李君 梁曉

摘 要 目的：研究嶺南鐵角蕨的化學成分并初步探討其鎮(zhèn)咳作用。方法：以硅膠柱色譜對嶺南鐵角蕨75%乙醇提取物進行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜（質(zhì)譜、氫譜、碳譜）數(shù)據(jù)分析鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)。將昆明種小鼠隨機分為陰性對照組、測試組（分離所得7種單體化合物的劑量均為0.12 g/kg）和陽性對照組（同劑量磷酸苯丙哌林），每組10只;采用濃氨水引咳法評價各化合物的鎮(zhèn)咳效果。結(jié)果：從嶺南鐵角蕨75%乙醇提取物的乙酸乙酯部位和石油醚部位中共分離和鑒定出13個化合物，分別為4-羥基-苯乙酮（Ⅰ）、4-羥基-苯乙酸乙酯（Ⅱ）、木犀草素（Ⅲ）、芹菜素（Ⅳ）、槲皮素（Ⅴ）、芒柄花素（Ⅵ）、刺槐黃素（Ⅶ）、原兒茶酸（Ⅷ）、異迷迭香酸苷（Ⅸ）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅹ）、異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅺ）、棕櫚酸甲酯（Ⅻ）和歐前胡素（）。其中木犀草素可顯著延長小鼠的咳嗽潛伏期并減少小鼠的咳嗽次數(shù)（P<0.05）。結(jié)論：13種化合物均為首次從該植物中分離得到;木犀草素具有一定的鎮(zhèn)咳作用，可能是該植物的鎮(zhèn)咳活性成分。

關(guān)鍵詞 嶺南鐵角蕨;化學成分;結(jié)構(gòu)鑒定;鎮(zhèn)咳作用

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study chemical constituents of Asplenium sampsoni， and to investigate its antitussive effects preliminarily. METHODS： The 75% ethanol extract was isolated from A. sampsoni and purified by silica gel column chromatography. The structures of the compounds were identified by physicochemical properties and spectral data （mass spectrum， hydrogen spectrum and carbon spectrum）. Kunming mice were randomly divided into negative control group， test group （the doses of 7 monomers were 0.12 g/kg）， and positive control group （same dose of benproperine phosphate）， with 10 mice in each group. The antitussive effect of each compound was evaluated by the method of inducing cough with concentrated ammonia water. RESULTS： Totally 13 compounds were isolated and identified from ethyl acetate and petroleum ether parts of 75% ethanol extract of A. sampsoni， i.e. 4-hydroxy-acetophenone （Ⅰ）， 4-hydroxy-ethyl phenylacetate （Ⅱ）， luteolin （Ⅲ）， apigenin （Ⅳ）， quercetin （Ⅴ）， formononetin （Ⅵ）， acacetin （Ⅶ）， protocatechuic acid （Ⅷ）， isorosmarinoside （Ⅸ）， quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside （Ⅹ）， isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside （Ⅺ）， methyl palmitate （Ⅻ） and imperatorin （）. Luteolin could significantly prolong the cough latency and reduce the times of cough in mice （P<0.05）. CONCLUSIONS： Thirteen compounds are isolated from this plant for the first time; luteolin has certain antitussive effect， and may be the antitussive active component of the plant.

KEYWORDS? ?Asplenium sampsoni; Chemical constituents; Structure identification; Antitussive effect

