楊雁莉

（云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院 云南 昆明 650000）

GMP即藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，GMP要求藥品生產(chǎn)企業(yè)具備良好的生產(chǎn)設(shè)備，合理的生產(chǎn)過程，完善的質(zhì)量管理和嚴(yán)格的檢測(cè)系統(tǒng)，確保最終產(chǎn)品質(zhì)量符合法規(guī)要求。

微生物檢查作為藥品安全性的重要指標(biāo)，涉及檢驗(yàn)項(xiàng)目較多，既包括無菌藥品成品、部分原、輔料的無菌檢查、非無菌藥品的成品、中間品、輔料的微生物限度檢查，直接接觸藥品的包裝材料的微生物限度檢查，制藥用水的微生物檢查，也包括潔凈區(qū)環(huán)境和操作人員的潔凈度檢查，藥品中可能的微生物污染來自水系統(tǒng)、原料、設(shè)備、人員和環(huán)境等，微生物檢查不但能評(píng)價(jià)藥品本身的衛(wèi)生質(zhì)量，也能客觀的反映生產(chǎn)的過程控制和加工工藝，故而規(guī)范的進(jìn)行微生物檢查有助于生產(chǎn)合格、有效藥品[1-2]。

自《中國(guó)藥典》1995年版正式收載微生物限度檢查法以來，經(jīng)過20多年的努力，檢驗(yàn)方法日趨完善，并逐漸與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，在2020年版《中國(guó)藥典》中又增加了1108中藥飲片微生物限度檢查法，使檢驗(yàn)方法更加標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范。但有部分檢驗(yàn)人員沒有接受過微生物專業(yè)技能培訓(xùn)，缺乏無菌操作意識(shí)，在實(shí)際操作中不能嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行，導(dǎo)致檢驗(yàn)的結(jié)果受許多復(fù)雜因素的影響而易造成誤差。

在近幾年的檢查過程中，主要發(fā)現(xiàn)存在以下問題：

1.對(duì)進(jìn)行無菌檢查、微生物限度檢查所需對(duì)照菌株，《中國(guó)藥典》有嚴(yán)格的規(guī)定，對(duì)菌株進(jìn)行保藏和傳代是藥品微生物檢查質(zhì)量控制的重要一環(huán)。在某些企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株和工作菌株未嚴(yán)格區(qū)分，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株只可每月或每周1次用于制備轉(zhuǎn)種的工作菌株，工作菌株不能替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，從菌種傳代記錄中和菌種管的編碼上就沒有對(duì)兩者進(jìn)行區(qū)分，同一支菌株既用于檢驗(yàn)又用于轉(zhuǎn)種，導(dǎo)致菌株反復(fù)開啟，易造成轉(zhuǎn)種的新代菌株出現(xiàn)老化、退化、變異、污染等情況[3]。

2.在轉(zhuǎn)種和保藏過程中，還要觀察菌落形態(tài)，注意其生物學(xué)特征典型穩(wěn)定，并做純度、生物特性檢查，如染色鏡檢、生化鑒別等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn)，轉(zhuǎn)種的菌種出現(xiàn)形態(tài)變異、菌落變異等老化、退化、變異、污染情況，應(yīng)即時(shí)滅菌銷毀。但部分藥品生產(chǎn)企業(yè)檢驗(yàn)人員缺乏相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，只知道傳代次數(shù)超過五代的菌種后才銷毀，不注意確保菌種的活性和純度，檢查時(shí)應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)查看保藏菌種的情況，同時(shí)查看是否有保藏菌種的相關(guān)觀察情況和對(duì)關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行確認(rèn)的記錄。

3.銅綠假單胞菌接種到胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基斜面上傳代培養(yǎng)后，如在冰箱中保存，易發(fā)生菌體自溶而死亡，應(yīng)在室溫保存。但仍有某些微生物檢驗(yàn)人員不了解該特性，把所用菌種都置于冰箱保存。

