趙振寰 荊偉麗 劉濤 呂志強(qiáng) 曹志紅 徐文

中圖分類號(hào) R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）22-2767-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.22.14

摘 要 目的：建立測定吡咯替尼血藥濃度的方法，并應(yīng)用于臨床。方法：血漿樣本經(jīng)甲醇沉淀蛋白后，以伊馬替尼為內(nèi)標(biāo)，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測定。以Ultimate AQ-C18為色譜柱，以甲醇（含0.1%甲酸）-水（0.1%甲酸）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.4 mL/min，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量為5 ?L。離子源為電噴霧離子源，以多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行正離子掃描，用于定量分析的離子對分別為m/z 583.4→138.3（吡咯替尼）、494.5→393.4（內(nèi)標(biāo)）。選擇2020年6-11月于青島大學(xué)附屬醫(yī)院接受吡咯替尼治療的乳腺癌患者30例，測定其用藥1周后的吡咯替尼穩(wěn)態(tài)谷濃度。結(jié)果：吡咯替尼檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為5～300 ng/mL（r=0.999 3），定量下限為5 ng/mL;日內(nèi)、日間RSD均不高于9.30%，相對誤差為-6.70%～5.04%;穩(wěn)定性試驗(yàn)的相對誤差為? -1.92%～5.42%;提取方法、基質(zhì)效應(yīng)、殘留效應(yīng)均不影響待測物的定量分析。30例乳腺癌患者體內(nèi)吡咯替尼的穩(wěn)態(tài)谷濃度為32.6～82.8 ng/mL，平均血藥濃度為53.8 ng/mL，存在2.54倍的個(gè)體差異。結(jié)論：所建LC-MS/MS法操作簡便、靈敏度和準(zhǔn)確度較高，可用于乳腺癌患者體內(nèi)吡咯替尼的血藥濃度監(jiān)測。

關(guān)鍵詞 吡咯替尼;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;伊馬替尼;乳腺癌;血藥濃度監(jiān)測

Determination of Pyrrotinib Concentration in Human Plasma by LC-MS/MS and Its Clinical Application

ZHAO Zhenhuan，JING Weili，LIU Tao，LYU Zhiqiang，CAO Zhihong，XU Wen（Dept. of Pharmacy， the Affiliated Hospital of Qingdao University， Shandong Qingdao 266003， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish a method for the determination of pyrrotinib concentration in plasma， and apply it in clinic. METHODS： After precipitated with methanol， the plasma sample was determined by LC-MS/MS using imatinib as internal standard. The determination was performed on Ultimate AQ-C18 column with mobile phase consisted of methanol （containing 0.1% formic acid） and water （containing 0.1% formic acid） （gradient elution） at the flow rate of 0.4 mL/min. The column temperature was 40 ℃， and the sample size was 5 ?L. The ion source was electrospray ionization source， and the positive ion scanning was carried out in multiple reaction mode. The ion pairs for quantitative analysis were m/z 583.4→138.3 （pyrrotinib） and m/z 494.5→393.4 （internal standard）， respectively. Thirty breast cancer patients taking pyrrotinib were collected from the Affiliated Hospital of Qingdao University during Jun.-Nov. 2020 to determine their steady-state trough concentrations of pyrrotinib after a week of treatment. RESULTS： The linear range of pyrrotinib were 5-300 ng/mL （r=0.999 3）. The lower limit of quantification was 5 ng/mL. RSDs of intra-day and inter-day were not higher than 9.30%， and relative errors （REs） ranged -6.70%-5.04%. REs of stability tests were in the range of -1.92%-5.42%. The extraction method， matrix effect and residual effect did not affect the quantitative analysis of the substance to be tested. The steady-state trough concentrations of pyrrotinib were 32.6-82.8 ng/mL，with an average plasma concentration of 53.8 ng/mL; there was about 2.54 fold individual difference. CONCLUSIONS： Established LC-MS/MS method is simple， sensitive and accurate， and can be used for the plasma concentration monitoring of pyrrotinib in breast cancer patient.