嶺南鐵角蕨又名肥蕨，為鐵角蕨科植物嶺南鐵角蕨Asplenium sampsoni Hance的全草，民間用藥歷史悠久，主要分布于我國廣東、廣西、湖南、云南、貴州等地[1]?！吨腥A本草》記載，該藥性涼、味微苦，具有清熱解毒、止咳化痰、涼血止血之功效，可用于咳嗽、痢疾、外傷出血、小兒疳積等癥的治療[1]。但現(xiàn)有文獻尚未見有關(guān)嶺南鐵角蕨化學成分的研究報道。為探索其有效成分及藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用硅膠柱色譜、重結(jié)晶等方法對嶺南鐵角蕨75%乙醇提取物（經(jīng)前期預實驗證實，以75%乙醇作為溶劑所得成分較多）進行分離、純化，并對所得化學單體進行結(jié)構(gòu)鑒定和初步藥理活性評價，以期為該藥材的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Photolysis-TOF MS型高質(zhì)量質(zhì)譜儀（英國Kore公司）、DPX-400型核磁共振儀（瑞典Bruker公司）、X6型熔點測定儀（深圳科聯(lián)電子科技有限公司）、RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器有限公司）、BPG-9030BH型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海和呈儀器制造有限公司）、SHB-Ⅲ型臺式循環(huán)水式多用真空泵（鞏義市奧凱有限責任公司）、HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用嶺南鐵角蕨藥材采自廣東省肇慶市鼎湖區(qū)，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學藥學院劉塔斯教授鑒定為鐵角蕨植物嶺南鐵角蕨A. sampsoni Hance的全株;其標本保存于湘潭醫(yī)衛(wèi)職業(yè)技術(shù)學院中藥標本館。

木犀草素對照品（編號111520，純度>98%）、芹菜素對照品（編號111901，純度>98%）、槲皮素對照品（編號100081，純度>98%）、芒柄花素對照品（編號111703，純度>98%）、刺槐黃素對照品（編號111708，純度>98%）、原兒茶酸對照品（編號159677，純度>98%）、歐前胡素對照品（編號110826，純度>98%）均購自中國食品藥品檢驗研究院;柱色譜用硅膠（100～300目）購自青島海洋化工廠;磷酸苯丙哌林口服溶液（批號181002，規(guī)格80 mL ∶ 80 mg）購自江西杏林白馬藥業(yè)股份有限公司;羧甲基纖維素鈉（批號121015）購自東營市臨廣化工有限公司;所用分析純化學試劑均購自天津市化學試劑三廠;水為蒸餾水。

1.3 實驗動物

本研究所用動物為清潔級別昆明種小鼠，共90只，雌雄各半，體質(zhì)量（180±10） g，由中南大學湘雅二醫(yī)院醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證為SYXK（湘）2017-0002。所有小鼠均飼養(yǎng)于實驗動物房，其室溫控制在（22±4） ℃，濕度控制在（60±10）%。小鼠均自由攝食、飲水，適應性飼養(yǎng)3 d后開始后續(xù)實驗。

2 提取與分離

取嶺南鐵角蕨干燥全草10.0 kg，加入75%乙醇100 L連續(xù)回流提取3次，濾過，合并濾液，濃縮至稠膏且無乙醇味，得提取物浸膏660.4 g。將此浸膏以水10 L分散后，依次以石油醚（60～90 ℃）5 L、乙酸乙酯8 L各萃取3次;回收溶劑后，得到石油醚部位64.5 g、乙酸乙酯部位398.2 g。

取嶺南鐵角蕨乙酸乙酯部位100.0 g，經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-甲醇混合溶液（體積比95 ∶ 5→5 ∶ 95）依次梯度洗脫，收集洗脫液。以薄層色譜法（TLC）檢測后，合并洗脫液，經(jīng)反復重結(jié)晶純化得到11個單體化合物。其中，以體積比95 ∶ 5的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅰ（18 mg），以體積比90 ∶ 10的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅱ（14 mg），以體積比80 ∶ 20的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅲ（75 mg），以體積比75 ∶ 25的氯仿-甲醇混合溶液洗脫到化合物Ⅳ（28 mg）和化合物Ⅴ（19 mg），以體積比55 ∶ 45的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅵ（42 mg）和化合物Ⅶ（22 mg），以體積比40 ∶ 60的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅷ（16 mg），以體積比30 ∶ 70的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅸ（72 mg），以體積比20 ∶ 80的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅹ（25 mg），以體積比5 ∶ 95的氯仿-甲醇混合溶液洗脫得到化合物Ⅺ（33 mg）。

