1(C-3′，5′)，155.7(C-4′)，34.5(C-7′)，40.7(C-8′)。以上數據與文獻對照[12]基本一致，故鑒定該化合物為N-對香豆酰酪胺。

化合物9黃色粉末；EI-MS：m/z283 [M]+，C16H13NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：8.24(1H，dd，J= 7.6，0.8 Hz，H-8)，8.07(1H，dd，J= 7.6，0.8 Hz，H-5)，7.87(1H，ddd，J= 7.6，7.6，1.2 Hz，H-7)，7.73(1H，ddd，J= 7.6，7.6，1.2 Hz，H-6)，4.01(1H，s，3-OCH3)，3.96(1H，s，N-CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：157.8(C-2)，149.4(C-3)，135.5(C-4)，118.7(C-4a)，126.2(C-5)，133.7(C-6)，134.2(C-7)，125.7(C-8)，132.2(C-8a)，182.5(C-9)，140.5(C-9a)，179.9(C-10)，132.0(C-10a)，59.1(3-OCH3)，34.7(N-CH3)，13.96(CH3-4)。以上數據與文獻[13]對照基本一致，故鑒定該化合物為marcanine B。

化合物10白色塊狀結晶；ESI-MS：m/z257 [M+Na]+，C13H14O4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.20～7.57(5H，m，Ph)，5.02(1H，br s，H-7)，4.87(1H，m，H-1)，2.98(1H，d，J= 19.5 Hz，H-4b)，4.54(1H，m，H-5)，4.24(1H，m，H-8)，2.86(1H，dd，J= 19.5，5.2 Hz，H-4a)，1.86(1H，dd，J= 14.0，3.9 Hz，H-9a)，2.81(1H，m，H-9b)，1.82(1H，d，J= 3.9 Hz，OH-8)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：76.0(C-1)，169.7(C-3)，36.9(C-4)，66.8(C-5)，71.8(C-7)，68.4(C-8)，24.4(C-9)，137.9(C-1′)，127.5(C-2′，6′)，128.2(C-3′，5′)，127.6(C-4′)。以上數據與文[14]對照基本一致，故鑒定該化合物為9-deoxygoniopypyrone。

化合物11白色塊狀結晶；ESI-MS：m/z251 [M+H]+，C13H15O5；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.23～7.46(5H，m，Ph)，4.99(1H，dd，J= 4.8，2.7 Hz，H-7)，4.91(1H，d，J= 4.8 Hz，H-8)，4.90(1H，m，H-4)，4.46(1H，m，H-6)，4.01(1H，m，H-5)，3.99(1H，d，J= 2.7 Hz，OH-6)，2.78(1H，dd，J= 18.5，6.2 Hz，H-3a)，2.70(1H，m，H-3b)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：176.2(C-2)，36.5(C-3)，78.0(C-4)，88.9(C-5)，74.8(C-6)，88.5(C-7)，72.3(C-8)，143.5(C-1′)，127.7(C-2′，6′)，128.2(C-3′，5′)，128.8(C-4′)。以上數據與文獻[14]對照基本一致，故鑒定該化合物為goniofufurone。

化合物12無色塊狀結晶；EI-MS：m/z200 [M]+，C13H12O2；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.15～7.55(5H，m，Ph)，7.06(m，1H，H-4)，6.77(1H，d，J= 15.7 Hz，H-8)，6.42(1H，dd，J= 15.7，6.6 Hz，H-7)，6.92(1H，m，H-1)，6.20(1H，m，H-3)，5.03(1H，m，H-6)，2.36(2H，m，H-5)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：164.21(C-2)，123.3(C-3)，145.9(C-4)，30.27(C-5)，78.2(C-6)，127.0(C-7)，131.4(C-8)，135.7(C-9)，129.1(C-10，14)，127.2(C-11，13)，128.6(C-12)。以上數據與文獻對照[15]基本一致，故鑒定該化合物為goniothalamin。

