梁曉娟

(山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，山西 太原 030024)

黃酮類物質(zhì)是一種天然的植物次生代謝產(chǎn)物，廣泛存在于各種植物的果實(shí)、葉片、花等器官中。其具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較強(qiáng)的抗氧化性，是很多營(yíng)養(yǎng)保健品和化妝品的主要功效成分。棗味甜可口、營(yíng)養(yǎng)豐富，含有多種功能營(yíng)養(yǎng)成分，且具有藥用保健功效。黃酮類物質(zhì)作為紅棗重要的活性成分之一，近年來(lái)被很多學(xué)者分析研究，但多集中在干棗黃酮成分測(cè)定，不同品種、不同器官中黃酮含量比較及棗黃酮的分離純化等方面。筆者以山西呂梁地區(qū)主栽品種木棗為材料，建立了一種棗果中總黃酮含量的測(cè)定方法，探索了木棗不同發(fā)育時(shí)期棗果總黃酮的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，旨在為今后棗產(chǎn)品的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)材料采自山西省農(nóng)科院果樹研究所國(guó)家棗種質(zhì)資源圃，分別在木棗果實(shí)膨大期、白熟期、半紅期和全紅期采樣。采回后立即切片置于60 ℃烘箱中烘干，再用粉碎機(jī)粉碎后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)試劑為蘆丁、無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、亞硝酸鋁、氫氧化鈉等，均為分析純。

1.2 試驗(yàn)儀器

試驗(yàn)儀器有電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅9076MBE)，植物樣品粉碎機(jī)(上海標(biāo)本XJA-100A)，電子分析天平(奧豪斯PR2247ZH/E)，超純水儀(北京普析GWA-UN3-F40)，超聲波清洗器(鄭州博大KQ-500DB)，紫外雙光可見分光光度計(jì)(上海元析UV-8000S)，高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf 5810R)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

參考聶靜苑等的研究方法加以改進(jìn)，準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，加95%的乙醇溶液，超聲溶解10 min(功率90 W，水溫28 ℃)，冷卻后定容至50 mL容量瓶中，即得濃度為0.2 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL于6個(gè)25 mL的比色管中。各加入95%的酒精溶液至10 mL，加5%的NaNO2溶液1 mL搖勻，靜置6 min；加10%的AlNO2溶液1 mL搖勻，繼續(xù)靜置6 min；再加4%的NaOH溶液10 mL；最后加95%的乙醇溶液至刻度線，搖勻，絡(luò)合反應(yīng)15 min.用紫外分光光度計(jì)測(cè)500 nm處吸光度，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)總黃酮測(cè)定方法進(jìn)行驗(yàn)證。

1.3.3 總黃酮含量測(cè)定

1) 總黃酮提取液制備。分別稱取各待測(cè)樣品粉末1 g于15 mL離心管中，用70%的酒精溶液定容至10 mL，超聲提取30 min(功率40 W，水溫70 ℃)，5 000 rpm離心10 min.收集上清液作為總黃酮提取液，試驗(yàn)重復(fù)3次。

2) 總黃酮含量測(cè)定。取不同樣品的提取液各1 mL分別置于25 mL比色瓶中，按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行測(cè)定操作，測(cè)定中使用的乙醇濃度為70%.絡(luò)合反應(yīng)結(jié)束后，測(cè)500 nm處吸光度，計(jì)算黃酮含量，以mg/g的蘆丁為單位。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度(A)為縱坐標(biāo)(y)，蘆丁溶液濃度為橫坐標(biāo)(x)，繪制出蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1.

由圖1可知，回歸方程為y=0.011 3x+0.005 8，相關(guān)系數(shù)R2=0.009 2.表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為8 μg/mL～64 μg/mL時(shí)，與吸光度線性關(guān)系良好。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度試驗(yàn)

取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法，在500 nm處重復(fù)測(cè)定吸光度5次，得到平均吸光度x為0.2，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.003 7，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.85%，說(shuō)明此方法所用儀器的精密度良好。

2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取重量約1 g的半紅期棗樣品干粉置于5個(gè)不同的離心管中，制備總黃酮提取液并測(cè)定總黃酮含量。測(cè)定結(jié)果見表1.

表1 總黃酮重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，計(jì)算得到RSD值為0.76%，表明本試驗(yàn)重現(xiàn)性很好。

2.4 木棗不同發(fā)育時(shí)期總黃酮含量比較

根據(jù)建立的總黃酮測(cè)定方法，分別取樣測(cè)定不同發(fā)育時(shí)期棗果樣品中的總黃酮含量。結(jié)果如圖2所示。

圖2 呂梁木棗不同發(fā)育時(shí)期總黃酮含量

由圖2可知，木棗中總黃酮含量隨著果實(shí)的發(fā)育呈先升高后降低的趨勢(shì)。膨大期和白熟期的總黃酮含量較高，特別是白熟期，含量高達(dá)63.75 mg/g；從白熟期以后棗果中的總黃酮含量急劇下降，半紅期含量為14.19 mg/g；全紅期降到最低，僅2.06 mg/g.

3 討論與結(jié)論

黃酮類物質(zhì)是植物代謝過(guò)程的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，可以影響果蔬的氣味、顏色，具有多種保健功效。黃酮類物質(zhì)的積累與植物生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程和環(huán)境密切相關(guān)。鄒玲等發(fā)現(xiàn)，新疆駿棗棗葉中黃酮含量隨著物候期的變化由高逐漸降低，盛花期黃酮含量較高。王忠忠等研究表明，寧夏枸杞中黃酮類物質(zhì)隨果實(shí)發(fā)育呈下降趨勢(shì)，原因可能是因?yàn)殍坭皆谏兤诤统墒炱诠夂袭a(chǎn)物較少，影響了黃酮的積累。本試驗(yàn)結(jié)果也顯示，木棗果實(shí)中黃酮含量大小依次為白熟期>膨大期>半紅期>全紅期；黃酮在果實(shí)成熟期下降較快，可能是由于此階段果實(shí)中各物質(zhì)轉(zhuǎn)化消耗了較多的光合產(chǎn)物，黃酮也隨之降解或合成了其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，致使黃酮含量降低。而木棗在白熟期總黃酮含量很高，可能因?yàn)榇藭r(shí)光照強(qiáng)度高，光合作用強(qiáng)，黃酮合成所需底物充足。因此，為開發(fā)黃酮含量較高的棗產(chǎn)品，可以考慮在木棗白熟期采摘棗果。此外，本研究所建立的棗果黃酮測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單、精密度高、重復(fù)性好，可為今后其它棗樹品種黃酮成分的測(cè)定研究提供參考。