取嶺南鐵角蕨石油醚部位50.0 g，經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-丙酮混合溶液（體積比4 ∶ 1→0.5 ∶ 1）依次梯度洗脫，收集洗脫液。以TLC檢測后，合并洗脫液，經(jīng)反復重結(jié)晶純化得到2個單體化合物。其中，以體積比2 ∶ 1的石油醚-丙酮混合溶液洗脫得到化合物Ⅻ（26 mg），以體積比0.5 ∶ 1的石油醚-丙酮混合溶液洗脫得到化合物（14 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ：無色針晶，易溶于丙酮，熔點107.2～111.3 ℃;氯化鐵（FeCl3）反應為陽性。電子轟擊-質(zhì)譜（EI-MS）：m/z 137.2[M+H]+，分子式為C8H8O2。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：10.31（s，1H，4-OH），7.79（d，J=9.0 Hz，2H，H-2、H-6），6.93（d，J=9.0 Hz，2H，H-3、H-5），2.48（s，3H，H-8）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：199.3（C-7），131.5（C-6），131.3（C-2），128.8（C-1），115.5（C-3），26.2（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[2]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅰ為4-羥基-苯乙酮。

化合物Ⅱ：淡黃色粉末，熔點36.2～38.4 ℃;FeCl3反應為陽性。EI-MS：m/z 181.5[M+H]+，分子式為C10H12O3。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.47（d，J=8.3 Hz，2H，H-2、H-6），6.86（d，J=8.3 Hz，2H，H-3、H-5），3.98（q，J=7.1 Hz，2H，H-1′），3.62（s，2H，H-7），1.14（t，J=7.1 Hz，3H，H-2′）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：162.6（C-8），151.8（C-4），132.1（C-6），131.8（C-2），123.6（C-1），115.8（C-3），115.6（C-5），60.8（C-1′），56.3（C-7），14.1（C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅱ為4-羥基-苯乙酸乙酯。

化合物Ⅲ：淡黃色粉末，熔點326.8～329.7 ℃;鹽酸-鎂粉（HCl-Mg）反應為陽性。EI-MS：m/z 287.5[M+H]+，分子式為C15H10O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.84（s，1H，5-OH），7.42（d，J=2.5 Hz，1H，H-2′），7.41（d，J=2.1 Hz，1H，H-6′），6.95（d，J=8.5 Hz，1H，H-5′），6.61（s，1H，H-3），6.36（s，1H，H-8），6.14（s，1H，H-6）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：173.6（C-4），165.9（C-7），161.1（C-2），156.2（C-5），149.3（C-9），147.2（C-4′），146.6（C-3′），135.9（C-1′），124.4（C-6′），120.1（C-5′），114.6（C-2′），105.5（C-10），104.8（C-3），98.5（C-6），94.7（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為木犀草素。

化合物Ⅳ：黃色粉末，熔點346.7～357.9 ℃;HCl-Mg反應為陽性。EI-MS：m/z 271.4[M+1]+，分子式為C15H10O5。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.96（s，1H，5-OH），10.78（s，1H，7-OH），10.32（s，1H，4′-OH），7.94（d，J=8.5 Hz，2H，H-2′、H-6′），6.88（d，J=8.5 Hz，2H，H-3′、H-5′），6.78（s，1H，H-3），6.50（d，J=2.5 Hz，1H，H-8），6.16（d，J=2.5 Hz，1H，H-6）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：181.3（C-4），164.9（C-7），163.9（C-2），160.3（C-5），158.0（C-9），159.9（C-4′），137.0（C-3），127.7（C-2′、C-6′），126.5（C-1），123.6（C-1′），115.9（C-3′、C-5′），104.1（C-10），98.8（C-6），95.3（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅳ為芹菜素。

化合物Ⅴ：黃色晶體（甲醇），熔點312～314 ℃;? ?FeCl3反應為陽性，HCl-Mg反應為陽性。EI-MS：m/z 303.2[M+H]+，分子式為C15H10O7。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：12.09（s，1H，5-OH），7.86（d，J=2.5 Hz，1H，H-2′），7.59（dd，J=7.0、8.5 Hz，1H，H-6′），6.90（d，J=8.5 Hz，1H，H-5′），6.43（d，J=2.4 Hz，1H，H-8），6.18（d，J=2.4 Hz，1H，H-6）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：176.3（C-4），164.9（C-7），164.0（C-9），156.3（C-5），146.5（C-3′、C-4′），145.5（C-2），137.0（C-3），126.5（C-1），123.6（C-1′），121.2（C-6′），115.9（C-5′），114.7（C-2′），104.1（C-10），98.8（C-6），95.3（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅴ為槲皮素。

