張偉 盛迎濤 薛建秀

聽(tīng)力障礙是人類常見(jiàn)的疾病之一。全球約3.5億人有聽(tīng)力障礙，約50%～60%與遺傳因素有關(guān)，新生兒患病率為0.11%～0.2%[1]。遺傳性耳聾分為綜合征型耳聾（syndromic hearing loss,SHL）和非綜合征型耳聾（nonsyndromic hearing loss,NSHL）。聽(tīng)力障礙的發(fā)生與多種基因突變有關(guān)。Sommen等[2]研究指出，人類有約600個(gè)基因位點(diǎn)與遺傳性耳聾的發(fā)生有關(guān)，其中與NSHL相關(guān)的位點(diǎn)達(dá)150余個(gè)。對(duì)新生兒進(jìn)行聽(tīng)力篩查操作簡(jiǎn)便、成本低，世界各國(guó)均已廣泛開(kāi)展。為應(yīng)對(duì)遺傳性耳聾，我國(guó)早已立法規(guī)定全國(guó)范圍內(nèi)對(duì)新生兒進(jìn)行聽(tīng)力篩查。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)新生兒聽(tīng)力篩查對(duì)遲發(fā)性耳聾與藥物性耳聾無(wú)法及早發(fā)現(xiàn)。耳聾基因檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展有效彌補(bǔ)了聽(tīng)力篩查的不足，其有助于遺傳性耳聾的早期診斷、早期干預(yù)。本研究回顧性分析7 457例新生兒聽(tīng)力與耳聾基因篩查結(jié)果，以了解本地區(qū)耳聾基因常見(jiàn)的突變類型，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 回顧2017年7月至2020年8月在杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院出生并行聽(tīng)力篩查與耳聾基因篩查的新生兒共7 457例。其中男3 917例，女3 540例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，新生兒家長(zhǎng)均簽署知情同意書(shū)，自愿行耳聾基因篩查。

1.2 方法

1.2.1 聽(tīng)力篩查 新生兒在出生后48 h內(nèi)常規(guī)行瞬態(tài)誘發(fā)耳聲發(fā)射篩查，篩查時(shí)新生兒處于安靜狀態(tài)，將探頭放入外耳道，儀器自動(dòng)檢測(cè)篩查是否通過(guò)，重復(fù)2～3次。若初次篩查未通過(guò)者予以相應(yīng)記錄，告知家長(zhǎng)在出生后42 d左右再次進(jìn)行復(fù)篩。復(fù)篩前至本院耳鼻喉科門(mén)診常規(guī)清潔外耳道，檢查有無(wú)耳部畸形等情況。復(fù)篩采用判別聽(tīng)性腦干誘發(fā)電位進(jìn)行。將電極放置于前額發(fā)際、第7頸椎后部及乳突或耳垂，儀器檢測(cè)，得出結(jié)果。

1.2.2 耳聾基因篩查 新生兒出生后3 d內(nèi)，采集足跟血2～5滴，運(yùn)用血液核酸提取試劑盒進(jìn)行基因組核酸提取，用PCR技術(shù)檢測(cè)4個(gè)耳聾基因（包括15個(gè)突變位點(diǎn)），包括GJB2基因的35del G、235del C、176_191del 16、299_300del AT；GJB3 基因的 538C＞T；SLC26A4基因的 IVS7-2A＞G、1229C＞T、2168A＞G、IVS15+5G＞A、1174A＞T、1975G＞C、1226G＞A、2027T＞A；mtDNA12SrRNA基因的1494C＞T、1555A＞G。本研究篩查采用博奧生物有限公司晶芯十五項(xiàng)遺傳性耳聾相關(guān)基因檢測(cè)試劑盒。

2 結(jié)果

2.1 聽(tīng)力篩查結(jié)果 7 457例新生兒中，聽(tīng)力初篩通過(guò)7 437例，未通過(guò)初篩20例（0.27%）。未通過(guò)者全部復(fù)篩，復(fù)篩仍有12例未通過(guò)（0.16%）。