4.為了應(yīng)對(duì)檢查，只要有相應(yīng)的驗(yàn)證方案及報(bào)告，不管驗(yàn)證結(jié)果的正確與否。微生物限度檢查做計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)供試品有抑菌活性，需要通過增加稀釋液或培養(yǎng)基的體積、加入適宜的中和劑或滅活劑、采用薄膜過濾法等方法單用或聯(lián)合使用來消除供試品的抑菌活性，驗(yàn)證過程較為復(fù)雜，需操作人員有較強(qiáng)的微生物檢查專業(yè)知識(shí)。但某些清熱解毒的中成藥處方含有抗菌作用中藥材，在藥品說明書或藥品宣傳手冊(cè)中也提及經(jīng)藥理研究XX藥品具有殺滅常見的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等功效，但部分企業(yè)QC檢驗(yàn)人員做的該藥品的計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)報(bào)告中，又顯示該藥品金黃色葡萄球菌等試驗(yàn)組菌落減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值在0.5～2范圍，沒有抑菌活性，可以采用常規(guī)的平皿法進(jìn)行微生物限度檢查，自相矛盾。

5.微生物限度檢查供試品的制備，不考慮供試品的理化特性和生物學(xué)特性，供試品一律采用《中國(guó)藥典》1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法中水溶性供試品制備方法來稀釋供試品進(jìn)行試驗(yàn)，而供試品中污染的微生物分布具有隨機(jī)性、不均勻性的特點(diǎn)，故而要求供試品不一定要完全溶解于稀釋液中，但要均勻分散，形成均一、穩(wěn)定的供試液分散體系，否則會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果引入較大誤差。在做方法適用性試驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)供試品特性（如aw值、pH值、產(chǎn)品的成分和抑菌性），綜合考慮后采取適宜的方法制備供試液，經(jīng)驗(yàn)證后納入方法適用性報(bào)告。

6.2015年版《中國(guó)藥典》非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法中，計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)要求“試驗(yàn)組取上述制備好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每1 mL供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100 cfu”?！八泳旱捏w積應(yīng)不超過供試液體積的1%”。即從供試液制備就需加入測(cè)試用菌株（特殊情況除外），不同于以前測(cè)試用平皿中直接加入菌株，這樣使測(cè)試用菌株與供試品作用充分，能較好的模擬供試品污染情況，減少系統(tǒng)誤差，但操作步驟也較之前《中國(guó)藥典》規(guī)定復(fù)雜，部分藥品生產(chǎn)企業(yè)的計(jì)數(shù)方法適用性報(bào)告中未體現(xiàn)該步驟的操作過程（如具體描述了多少毫升的供試液加入多少毫升的試驗(yàn)菌液，每1 mL試驗(yàn)菌液含菌量大概是多少cfu），只籠統(tǒng)的照抄上述標(biāo)準(zhǔn)，沒有反映真實(shí)的試驗(yàn)過程。

7.某些QC人員未嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》中微生物檢查方法的要求進(jìn)行操作，如在檢查現(xiàn)場(chǎng)查看潔凈區(qū)的使用記錄，近期進(jìn)行了XX批號(hào)XX藥品的微生物限度檢查，按時(shí)間計(jì)算，應(yīng)處于平板培養(yǎng)階段，但在培養(yǎng)箱中只查見胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板；或按檢驗(yàn)原始記錄顯示供試液制備了兩個(gè)稀釋級(jí)，每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基制備了各2個(gè)平板，但現(xiàn)場(chǎng)培養(yǎng)箱查見的平板，要么少一個(gè)稀釋級(jí)的平板，要么每個(gè)稀釋級(jí)只做一個(gè)平板；或無菌檢查中培養(yǎng)容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)不少于14 d，部分QC實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)為7 d不長(zhǎng)菌后面也不會(huì)長(zhǎng)，不到14 d即取出處理。

8.微生物檢驗(yàn)原始記錄中，照抄《中國(guó)藥典》的文字?jǐn)⑹觯瑳]有反映真實(shí)的檢驗(yàn)過程，如先敘述“胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30～35℃培養(yǎng)3～5 d，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20～25℃培養(yǎng)5～7 d，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告?！痹儆幸粡埍砀裉顚懥嗣糠N培養(yǎng)基每個(gè)稀釋級(jí)的菌落數(shù)的點(diǎn)計(jì)情況，從其原始檢驗(yàn)記錄中不能反映在具體在何種溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，也沒有反映培養(yǎng)的具體天數(shù)。

