梁欣蕊，劉志華，孫立秋,2，王丹,2，時(shí)志春,2，李軍,2，王金蘭，趙明,2，張樹(shù)軍

（1.齊齊哈爾大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；

2.齊齊哈爾大學(xué) 黑龍江省工業(yè)大麻及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

漢麻（Cannabis sativa L.）是我國(guó)對(duì)工業(yè)大麻的一種別稱(chēng)，特指精神活性成分四氫大麻酚的含量低于0.3%的大麻，又常被叫做火麻、黃麻等，是一種高大的?？疲∕oraceae）大麻屬一年生雌雄異株植物，具有特殊氣味[1]，其果實(shí)入藥，在潤(rùn)燥、滑腸、通淋、活血等方面有顯著功效[2]。漢麻的花、葉中富含多種大麻素類(lèi)成分，而大麻二酚（CBD）作為其中的主要成分也被證實(shí)在鎮(zhèn)痛、神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)、抗菌抗炎等方面的具有極高的藥理研究?jī)r(jià)值和相當(dāng)廣闊的應(yīng)用前景[3]。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)漢麻的資源利用，將在陰涼處通風(fēng)干燥的漢麻花葉用甲醇浸泡后提取，提取液濃縮后用正己烷萃取，從而得到正己烷萃取物，并從中分離鑒定了7 個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

X-6 型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京Tech Instrument 有限公司）；Bruker AV-600 型核磁共振波譜儀（布魯克(德國(guó))公司制造，以TMS 作為內(nèi)標(biāo)）；半制備高效液相色譜儀（日本日立公司，LC-6AD 泵，Shodex RI SE-61視差折光檢測(cè)器）；Prep-SIL（250 mm×10 mm，5 μm）正相色譜柱；SHIMADZU 高效液相色譜儀（日本島津公司）；SunFireTMPrep C18 OBDTM（100 mm×19 mm，5 μm）不銹鋼色譜柱；柱層析硅膠（200～300 目，青島海洋化工廠）；薄層色譜硅膠板（煙臺(tái)化工廠）。其他試劑均為分析純。

植物漢麻于2018 年7 月10 日采自黑龍江省大興安嶺嶺南農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)金億順農(nóng)場(chǎng)，經(jīng)大興安嶺金億順漢麻種植專(zhuān)業(yè)合作社經(jīng)理劉祥忠鑒定為漢麻，標(biāo)本（CS-20180710）收藏于齊齊哈爾大學(xué)天然產(chǎn)物研究室。

1.2 提取與分離

陰干后粉碎的漢麻花葉5.5 kg，在室溫條件下用28 L 甲醇浸泡提取3 d，共提取3 次，將所得浸提液合并后濃縮，加少量蒸餾水混懸，用正己烷萃取5 次并將萃取液合并，濃縮至恒重后用分析天平進(jìn)行定量，最終得到漢麻花葉正己烷萃取物269.3 g。

取43.3 g 漢麻花葉正己烷萃取物，利用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，依次用正己烷-醋酸乙酯95/5（14 L），9/1（4 L），5/5（7 L），0/1（4 L）洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)合并相同餾分得到9 個(gè)組分（F1～F9）。F4（7.4 g）再次采用硅膠柱色譜，用正己烷-醋酸乙酯95/5（5 L），92/8（1 L），9/1（1 L），8/2（2 L），6/4（4 L），0/1（1.5 L）作為流動(dòng)相依次洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)與CBD 標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照后合并相同的餾分，F(xiàn)4-5 濃縮后得到化合物1（639.5 mg）及其它11 個(gè)組分（F4-1～F4-11）。F4-7（3.2 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用正己烷-醋酸乙酯95/5（3.5 L），9/1（0.5 L）洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)與CBDV 標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照后合并相同的餾分，濃縮得到8 個(gè)組分（F4-7-1～F4-7-8）。F4-7-5（843.3 mg）用正相HPLC（流動(dòng)相：正己烷-醋酸乙酯95/5，流速：4 mL/min）分離后再經(jīng)反相HPLC（流動(dòng)相：水-甲醇-乙腈15/80/5，流速：4 mL/min）純化得化合物2（5.8 mg，tR=39.8 min），化合物6（10.0 mg，tR=6.8 min）和7（5.5 mg，tR=12.5 min）。