KEYWORDS? ?Pyrrotinib; LC-MS/MS; Imatinib; Breast cancer; Plasma concentration monitoring

乳腺癌是威脅女性健康的常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤患者中排第1位，病死率排第2位[1]。有研究指出，15%～30%的乳腺癌患者的表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）表達(dá)呈陽性，其腫瘤侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差[2-3]。HER2靶向治療藥物（如曲妥珠單抗等）的上市應(yīng)用明顯改善了患者的預(yù)后，顯著延長了患者的生存期[4]。但是在這些靶向藥物的使用過程中，有部分患者出現(xiàn)了無法耐受的情況，嚴(yán)重影響了臨床治療的效果[5]。吡咯替尼是我國自主研發(fā)的小分子不可逆酪氨酸激酶抑制劑，適用于HER2陽性患者，包括既往使用其他靶向藥物反應(yīng)性不強(qiáng)的患者[6]。該藥于2018年8月獲批上市，多項(xiàng)臨床研究已證實(shí)，其用于治療既往未接受或接受過曲妥珠單抗的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性HER2陽性乳腺癌患者具有良好的效果[7-8]。由于多數(shù)靶向藥物的血藥濃度個(gè)體差異大，且血藥濃度與療效、不良反應(yīng)的相關(guān)性較強(qiáng)[9-10]，因此可通過血藥濃度監(jiān)測對患者用藥劑量進(jìn)行個(gè)體化調(diào)整，以在保證療效的同時(shí)降低胃腸道等不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，由于吡咯替尼為藥物代謝酶細(xì)胞色素P450 3A（CYP3A）的底物，故影響該酶活性的藥物也可能會(huì)影響吡咯替尼的血藥濃度，因此在聯(lián)合用藥時(shí)可根據(jù)吡咯替尼的血藥濃度對其劑量進(jìn)行調(diào)整[11]。

目前，關(guān)于吡咯替尼血藥濃度檢測的報(bào)道較少，僅有采用放射液相色譜法和超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）法分析吡咯替尼在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程[11-12]。但是放射液相色譜法不適用于臨床血藥濃度監(jiān)測工作的常規(guī)開展，而UPLC-Q-TOF-MS法所用設(shè)備十分昂貴且普及率較低，均難以滿足臨床吡咯替尼血藥濃度監(jiān)測的需求。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法是目前檢測小分子藥物的最佳方法，該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，在大型三級甲等醫(yī)院的普及率較高，也是國外檢測小分子靶向藥物血藥濃度的主要手段[13-14]?；诖?，本研究建立了測定人血漿中吡咯替尼血藥濃度的LC-MS/MS法，同時(shí)采用該方法對接受吡咯替尼治療的乳腺癌患者體內(nèi)的藥物濃度進(jìn)行檢測，旨在為該藥的個(gè)體化應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有API 4000+型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)（美國AB公司），1290Ⅱ型UPHC及配套的G7120型溶劑泵、G7167B型進(jìn)樣器、G7116B型柱溫箱（美國Agilent公司），5418型離心機(jī)（德國Eppendorf公司），DT5-6B型低速臺(tái)式自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京新時(shí)代北利醫(yī)療器械有限公司），BF-2000型氮?dú)獯蹈蓛x（北京八方世紀(jì)科技有限公司），Milli-Q型超純水機(jī)（美國Millipore公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

馬來酸吡咯替尼對照品（批號(hào)20061501，純度>99%，以下簡稱“吡咯替尼對照品”）購自青島英納維生物科技有限公司;甲磺酸伊馬替尼對照品（內(nèi)標(biāo)，批號(hào)S102608，純度≥99%，以下簡稱“內(nèi)標(biāo)對照品”）購自美國Selleck Chemicals公司;健康人空白血漿由青島大學(xué)附屬醫(yī)院輸血科提供;乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）均購自德國Merck公司;甲酸（色譜純）購自美國Tedia公司;其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