化合物Ⅵ：淡黃色粉末，熔點254.5～256.3 ℃;FeCl3反應為陽性。EI-MS：m/z 269.3[M+H]+，分子式為C16H12O4。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.28（s，1H，H-2），7.79（d，J=8.4 Hz，1H，H-5），6.91（dd，J=2.5、3.5 Hz，1H，H-6），6.74（d，J=2.5 Hz，1H，H-8）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：174.9（C-4），162.8（C-7），159.1（C-9），158.3（C-4′），153.1（C-2），130.2（C-6′），130.1（C-10），129.2（C-2′），125.4（C-3），122.8（C-1′），115.9（C-5），114.8（C-6），113.1（C-3′），112.9（C-5′），103.3（C-8），54.7（4′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅵ為芒柄花素。

化合物Ⅶ：黃色結(jié)晶，熔點252.8～254.6 ℃。EI-MS：m/z 285.3[M+H]+，分子式為C16H12O5。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.92（s，1H，5-OH），10.65（s，1H，7-OH），7.89（d，J=8.6 Hz，2H，H-2′、H-6′），7.06（d，J=8.9 Hz，2H，H-3′、H-5′），6.79（s，1H，H-3），6.55（d，J=1.8 Hz，1H，H-8），6.15（d，J=1.8 Hz，1H，H-6），3.81（s，3H，4′-OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：182.2（C-4），163.9（C-2），162.9（C-7），162.5（C-4′），160.9（C-5），157.8（C-9），127.8（C-6′），127.6（C-2′），123.4（C-1′），114.6（C-5′），114.3（C-3′），104.3（C-10），104.1（C-3），99.3（C-6），93.6（C-8），55.5（4′-OCH3），55.5（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅶ為刺槐黃素。

化合物Ⅷ：褐色結(jié)晶性粉末，熔點198.5～201.1 ℃。EI-MS：m/z 155.3[M+H]+，分子式為C7H6O4。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.31（d，J=2.0 Hz，1H，H-2），7.26（d，J=8.4 Hz，1H，H-6），6.75（d，J=8.4 Hz，1H，H-5）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：169.8（-COOH），150.5（C-4），147.9（C-3），124.1（C-6），122.2（C-1），116.7（C-2），115.2（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅷ為原兒茶酸。

化合物Ⅸ：棕黃色粉末，熔點171.2～175.1 ℃。EI-MS：m/z 523.6[M+H]+，分子式為C24H26O13。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.93（s，1H，8′-COOH），9.23（s，1H，4-OH），8.65（s，2H，3′-OH、4′-OH），7.54（d，J=1.6 Hz，1H，H-2），7.42（d，J=15.9 Hz，1H，H-7），7.29（dd，J=8.3、9.5 Hz，1H，H-6），6.91（d，J=8.2 Hz，1H，H-5），6.62（d，J=8.1 Hz，1H，H-5′），6.58（dd，J=8.1、9.3 Hz，1H，H-6′），6.42（d，J=15.9 Hz，1H，H-8），5.05～5.22（m，1H，H-8′），4.89（d，J=7.2 Hz，1H，H-1″）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：173.7（C-9′），168.6（C-9），148.9（C-4），147.8（C-7），146.5（C-3），146.3（C-3′），145.5（C-4′），129.4（C-1′），127.6（C-1），123.2（C-6），122.2（C-6′），117.8（C-2′），116.3（C-5），115.4（C-2），114.6（C-8），106.6（C-5′），102.2（C-1″），79.1（C-5″），77.2（C-3″），75.7（C-2″），74.7（C-8′），71.6（C-4″），60.9（C-6″），37.9（C-7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅸ為異迷迭香酸苷。