F5（2.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用正己烷-醋酸乙酯9/1（2.2 L），8/2（2 L），7/3（2 L），6/4（2 L）洗脫，通過(guò)薄層色譜法檢測(cè)合并相同餾分，濃縮得到7 個(gè)組分（F5-1～F5-7）。F5-4（58.9 mg）經(jīng)正相HPLC（流動(dòng)相：正己烷-醋酸乙酯95/5，流速：4 mL/min）分離得到化合物4（2.5 mg，tR=17.0 min）。F5-5（1.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用正己烷-醋酸乙酯9/1（4 L），8/2（2 L）洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)合并相同組分，濃縮得到5 個(gè)組分（F5-5-1～F5-5-5）。F5-5-4（316.9 mg）用正相HPLC（流動(dòng)相：正己烷-醋酸乙酯9/1，流速：4 mL/min）分離得到化合物3（77.3 mg，tR=6.2 min）和5（27.5 mg，tR=12.5 min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1，淡黃色脂狀。1H-NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 6.28(1H, br s, H-3′), 6.16(1H, br s, H-5′), 5.97(1H, br s, 2′-OH), 5.57(1H, s, H-2), 4.67(1H, s, H-9a), 4.60(1H, br s, 6′-OH), 4.56(1H, s, H-9b), 3.83(1H, br d, J=8.4 Hz, H-1), 2.43(2H, t, J=7.7 Hz, H-1′′), 2.40(1H, m, H-6), 2.22(1H, m, H-4a), 2.11(1H, m, H-4b), 1.81(2H, m, H-5), 1.79(3H, s, H-7), 1.65(3H, s, H-10), 1.56(2H, m, H-2′′), 1.30(2H, m, H-3′′), 1.31(2H, m, H-4′′), 0.88(3H, t, J=6.0 Hz, H-5′′);13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 156.1(C-2′), 153.9(C-6′), 149.4(C-8), 143.0(C-4′), 140.0(C-3), 124.1(C-2), 113.7(C-1′), 110.8(C-9), 109.8(C-5′), 108.0(C-3′), 46.1(C-6), 37.3(C-1), 35.5(C-1′′), 31.5(C-4), 30.6(C-3′′), 30.4(C-2′′), 28.4(C-5), 23.7(C-7), 22.5(C-4′′), 20.6(C-10), 14.0(C-5′′)。經(jīng)鑒定為CBD（數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]對(duì)比，基本一致）。

化合物2，淡黃色脂狀。1H-NMR（600 MHz, CDCl3）δ: 6.30(1H, s, 2′-OH), 6.27(1H, d, J=1.6 Hz, H-5′), 6.14(1H, d, J=1.6 Hz, H-3′), 4.71(1H, br s, H-2), 3.20(1H, br d, J=10.9 Hz, H-1), 2.43(2H, m, H-1′′), 2.16(2H, m, H-4), 1.91(1H, m, H-8), 1.68(3H, s, 3-Me), 1.55(2H, m, H-2′′), 1.41(3H, s, H-9), 1.40(1H, m, H-5), 1.29(4H, m, H-3′′, 4′′), 1.09(3H, s, H-10), 0.89(3H, t, J=6.78 Hz, H-5′′);13C-NMR(150 MHz, CDCl3) δ: 154.8(C-2′), 154.1(C-6′), 142.8(C-4′), 134.5(C-3), 123.7(C-2), 110.1(C-5′), 109.0(C-1′), 107.5(C-3′), 76.8(C-8), 45.8(C-6), 35.5(C-1′′), 33.6(C-1), 31.5(C-3′′), 31.2(C-4), 30.6(C-2′′), 27.6(C-7), 25.0(C-5), 23.4(C-10), 22.5(C-4′′), 19.3(C-9), 14.0(C-5′′)。經(jīng)鑒定為T(mén)HC（數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[5]對(duì)比，基本一致）。

化合物3，淡綠色脂狀。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 11.8(1H, s, -COOH), 6.65(1H, br s, 6′-OH), 6.26(1H, s, H-5′), 5.56(1H, s, H-2), 4.54(1H, s, H-9a), 4.40(1H, s, H-9b), 4.09(1H, m, H-1), 2.92(1H, m, H-1′′), 2.82(1H, m, H-1′′), 2.38(1H, m, H-6), 2.20(1H, m, H-4), 2.10(1H, m, H-4), 1.86(2H, m, H-5), 1.72(3H, s, H-10), 1.57(2H, m, H-2′′), 1.33(4H, m, H-3′′, 4′′), 0.89(3H, t, J=6.9 Hz, H-5′′);13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 175.5(-COOH), 164.2 (C-2′), 161.0(C-6′), 147.5(C-4′), 147.1(C-8), 140.5(C-3), 123.9(C-2), 114.5(C-1′), 112.0(C-5′), 111.3(C-9), 102.4 (C-3′), 46.6(C-6), 36.6(C-1), 35.4(C-1′′), 32.0(C-4), 30.2(C-3′′), 29.7(C-2′′), 27.7(C-5), 23.7(C-7), 22.5 (C-4′′), 18.9(C-10), 14.0(C-5′′)。經(jīng)鑒定為CBDA（數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4,5]對(duì)比，基本一致）。