2.1.1 色譜條件 以Ultimate AQ-C18（100 mm×2.1 mm，3.0 ?m）為色譜柱，以甲醇（含0.1%甲酸，A）-水（含0.1%甲酸，B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～0.5 min，32%A;0.5～2.0 min，32%A→75%A;2.0～6.0 min，75%A）;流速為0.4 mL/min;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣量為5 ?L。

2.1.2 質(zhì)譜條件 離子源為電噴霧離子源（ESI），以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行正離子掃描;碰撞氣壓力為6.00×104 Pa，氣簾氣壓力為2.00×105 Pa，霧化氣壓力為4.48×105 Pa，輔助氣壓力為4.48×105 Pa;噴霧電壓為 5 500 V;霧化溫度為550 ℃;去簇電壓分別為80 V（吡咯替尼）、92 V（內(nèi)標(biāo)）;碰撞能量分別為39 eV（吡咯替尼）、36 eV（內(nèi)標(biāo)）;用于定量分析的離子對分別為m/z 583.4→138.3（吡咯替尼）、494.5→393.4（內(nèi)標(biāo)）。吡咯替尼和內(nèi)標(biāo)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式及二級全掃描質(zhì)譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取吡咯替尼對照品約10 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混勻，制成質(zhì)量濃度為200 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液和質(zhì)控樣品溶液 取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液適量，用甲醇稀釋，混勻，制成質(zhì)量濃度分別為5、10、20、50、100、200、300 ng/mL的系列工作溶液;分別取上述系列工作溶液各50 ?L，置于試管中，于60 ℃下以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)謩e加入空白血漿50 ?L，混勻，制成質(zhì)量濃度分別為5、10、20、50、100、200、300 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。同法制備吡咯替尼質(zhì)量濃度分別為10、50、200 ng/mL的質(zhì)控樣品溶液。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液 取內(nèi)標(biāo)對照品約10 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混勻，制成質(zhì)量濃度為200 μg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液;取上述內(nèi)標(biāo)貯備液適量，用甲醇稀釋，混勻，制成質(zhì)量濃度為150 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 血漿樣品的預(yù)處理

取血漿樣品50 ?L，置于1.5 mL的離心管中，加入“2.2.3”項(xiàng)下內(nèi)標(biāo)溶液150 ?L，渦旋混勻2 min，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，置于進(jìn)樣瓶中，待測。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察 分別取空白血漿、空白血漿+吡咯替尼（質(zhì)量濃度為10 ng/mL）、患者血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理（空白血漿不加內(nèi)標(biāo)）后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，吡咯替尼和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別約為3.7、3.5 min，空白血漿中的磷脂、氨基酸等小分子內(nèi)源性物質(zhì)對吡咯替尼及內(nèi)標(biāo)的測定無干擾，表明該方法專屬性良好。結(jié)果見圖2。

2.4.2 線性關(guān)系考察 取“2.2.2”項(xiàng)下系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測物的質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)、待測物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行加權(quán)線性回歸（權(quán)重為1/x2），得吡咯替尼的回歸方程為y=6.9×10-3x+1.9×10-2（r=0.999 3），表明吡咯替尼檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為5～300 ng/mL，定量下限為5 ng/mL。

2.4.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下質(zhì)量濃度為5 ng/mL（即定量下限）的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液和10、50、200 ng/mL的質(zhì)控樣品溶液各5 份，于1 d內(nèi)按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，考察日內(nèi)精密度;連續(xù)3 d按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，考察日間精密度。以實(shí)測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，用相對誤差（RE）考察準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，各樣品的日內(nèi)、日間RSD均不高于9.30%，RE為-6.70%～5.04%，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[15]。結(jié)果見表1。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備10、50、200 ng/mL的質(zhì)控樣品溶液，分別于室溫下放置24 h、 -20 ℃冰箱中放置30 d、反復(fù)凍融（-20 ℃～室溫）3次后，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，以實(shí)測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，用RE考察樣品在室溫下放置、低溫下長期儲(chǔ)存和反復(fù)凍融條件下的穩(wěn)定性。另取10、50、200 ng/mL的質(zhì)控樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，于4 ℃自動(dòng)進(jìn)樣器中放置12 h，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，以實(shí)測質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，用RE考察經(jīng)預(yù)處理后樣品在待測過程中的穩(wěn)定性。每質(zhì)量濃度各條件均平行5份操作，結(jié)果見表2。由表2可知，各樣品的RE為-1.92%～5.42%，表明其在上述各種條件下的穩(wěn)定性良好。