2.2 常見(jiàn)耳聾基因篩查結(jié)果 7 457例新生兒中檢出常見(jiàn)耳聾基因陽(yáng)性者323例，攜帶率4.33%。GJB2 235delC和SLC26A4 IVS7-2A＞G為本地區(qū)高發(fā)病率耳聾基因突變位點(diǎn)，見(jiàn)表1。篩查結(jié)果以短信方式告知家長(zhǎng)，通知耳聾基因位點(diǎn)突變者家長(zhǎng)前往?？崎T(mén)診進(jìn)行遺傳學(xué)咨詢，但其中失訪36例。

表1 新生兒耳聾基因篩查各基因突變類型、位點(diǎn)及攜帶率

2.3 聽(tīng)力與耳聾基因聯(lián)合篩查結(jié)果 7 457例新生兒聽(tīng)力與耳聾基因聯(lián)合篩查，聽(tīng)力復(fù)篩未通過(guò)者12例，其中4例未檢測(cè)到突變基因，4例GJB2基因235del C位點(diǎn)雜合突變，2例GJB3基因538C＞T位點(diǎn)雜合突變，1例SLC26A4基因 IVS7-2A＞G位點(diǎn)雜合突變，1例SLC26A4基因 1174A＞T位點(diǎn)雜合突變，均指導(dǎo)其后續(xù)治療。雙雜合突變者5例，其中235del CIVS7-2A＞G雙雜合3例、235del C2168A＞G雙雜合1例、IVS7-2A＞G1555A＞G雙雜合1例，均通過(guò)聽(tīng)力篩查，建議定期隨訪。12例有聽(tīng)力障礙家族史，新生兒聽(tīng)力篩查均通過(guò)。

3 討論

聽(tīng)力障礙是人類最常見(jiàn)的感覺(jué)障礙。永久性感音神經(jīng)性耳聾的患病率在新生兒中高達(dá)1.86%，青少年中達(dá)3.5%[3]。與以往的聽(tīng)力篩查相比，耳聾基因篩查在分子病原學(xué)層面可以早期識(shí)別NSHL，彌補(bǔ)對(duì)遲發(fā)性耳聾及藥物性耳聾的漏檢，從而達(dá)到預(yù)防和及早干預(yù)的目的。近來(lái)研究分析我國(guó)西北地區(qū)重度和極重度聽(tīng)力障礙患者，發(fā)現(xiàn)致病基因GJB2、GJB3、SLC26A4和mtDNA12S rRNA突變頻率分別為27.13%、2.01%、20.85%和2.26%[4]。本研究7 457例新生兒中，耳聾基因攜帶率為4.33%?；蛲蛔兾稽c(diǎn)檢出率自高到低依次為235del C雜合突變、IVS7-2A＞G雜合突變、1555A＞G均質(zhì)突變、299_300del AT雜合突變和538C＞T雜合突變。

研究表明，GJB2是我國(guó)最常見(jiàn)的NSHL的致病基因[5]。在歐洲、美洲、非洲的大量NSHL患者中也存在GJB2突變[6]。GJB2 235del C雜合突變也是伊朗最常見(jiàn)突變，但因某些民族內(nèi)部傳統(tǒng)如群體內(nèi)婚姻，結(jié)果導(dǎo)致某些位點(diǎn)的高度同質(zhì)性和群體內(nèi)的突變，例如，312del14在伊朗亞茲德省的突變攜帶率達(dá)56%[7]。南西伯利亞聽(tīng)力障礙患者中，GJB2突變的516g＞C、-23+1G＞A，235del基因占主導(dǎo)地位[8]。本研究數(shù)據(jù)顯示，GJB2突變攜帶率達(dá)2.37%。235del C雜合突變、299_300del AT雜合突變和176_191del 16雜合突變的攜帶率分別為1.90%、0.24%和0.23%。235del C雜合突變是本地區(qū)最常見(jiàn)的雜合突變類型，同時(shí)也是最常見(jiàn)的復(fù)合突變基因位點(diǎn)，與以往研究相符[9]。本研究數(shù)據(jù)未檢測(cè)到35del G突變。有研究報(bào)道，GJB2突變患者的聽(tīng)力損失程度比SLC26A4或12S rRNA突變患者的聽(tīng)力損失程度更嚴(yán)重[10]。