化合物4，淡綠色脂狀。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 5.37(1H, m, H-2), 5.13(1H, t, J=7.2 Hz, H-10), 2.05-1.97(2H, m, H-9), 1.98(1H, m, H-1b), 1.93(2H, m, H-4), 1.80(1H, m, H-1a), 1.67(3H, s, H-12), 1.65(3H, s, H-15), 1.62(3H, s, H-13), 1.11(3H, s, H-14);13C-NMR(150 MHz, CDCl3) δ: 134.2(C-3), 131.8(C-11), 124.6(C-10), 120.6(C-2), 74.4(C-7), 43.0(C-6), 40.1(C-8), 31.0(C-4), 27.0(C-1), 25.7(C-12), 23.4(C-15), 23.3(C-5), 23.2(C-14), 22.1(C-9), 17.7(C-13)。經(jīng)鑒定為(-)-α-bisabolol（數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致）。

化合物5，淡綠色脂狀。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 5.41(1H, m, H-14), 4.15(2H, d, J=7.2 Hz, H-15), 2.00 (2H, m, H-12), 1.67(3H, br s, H-20), 0.87(3H, s, H-16), 0.86(3H, s, H-17), 0.85(3H, d, J=6.2 Hz, H-18), 0.84(3H, d, J=6.6 Hz, H-19);13C-NMR(150 MHz, CDCl3) δ: 141.0(C-13), 122.4(C-14), 58.7(C-15), 39.2(C-12), 38.7(C-2), 36.7 (C-10), 36.6(C-4), 36.6(C-8), 36.0(C-1), 32.1(C-6), 32.0(C-9), 27.3(C-5), 24.4(C-11), 24.2(C-3), 23.8(C-7), 22.0 (C-16), 21.9(C-17), 19.0(C-18), 19.0(C-19), 15.5(C-20)。經(jīng)鑒定為cassipourol（數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致）。

化合物6，白色針狀結(jié)晶（甲醇），mp. 52～54 ℃。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 6.28(1H, br s, H-3′), 6.16(1H, br s, H-5′), 5.98(1H, br s, 2′-OH), 5.55(1H, s, H-2), 4.61(1H, s, H-9a), 4.56(1H, s, H-9b), 3.85(1H, d, J=9.0 Hz, H-1), 2.43(2H, t, J=7.7 Hz, H-1′′), 2.40(1H, m, H-6), 2.22(1H, m, H-4a), 2.11(1H, m, H-4b), 1.81(2H, m, H-5), 1.79(3H, s, H-7), 1.65(3H, s, H-10), 1.60(2H, m, H-2′′), 0.88(3H, t, J=6.0 Hz, H-3′′);13C-NMR(150 MHz, CDCl3) δ: 156.1(C-2′), 153.8(C-6′), 149.4(C-8), 142.8(C-4′), 140.1(C-3), 124.1(C-2), 113.8(C-1′), 110.8(C-9), 109.9(C-5′), 108.1(C-3′), 46.2(C-6), 37.6(C-1), 37.3(C-1′′), 30.4(C-4), 28.4(C-2′′), 24.0(C-5), 23.7(C-7), 20.5(C-10), 13.8 (C-3′′)。該化合物的NMR 數(shù)據(jù)與CBD 對(duì)照，除在高場(chǎng)缺少2 個(gè)亞甲基外，其余數(shù)據(jù)與CBD 基本一致，因此結(jié)合文獻(xiàn)[8]鑒定該化合物為CBDV。

化合物7，淺黃色脂狀。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 8.16(1H, s, H-2), 7.14(1H, d, J=7.8 Hz, H-5), 7.07(1H, d, J=7.8 Hz, H-4), 6.43(1H, s, H-5′), 6.29(1H, s, H-3′), 5.2(1H, s, 2′-OH), 2.5(2H, t, J=7.2 Hz, H-1″), 2.38(3H, s, H-7), 1.62(2H, m, H-2″), 1.60(6H, s, H-9, 10), 1.32(4H, m, H-3″, 4″), 0.89(3H, t, J=6.6 Hz, H-5″);13C-NMR(150 MHz, CDCl3) δ: 154.7(C-2′), 153.0(C-6′), 144.6(C-4′), 136.9(C-3), 136.9(C-6), 127.6(C-4), 126.4(C-2), 122.6 (C-5), 110.8(C-1′), 109.8(C-3′), 108.7(C-1), 77.5(C-8), 35.6(C-1″), 31.5(C-3″), 30.5(C-2″), 27.1(C-10), 27.1(C-9), 22.6(C-4″), 21.5(C-7), 14.0(C-5″)。經(jīng)鑒定為CBN（數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致）。

3 結(jié)論

作為構(gòu)成大麻素類(lèi)的主要成分的大麻二酚（CBD），四氫大麻酚（THC），大麻二酚酸（CBDA），次大麻二酚（CBDV），大麻酚（CBN）等，具有止咳、止痛、鎮(zhèn)靜、安眠等多種活性，特別是由于CBD、CBN等生物活性高、功能多樣，且不產(chǎn)生成癮性，近年來(lái)備受人們關(guān)注。本文從7 月中旬采集的漢麻中分離鑒定了7 個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)分別為：CBD（1），THC（2），CBDA（3），(-)-α-bisabolol（4），cassipourol（5），CBD（6），CBN（7）。其中，化合物4 和5 為首次從該植物中分離得到。