化合物13黃色粉末；ESI-MS：m/z257 [M+H]+，C15H14O4；1H NMR(400 MHz CDCl3)δ：12.10(1H，s，OH-5)，10.80(1H，s，OH-7)，7.36～7.52(5H，m，Ph)，5.91(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，5.55(1H，d，J= 2.0 Hz，H-6)，5.58(1H，dd，J= 12.6，2.8 Hz，H-2)，3.25(1H，dd，J= 17.1，12.6 Hz，H-3a)，2.78(1H，dd，J= 17.1，3.1 Hz，H-3b)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ：79.9(C-2)，43.5(C-3)，193.8(C-4)，163.1(C-5)，95.2(C-6)，166.9(C-7)，96.5(C-8)，162.5(C-9)，100.1(C-10)，138.7(C-1′)，127.3(C-2′，6′)，129.4(C-3′，5′)，127.5(C-4′)。以上數據與文獻[16]對照基本一致，故鑒定該化合物為pinocembrin。

化合物14白色片狀晶體；EI-MS：m/z414 [M]+，C29H50O；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：5.32(1H，d，J= 5.0 Hz，H-6)，3.50(1H，m，H-3)，0.92(3H，s，H-19)，0.88(3H，d，J= 6.6 Hz，H-21)，0.80(3H，t，J= 7.5 Hz，H-29)，0.76(3H，d，J= 6.8 Hz，H-27)，0.75(3H，d，J= 6.8 Hz，H-26)，0.61(3H，s，H-18)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：37.3(C-1)，31.5(C-2)，71.5(C-3)，42.2(C-4)，140.6(C-5)，121.5(C-6)，32.6(C-7)，32.6(C-8)，50.5(C-9)，36.8(C-10)，21.0(C-11)，39.7(C-12)，42.8(C-13)，56.6(C-14)，24.4(C-15)，28.0(C-16)，56.2(C-17)，12.6(C-18)，19.0(C-19)，36.3(C-20)，18.7(C-21)，33.5(C-22)，26.9(C-23)，44.7(C-24)，29.2(C-25)，18.7(C-26)，19.2(C-27)，23.8(C-28)，11.9(C-29)。以上數據與文獻[17]對照基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

化合物15白色粉末；ESI-MS：m/z575 [M-H]-，C35H60O6；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：5.39(1H，m，H-5)，5.08(1H，d，J= 7.7 Hz，H-1′)，4.61(1H，dd，J= 11.7，2.5 Hz，H-6)，4.42(1H，dd，J= 11.7，5.5 Hz，H-6′)，2.24～2.38(2H，m，H-3′，4′)，4.07(1H，dd，J= 8.0 Hz，H-2′)，3.94～3.98(2H，m，H-3，5′)，2.24～2.38(1H，m，H-4)，1.02(3H，d，J= 6.2 Hz，H-21)，0.96(3H，s，H-19)，0.91(3H，m，H-29)，0.88(6H，d，J= 6.8 Hz，H-26，27)，0.65(3H，s，H-18)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：37.8(C-1)，30.2(C-2)，78.1(C-3)，39.3(C-4)，140.6(C-5)，121.6(C-6)，32.1(C-7，C-8)，50.6(C-9)，36.2(C-10)，21.3(C-11)，19.8(C-12)，41.4(C-13)，56.8(C-14)，24.3(C-15)，28.5(C-16)，56.0(C-17)，12.3(C-18)，19.1(C-19)，36.7(C-20)，19.0(C-21)，34.0(C-22)，26.2(C-23)，46.0(C-24)，29.3(C-25)，19.2(C-26)，20.1(C-27)，23.4(C-28)，12.2(C-29)，102.5(C-1′)，75.2(C-2′)，78.2(C-3′)，71.5(C-4′)，78.3(C-5′)，62.6(C-6′)。以上數據與文獻[18]對照基本一致，故鑒定該化合物為胡蘿卜苷。