本研究篩查檢測(cè)到GJB3 538C＞T雜合突變新生兒18例，突變攜帶率0.24%。與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[11]。且本研究篩查顯示SLC26A4基因突變?yōu)?8例，占1.31%。SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變攜帶率達(dá)1.05%，僅次于235del C突變。大前庭水管綜合征（large vestibular aqueduct syndrome，LVAS）被認(rèn)為與SLC26A4基因突變有關(guān)，突變是高度異質(zhì)性的，并且在種族群體中存在差異。捷克人群SLC26A4基因突變中，最常見(jiàn)位點(diǎn)為412G＞T，南美及北美人群中最常見(jiàn)的分別為1826T＞G和1001+1G＞A突變[12]，韓國(guó)人群為2168A＞G位點(diǎn)突變[13]。本研究中，有1例IVS7-2A＞G位點(diǎn)雜合突變新生兒，其聽(tīng)力篩查通過(guò)，且父母聽(tīng)力無(wú)異常，而該新生兒姐姐已確診LVAS，為SLC26A4 2168A＞G雜合突變，由此推斷，SLC26A4基因突變，再次懷孕后新生兒突變位點(diǎn)可有所不同。醫(yī)生已建議其父母行耳聾基因檢測(cè)，并告知家長(zhǎng)新生兒盡量避免頭部受到撞擊、外傷，予以動(dòng)態(tài)觀察，若發(fā)現(xiàn)有聽(tīng)力下降情況，立即治療。

mtDNA12S rRNA基因?yàn)槟赶颠z傳，攜帶者對(duì)于氨基糖苷類藥物極其敏感。研究表明，1555A＞G突變攜帶率以亞洲人為主，而我國(guó)攜帶人群占亞洲的85.3%[14]，應(yīng)引起足夠重視。本研究篩查發(fā)現(xiàn)有25例新生兒mtDNA12S rRNA基因突變，其中1555A＞G均質(zhì)突變20例，攜帶率0.27%，1494C＞T均質(zhì)突變5例，攜帶率0.07%。告知其父母，新生兒禁用氨基糖苷類藥物治療，并提供用藥提示卡附于病歷本，方便就診時(shí)出示，避免造成耳聾。本研究發(fā)現(xiàn)有4例1555A＞G位點(diǎn)均質(zhì)突變的新生兒，其舅舅均有藥物致聾病史。1例1555A＞G位點(diǎn)均質(zhì)突變新生兒的2位表哥，分別為GJB2基因 235del C位點(diǎn)雜合突變，12S rRNA基因1555A＞G位點(diǎn)均質(zhì)突變，聽(tīng)力篩查均通過(guò)。

聽(tīng)力障礙的病因非常復(fù)雜，目前發(fā)現(xiàn)與耳聾相關(guān)的基因也越來(lái)越多，因此找出其致病機(jī)制是一項(xiàng)長(zhǎng)期而艱巨的任務(wù)。我國(guó)是人口大國(guó)，先天性耳聾患兒的發(fā)現(xiàn)及診斷問(wèn)題亟需解決。該病會(huì)加重家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患兒生活質(zhì)量，在大多數(shù)情況下，通過(guò)早期診斷、及時(shí)干預(yù)和康復(fù)治療，可以有效避免耳聾引起的語(yǔ)言發(fā)育遲緩及行為障礙。Safka等[15]研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高通量測(cè)序檢查，21%捷克患者中存在STRC、MYO15A、LOXHD1、TMPRSS3 和 CDH23基因突變，其中6%的患者STRC基因突變，證實(shí)可能因區(qū)域不同，存在其他常見(jiàn)基因突變。本研究檢測(cè)4個(gè)耳聾基因15個(gè)突變位點(diǎn)，相比以往國(guó)內(nèi)其他地區(qū)檢測(cè)位點(diǎn)已較多，但仍有4例聽(tīng)力復(fù)篩未通過(guò)者沒(méi)檢測(cè)到突變基因，可能存在其他較少見(jiàn)基因位點(diǎn)突變，已建議其進(jìn)一步檢測(cè)。

綜上所述，新生兒行聽(tīng)力及耳聾基因聯(lián)合篩查，可檢測(cè)出耳聾基因位點(diǎn)，進(jìn)行聽(tīng)力學(xué)評(píng)估，及早發(fā)現(xiàn)潛在風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)性進(jìn)行遺傳學(xué)咨詢，并為新生兒提供有價(jià)值的具體預(yù)后信息。本研究可為杭州市蕭山區(qū)耳聾基因突變頻率提供參考。