2.4.5 提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)考察 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備10、50、200 ng/mL的質(zhì)控樣品溶液，分別按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積A。取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液，用75%甲醇稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為10、50、200 ng/mL的對照工作溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積B。取空白血漿，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，于60 ℃下以氮?dú)饬鞔蹈桑每瞻谆|(zhì)，用上述10、50、200 ng/mL的對照工作溶液復(fù)溶，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積C。提取回收率=A/C×100%，基質(zhì)效應(yīng)=C/B×100%。每質(zhì)量濃度平行5份操作。結(jié)果顯示，吡咯替尼的平均提取回收率為93.52%～95.93%（RSD≤4.42%），平均基質(zhì)效應(yīng)為96.08%～97.53%（RSD≤3.05%）;內(nèi)標(biāo)的平均提取回收率為96.37%（RSD=3.51%），平均基質(zhì)效應(yīng)為97.67%（RSD=2.63%），表明基質(zhì)不干擾樣本和伊馬替尼的測定。結(jié)果見表3。

2.4.6 殘留效應(yīng)考察 取“2.2.2”項(xiàng)下300 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，同法測定空白血漿以考察方法的殘留效應(yīng)。結(jié)果顯示，在吡咯替尼和內(nèi)標(biāo)對應(yīng)的保留時(shí)間處，空白血漿未見明顯的色譜峰，且噪音與5 ng/mL質(zhì)控樣品相應(yīng)色譜峰峰面積的比值小于0.17%，表明殘留效應(yīng)不影響后續(xù)血漿樣品的測定。

2.5 臨床應(yīng)用

2.5.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 本研究的納入標(biāo)準(zhǔn)為：（1）年齡大于18歲，體質(zhì)量不限;（2）經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺癌，原發(fā)病灶或轉(zhuǎn)移病灶經(jīng)熒光原位雜交技術(shù)檢測并確診為HER2 陽性;（3）服用吡咯替尼1周以上且規(guī)律服藥，中途無中斷或更改劑量;（4）均簽署了知情同意書。本研究的排除標(biāo)準(zhǔn)為：（1）連續(xù)服用吡咯替尼短于1周或1周內(nèi)更改劑量者;（2）不耐受不良反應(yīng)而擅自減少藥物劑量或中斷服藥者;（3）1周內(nèi)服用CYP3A或P-糖蛋白強(qiáng)抑制劑或誘導(dǎo)劑者;（4）妊娠期或哺乳期婦女。

2.5.2 資料來源 收集2020年6-11月于青島大學(xué)附屬醫(yī)院接受吡咯替尼治療的30例乳腺癌患者，平均年齡（49.2±5.3）歲。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，批件號(hào)為QYFYWZLL26449。

2.5.3 用藥方法 所有患者均口服馬來酸吡咯替尼片[江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20180013，按C32H31ClN6O3計(jì)80 mg]每天1次，每次400 mg，連續(xù)服用至少1周。

2.5.4 檢測方法與檢測結(jié)果 待患者血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，于下次用藥前采集患者靜脈血3～5 mL，置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，以3 500 r/min離心10 min，分離上層血漿，置于EP管中，于-20 ℃保存。取上述血漿樣本，按“2.3” 項(xiàng)下方法預(yù)處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，并根據(jù)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算患者血漿中吡咯替尼的質(zhì)量濃度。每個(gè)樣本檢測1次。結(jié)果顯示，30例患者的吡咯替尼穩(wěn)態(tài)谷濃度為32.6～82.8 ng/mL，高濃度約為低濃度的2.54倍，提示不同患者體內(nèi)吡咯替尼的血藥濃度差異較大;平均血藥濃度為53.8 ng/mL，所有結(jié)果均在定量分析線性范圍內(nèi)。結(jié)果見圖3。