化合物16白色針晶；EI-MS：m/z154 [M]+，C4H10O2S2；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：3.26(4H，q，J= 7.2 Hz，H-2，2′)，1.26(6H，t，J= 7.2 Hz，H-1，1′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：8.3(C-1，1′)，46.6(C-2，2′)。以上數據與文獻[19]報道相一致，故將其鑒定為diethyl disulfoxide。

化合物17白色無定形粉末；ESI-MS：m/z597 [M+Na]+，C35H58O6；1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ：5.24(1H，s，H-6)，5.14(2H，m，H-23)，5.06(1H，m，H-22)，4.56(1H，d，J= 8.0 Hz，H-1′)，4.31(1H，m，H-3)，4.27(1H，m，H-6′)，3.97(1H，t，H-4′，5′)，3.93(1H，m，H-3′)，2.74(1H，m，H-2′)，0.94(3H，s，H-19)，0.92(3H，s，H-27)，0.90(3H，s，H-21)，0.86(3H，t，J= 6.5 Hz，H-29)，0.65(3H，s，H-26)；13C NMR(100 MHz，C5D5N)δ：37.9(C-1)，30.6(C-2)，78.5(C-3)，39.7(C-4)，141.3(C-5)，123.3(C-6)，32.5(C-7)，32.4(C-8)，50.0(C-9)，37.3(C-10)，21.6(C-11)，38.4(C-12)，42.7(C-13)，57.3(C-14)，24.9(C-15)，28.9(C-16)，56.5(C-17)，40.8(C-18)，19.8(C-19)，21.1(C-20)，21.8(C-21)，139.1(C-22)，129.9(C-23)，50.7(C-24)，29.6(C-25)，19.5(C-26)，21.3(C-27)，26.0(C-28)，12.5(C-29)，102.9(C-1′)，75.7(C-2′)，78.8(C-3′)，72.2(C-4′)，79.0(C-5′)，63.2(C-6′)。以上數據與文獻[20]報道相一致，故將其鑒定為豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物18黃色針晶；EI-MS：m/z231 [M]+，C12H9NO4；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：11.28(1H，s，OH-7)，10.55(1H，s，NH-10)，8.84(1H，s，NH-10)，7.80(1H，t，J= 8.2 Hz，H-5)，7.56(1H，dd，J= 8.4，0.9 Hz，H-4)，7.25(1H，dd，J= 8.4，0.9 Hz，H-6)，2.55(3H，s，H-12)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：184.7(C-1)，152.8(C-2)，180.7(C-3)，119.7(C-4)，139.0(C-5)，122.1(C-6)，161.7(C-7)，114.0(C-8)，133.7(C-9)，109.1(C-10)，202.3(C-11)，33.0(C-12)。以上數據與文獻[21]報道相一致，故將其鑒定為景洪哥納香胺。

化合物19白色粉末；ESI-MS：m/z455 [M(H](，C30H48O3；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.52(1H，t，J= 2.3 Hz，H-12)，3.46(1H，dd，J= 10.2，5.7 Hz，H-3)，2.68(1H，d，J= 11.3 Hz，H-18)，1.24(3H，s，H-27)，1.22(3H，s，H-25)，1.05(3H，s，H-24)，1.02(3H，s，H-23)，0.99(3H，d，J= 6.3 Hz，H-30)，0.98(3H，d，J= 5.7 Hz，H-29)，0.88(3H，s，H-26)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：38.8(C-1)，27.0(C-2)，79.0(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.4(C-6)，33.1(C-7)，39.6(C-8)，47.7(C-9)，37.8(C-10)，23.4(C-11)，125.6(C-12)，138.3(C-13)，42.2(C-14)，28.1(C-15)，24.3(C-16)，47.9(C-17)，52.9(C-18)，39.0(C-19)，39.0(C-20)，30.8(C-21)，36.9(C-22)，27.0(C-23)，15.6(C-24)，15.5(C-25)，16.2(C-26)，23.0(C-27)，180.7(C-28)，17.0(C-29)，21.2(C-30)。以上數據與文獻[22]報道相一致，故將其鑒定為烏蘇酸。