化合物Ⅹ：黃色粉末，熔點181.6～185.3 ℃;在紫外燈下顯黃色熒光，濃硫酸-α-萘酚（Molish反應）及HCl-Mg反應均為陽性。EI-MS：m/z 465.2[M+H]+，分子式為C21H20O12。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.66（s，1H，5-OH），7.56（dd，J=8.4、9.5 Hz，1H，H-2′），7.51（d，J=2.4 Hz，1H，H-6′），6.88（d，J=8.8 Hz，1H，H-3′），6.38（d，J=2.0 Hz，1H，H-8），6.18（d，J=2.0 Hz，1H，H-6），5.49（d，J=7.1 Hz，1H，Glc-1）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：177.4（C-4），164.6（C-7），161.4（C-5），156.3（C-2），155.9（C-9），148.9（C-4′），144.5（C-3′），133.1（C-3），121.8（C-6′），120.9（C-1′），116.6（C-5′），115.4（C-2′），104.2（C-10），100.5（Glc-1″），98.8（C-6），93.7（C-8），77.8（Glc-3″），76.8（Glc-5″），74.3（Glc-2″），70.4（Glc-4″），60.6（Glc-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅹ為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物Ⅺ：黃色粉末（甲醇），Molish反應及HCl-Mg反應均為陽性。EI-MS：m/z 479.4[M+H]+，分子式為C22H22O12。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.40（s，1H，5-OH），7.69（s，1H，H-2′），7.60（d，J=7.6 Hz，1H，H-6′），6.93（d，J=7.6 Hz，1H，H-5′），6.47（s，1H，H-8），6.11（s，1H，H-6），5.52（d，J=7.2 Hz，1H，H-1″），3.85（s，3H，3′-OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：178.2（C-4），164.9（C-7），161.8（C-5），156.8（C-2），156.2（C-9），150.3（C-4′），133.6（C-3），147.1（C-3′），122.6（C-1′），121.9（C-6′），115.4（C-5′），113.7（C-2′），103.5（C-10），101.1（C-1″），99.3（C-6），94.4（C-8），78.2（C-5″），76.5（C-3″），74.5（C-2″），70.4（C-4″），61.4（C-6″），56.5（3′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅺ為異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物Ⅻ：白色粉末;EI-MS：m/z 271.2[M+H]+，分子式為C17H34O2。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：3.38（s，3H，H-1），2.25（t，J=4.8 Hz，2H，H-2），1.24～1.62（brs，26H，H-15、H-14、H-13、H-12、H-10、H-8、H-6、H-3），0.86（s，3H，H-16）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：173.6（C-1），51.3（C-1′），33.7（C-2′），31.4（C-14），29.3（C-7），29.2（C-13），29.1（C-6），28.9（C-12），28.8（C-5），28.5（C-4），24.3（C-3），22.3（C-15），13.5（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻[13-14]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅻ為棕櫚酸甲酯。

化合物：無色晶體，熔點98.5～101.2 ℃;異羥肟酸鐵反應為陽性。EI-MS：m/z 271.3[M+H]+，分子式為C16H14O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：7.81（d，J=9.6 Hz，1H，H-4），7.64（d，J=2.0 Hz，1H，H-2′），7.36（s，1H，H-5），6.72（d，J=2.0 Hz，1H，H-3′），6.32（d，J=9.6 Hz，1H，H-3），5.56（t，J=7.2 Hz，1H，H-2″），4.98（d，J=7.2 Hz，1H，H-1″），1.70（s，1H，H-5″），1.66（s，1H，H-4″）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：159.9（C-2），146.9（C-7），145.8（C-2′），139.1（C-3″），138.2（C-4），130.9（C-8），125.6（C-6），119.2（C-2″），113.7（C-3），113.1（C-5），112.4（C-1），106.1（C-3′），69.8（C-1″），25.2（C-4″），17.3（C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故鑒定化合物為歐前胡素。