3 討論

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，吡咯替尼易于形成[M+H]+峰，且該母離子易形成更小的碎片離子，故采用MRM模式進(jìn)行正離子檢測時(shí)的靈敏度較高;隨后對去簇電壓和碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以進(jìn)一步提高檢測的靈敏度，最終得到了“2.1.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件。

因伊馬替尼與吡咯替尼化學(xué)結(jié)構(gòu)相似且色譜保留時(shí)間相近，理化性質(zhì)穩(wěn)定且提取率高，加之方法學(xué)驗(yàn)證的各項(xiàng)指標(biāo)均能滿足生物樣品定量分析的相關(guān)要求[15]，故本研究選擇伊馬替尼為內(nèi)標(biāo)。本課題組前期預(yù)測了所測樣本的質(zhì)量濃度，故在樣本預(yù)處理時(shí)采用甲醇蛋白沉淀法。結(jié)果顯示，吡咯替尼和內(nèi)標(biāo)的提取率高且穩(wěn)定，雖然對樣本有一定程度的稀釋，靈敏度略有下降，但該方法操作簡便、快捷，靈敏度能滿足臨床血藥濃度監(jiān)測的要求。在采用等度洗脫方式分離吡咯替尼和伊馬替尼時(shí)，所得色譜峰較寬且拖尾嚴(yán)重，待測成分易受基質(zhì)效應(yīng)的干擾，因此采用梯度洗脫，結(jié)果所得色譜峰峰形尖銳、不拖尾，基質(zhì)效應(yīng)不干擾測定。本課題組前期還發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相中甲酸的濃度會(huì)顯著影響吡咯替尼和伊馬替尼的峰面積，為了提高檢測的準(zhǔn)確性，本研究在有機(jī)相和水相中均加入了甲酸，隨著流動(dòng)相中甲酸濃度的升高，吡咯替尼和伊馬替尼的響應(yīng)強(qiáng)度均有所增強(qiáng)，當(dāng)甲酸濃度達(dá)到0.1%時(shí)，響應(yīng)強(qiáng)度增加不明顯，故為避免甲酸對色譜柱的損害，本研究選擇流動(dòng)相中甲酸的濃度為0.1%。

目前，色譜法被認(rèn)為是小分子靶向藥物血藥濃度監(jiān)測的理想方法，主要包括液相色譜-紫外（LC-UV）法和LC-MS/MS法，但哪種方法更適合則主要由樣本中代謝產(chǎn)物的性質(zhì)和濃度所決定[16]。有的小分子靶向藥物，如伊馬替尼在患者體內(nèi)的血藥濃度較高，采用LC-UV法基本能滿足臨床需求。但隨著新藥開發(fā)的不斷進(jìn)展，新一代小分子靶向藥物的活性更強(qiáng)、血藥濃度更低，LC-UV法已不能滿足臨床需求，而LC-MS/MS法專屬性較強(qiáng)，可以降低內(nèi)源性物質(zhì)和患者服用的其他藥物的干擾，更適合低血藥濃度藥物的監(jiān)測[17]。考慮到吡咯替尼在患者體內(nèi)的血藥濃度較低，本研究選擇了靈敏度更高的LC-MS/MS法，該方法操作簡便，靈敏度和檢測效率均較高，適用于吡咯替尼的血藥濃度監(jiān)測。本研究結(jié)果顯示，30例患者體內(nèi)吡咯替尼的穩(wěn)態(tài)谷濃度為32.6～82.8 ng/mL，高濃度約為低濃度的2.54倍，個(gè)體差異較大，這可能與吡咯替尼的體內(nèi)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[9，11]。

綜上所述，本研究所建方法操作簡便、靈敏度和準(zhǔn)確度較高，可用于乳腺癌患者體內(nèi)吡咯替尼的血藥濃度監(jiān)測。但由于該藥上市較晚，目前尚無明確的與有效性和安全性相關(guān)的血藥濃度范圍，雖然本研究初步測得部分患者的吡咯替尼穩(wěn)態(tài)谷濃度，但個(gè)體差異較大，因此在后續(xù)研究中將擴(kuò)大樣本量，并收集療效、不良反應(yīng)等數(shù)據(jù)，以獲取該藥的臨床藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)，并確保其療效和安全性。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] SIEGEL R L，MILLER K D，JEMAL A. Cancer statistics，2018[J]. CA Cancer J Clin，2018，68（1）：7-30.