2.2 抗腫瘤活性

以順鉑為陽性對照，用SRB法對從云南哥納香種分離得到的9個化合物進行體外抗腫瘤活性篩選，結果見表1～3。結果表明化合物7、12、13在50 μM濃度下，對HCC1806、HCT116、Hela腫瘤細胞的增殖具有一定的抑制作用，其中苯乙烯內酯類化合物12的抑制作用表現最明顯，對HCC1806、HCT116、Hela腫瘤細胞株活性IC50分別為5.2±0.7、3.1±0.5和10.5±1.0 μM(見表4)。

表1 9個化合物對HCC1806腫瘤增殖抑制活性Table 1 Inhibitory activity of nine compounds on HCC1806 tumor proliferation

續(xù)表1(Continued Tab.1)

表2 9個化合物對HCT116腫瘤增殖抑制活性Table 2 Inhibitory activity of nine compounds on HCT116 tumor proliferation

表3 9個化合物對Hela腫瘤增殖抑制活性Table 3 Inhibitory activities of nine compounds on Hela tumor proliferation

3 結論

本實驗對云南哥納香乙醇提取物的化學成分及其體外抗腫瘤活性進行了研究，從中分離鑒定了19個化合物，化合物的主要類型包括生物堿類(1～9、18)、苯乙烯內酯(10～12)、黃酮(13)、三萜類(19)，所有化合物均為首次從該植物中分離得到，并采用SRB法對其中9個化合物進行了人腫瘤細胞株HCC1806、HCT116、Hela的細胞毒活性測試。結果表明：化合物7和12對3種人腫瘤細胞株均顯示較為明顯的細胞毒活性，苯乙烯內酯化合物12對3種人腫瘤細胞毒活性優(yōu)于阿樸菲型生物堿類化合物7和黃烷類化合物13。并且首次發(fā)現化合物12對HCC1806和HCT116兩株癌細胞的增殖具有較明顯的抑制作用，IC50分別為5.2±0.7和3.1±0.5 μM。

苯乙烯內酯類化合物是番荔枝科哥納香屬植物的特征成分，在哥納香屬植物中廣泛存在。Goniothalamin是由Hlubucek和Robertson首次從Cryptocaryacaloneura樹皮中分離得到的苯乙烯內酯類化合物，也是哥納香屬植物中分離出的第一個苯乙烯型內酯類化合物[23]。Goniothalamin最早是以一種胚胎毒性化合物被發(fā)現，但后面的研究發(fā)現該化合物具有良好的抗腫瘤活性和細胞毒作用，對胃癌(HGC-27)、乳腺癌(MCF-7、T47D、MDA-MB-231)、白血病(HL-60)、卵巢癌(Caov-3)等多種癌細胞具有顯著的抑制增殖作用[24]，并且，對荷有埃利希氏腫瘤的小鼠給藥goniothalamin后，未觀察到毒性證據，表明goniothalamin具有良好的生物相容性，即在抑制腫瘤生長的同時沒有副作用[25]；Goniothalamin主要通過氧化應激反應和caspases激活介導調節(jié)癌細胞周期和誘導癌細胞凋亡[26]。本文也首次發(fā)現化合物goniothalamin(12)對HCC1806和HCT116癌細胞株的增殖具有較明顯的抑制作用，為抗腫瘤藥物的設計和開發(fā)提供一定的實驗依據。

綜上，本研究首次開展了云南哥納香化學成分和抗腫瘤活性研究，初步闡明了云南哥納香的抗腫瘤活性藥效物質基礎，為云南哥納香在抗腫瘤方面的開發(fā)利用提供了一定的實驗依據。