化合物Ⅰ～結(jié)構(gòu)見圖1。

4 活性評價

有文獻指出，木犀草素、芹菜素、槲皮素、芒柄花素、刺槐黃素、原兒茶酸、歐前胡素等7種成分具有一定的鎮(zhèn)咳作用，而其余6種化合物為該屬植物的共性成分，并未見明顯的鎮(zhèn)咳活性[16-21]?；诖耍狙芯恳孕∈鬄閷ο?，以木犀草素等7種成分為干預物，以臨床常用鎮(zhèn)咳藥磷酸苯丙哌林口服液為陽性對照藥[22]，進行鎮(zhèn)咳試驗。具體操作如下：將昆明種小鼠隨機分為測試組、陰性對照組和陽性對照組，其中測試組小鼠分別選用化合物Ⅲ（木犀草素）、Ⅳ（芹菜素）、Ⅴ（槲皮素）、Ⅵ（芒柄花素）、Ⅶ（刺槐黃素）、Ⅷ（原兒茶酸）、（歐前胡素）進行鎮(zhèn)咳實驗，每組10只。測試組和陽性對照組小鼠均灌胃相應藥液0.12 g/kg（均以0.3%羧甲基纖維素鈉溶液為溶劑，給藥劑量依據(jù)前期預實驗結(jié)果設(shè)置），陰性對照組小鼠灌胃等體積的0.3%羧甲基纖維素鈉溶液，灌胃體積均為0.02 mL/g，每天2次，連續(xù)給藥3 d。末次給藥0.5 h后，將所有小鼠放入噴霧引咳裝置中，噴入濃氨水0.5 mL，以小鼠張大口、腹肌收縮記為咳嗽發(fā)生1次[23]，觀察并記錄2 min內(nèi)小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)。采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)（結(jié)果以x±s表示）進行方差分析。檢驗水準α=0.05。

藥理實驗結(jié)果顯示，與陰性對照組比較，化合物Ⅲ能夠顯著延長小鼠咳嗽潛伏期，顯著減少其因氨水刺激所致咳嗽的次數(shù)（P<0.05）;而其余化合物均無明顯延長小鼠咳嗽潛伏期及減少小鼠咳嗽次數(shù)的作用（P>0.05）。此外，各測試組化合物在延長小鼠咳嗽潛伏期和減少咳嗽次數(shù)方面的作用均顯著弱于陽性對照組（P<0.01），詳見表1。

5 討論

本研究對嶺南鐵角蕨75%乙醇提取物的化學成分進行了分析，共分離得到13個化合物，分別鑒定為4-羥基-苯乙酮（Ⅰ）、4-羥基-苯乙酸乙酯（Ⅱ）、木犀草素（Ⅲ）、芹菜素（Ⅳ）、槲皮素（Ⅴ）、芒柄花素（Ⅵ）、刺槐黃素（Ⅶ）、原兒茶酸（Ⅷ）、異迷迭香酸苷（Ⅸ）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅹ）、異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅺ）、棕櫚酸甲酯（Ⅻ）和歐前胡素（）。上述成分分別屬于芳香族類、黃酮類、木脂素類等，與該屬植物化學成分的基本特征相符[24]。這些化合物均為首次從嶺南鐵角蕨中分離獲得。

藥理實驗中采用濃氨水致小鼠咳嗽法，選擇木犀草素、芹菜素、槲皮素、刺槐黃素、芒柄花素、原兒茶酸、歐前胡素等7個化合物進行鎮(zhèn)咳活性的初步評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，木犀草素能夠延長小鼠咳嗽潛伏期及減少小鼠咳嗽次數(shù)，從而緩解咳喘，可能為嶺南鐵角蕨鎮(zhèn)咳作用的活性成分，這與以往研究相一致[25]。而其余成分均未見明顯的止咳作用，具體原因還有待于進一步研究。

綜上所述，本研究中分離并評價鎮(zhèn)咳活性的這些化合物初步揭示了嶺南鐵角蕨的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其中木犀素具有明確的鎮(zhèn)咳效應。

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（收稿日期：2021-01-28 修回日期：2021-06-27）

（編輯：張元媛）