[ 2 ] XU B，HU X，ZHENG H，et al. Outcomes of re-treatment with first line trastuzumab plus a taxane in HER2 positive metastatic breast cancer patients after （neo） adjuvant trastuzumab：a prospective multicenter study[J]. Oncotarget，2016，7（31）：50643-50655.

[ 3 ] HARBECK N. Advances in targeting HER2-positive breast cancer[J]. Curr Opin Obstet Gynecol，2018，30（1）：55-59.

[ 4 ] COBLEIGH M，YARDLEY D A，BRUFSKY A M，et al. Baseline characteristics，treatment patterns，and outcomes in patients with HER2-positive metastatic breast cancer by hormone receptor status from SystHERs[J]. Clin Cancer Res，2020，26（5）：1105-1113.

[ 5 ] NEMETH B T，VARGA Z V，WU W J，et al. Trastuzumab cardiotoxicity：from clinical trials to experimental studies

[J]. Br J Pharmacol，2017，174（21）：3727-3748.

[ 6 ] MA F，OUYANG Q，LI W，et al. Pyrotinib or lapatinib combined with cape-citabine in HER2-positive metastatic breast cancer with prior taxanes，anthracyclines，and/or trastuzumab：a randomized，phase Ⅱ study[J]. J Clin Oncol，2019，37（29）：2610-2619.

[ 7 ] ZHOU C，LI X，WANG Q，et al. Pyrotinib in HER2-mutant advanced lung adenocarcinoma after platinum-based? ? chemotherapy：a multicenter，open-label，single-arm，phase ii study[J]. J Clin Oncol，2020，38（24）：2753-2761.

[ 8 ] 宋國紅，李惠平，邸立軍，等.真實(shí)世界吡咯替尼治療HER2陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效及安全性[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2020，52（2）：254-260.

[ 9 ] HUYNH H H，PRESSIAT C，SAUVAGEON H，et al. Development and validation of a simultaneous quantification method of 14 tyrosine kinase inhibitors in human? plasma using LC-MS/MS[J]. Ther Drug Monit，2017，39（1）：43-54.

[10] 尤國皎，喬逸，文愛東. 4種常用酪氨酸激酶抑制劑的藥動(dòng)學(xué)特征[J].中國藥房，2016，27（13）：1854-1857.

[11] MENG J，LIU X Y，MA S，et al. Metabolism and dispo-? sition of pyrotinib in healthy male volunteers：covalent binding with human plasma protein[J]. Acta Pharmacol Sin，2019，40（7）：980-988.

[12] ZHU Y，LI L，ZHANG G，et al. Metabolic characterization of pyrotinib in humans by ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectro- metry[J]. J Chromatogr B，2016，1033/1034：117-127.

[13] 郭瑋，陳文祥，尚紅，等.液相色譜-質(zhì)譜臨床應(yīng)用建議[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，40（10）：770-779.

[14] 王國才，賀玖明.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在臨床檢測和代謝研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2018，39（22）：2750-2755.

[15] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部[S]. 2020年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：466-472.

[16] KOLLER D，VAITSEKHOVICH V，MBA C，et al. Effective quantification of 11 tyrosine kinase inhibitors and caffeine in human plasma by validated LC-MS/MS method with potent phospholipids clean-up procedure：application to therapeutic drug monitoring[J]. Talanta，2020，208：120450.

[17] MERIENNE C，ROUSSET M，DUCINT D，et al. High throughput routine determination of 17 tyrosine kinase inhibitors by LC-MS/MS[J]. J Pharm Biomed Anal，2018，150：112-120.

（收稿日期：2021-05-24 修回日期：2021-10-25）

（編輯：陳 宏）