9.部分企業(yè)QC實(shí)驗(yàn)室滅菌后培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間未進(jìn)行驗(yàn)證。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過一周，且需密閉包裝，曾經(jīng)在藥品生產(chǎn)企業(yè)見到環(huán)境監(jiān)測(cè)用的平板，保存期限訂為一月，室溫保存未密封，平板表面已經(jīng)脫水開裂仍準(zhǔn)備使用。

10.GB/T 16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法》中對(duì)培養(yǎng)基的要求為“大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或用戶認(rèn)可并經(jīng)驗(yàn)證了的培養(yǎng)基”，需氧菌計(jì)數(shù)采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)采用沙氏培養(yǎng)基，該國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求采用兩種培養(yǎng)基或經(jīng)驗(yàn)證了的培養(yǎng)基，從而能更全面的反映潔凈區(qū)的污染情況。藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況（如地域、季節(jié)，某一階段的污染情況等）進(jìn)行綜合考察，對(duì)在環(huán)境監(jiān)測(cè)過程中檢測(cè)到的菌落進(jìn)行鑒定，以確認(rèn)企業(yè)在環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)需采用的培養(yǎng)基類別。某些藥品生產(chǎn)企業(yè)的潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測(cè)操作規(guī)程上直接規(guī)定，只采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)沉降菌，沒有進(jìn)行考察，無相關(guān)數(shù)據(jù)支持[4]。

11.在進(jìn)行非無菌藥品微生物限度檢查中控制菌檢查時(shí)，不注意選擇正確的限度標(biāo)準(zhǔn)。《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1107非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定有兼用途徑的制劑，“應(yīng)符合各給藥途徑的標(biāo)準(zhǔn)”，某些企業(yè)會(huì)只按常用的給藥途徑進(jìn)行檢查。另外“含臟器提取物的化學(xué)藥品、生物制品、不含藥材原粉的中藥制劑”、“含動(dòng)植物源成分或礦物的化學(xué)藥品或生特制品”不得檢出沙門氏菌，這就需要企業(yè)對(duì)產(chǎn)品的工藝、原輔料的來源（是否有動(dòng)物來源，植物、礦物質(zhì)來源的是否經(jīng)過提?。﹣砭C合判斷是否應(yīng)該做沙門菌檢查。

12.GB/T 16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法》中，5.3.2項(xiàng)規(guī)定“在動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開始的時(shí)間及測(cè)試時(shí)間”，5.5項(xiàng)規(guī)定“若為動(dòng)態(tài)測(cè)試，則還應(yīng)記錄現(xiàn)場(chǎng)操作人員數(shù)量，現(xiàn)場(chǎng)設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)量及位置等”，在某些企業(yè)沉降菌動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與靜態(tài)監(jiān)測(cè)原始記錄共用一個(gè)模板，只有簡(jiǎn)單的培養(yǎng)皿菌落計(jì)數(shù)，記錄無法反映監(jiān)測(cè)時(shí)的真實(shí)情況，如在某個(gè)采樣點(diǎn)，從開始生產(chǎn)到結(jié)果用了幾個(gè)培養(yǎng)皿，各皿的菌落計(jì)數(shù)等[5]。

規(guī)范地進(jìn)行微生物檢查，“人”是最關(guān)鍵的因素，大部分的缺陷都可歸結(jié)到人員培訓(xùn)不到位上，故而從事藥品微生物檢查工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近的專業(yè)知識(shí)背景，并應(yīng)加強(qiáng)對(duì)微生物專業(yè)知識(shí)和操作技能的培訓(xùn)，如微生物專業(yè)知識(shí)，無菌操作，培養(yǎng)基制備、消毒滅菌、貯藏，菌種鑒定、傳代、保藏，無菌檢查方法、微生物檢查方法、潔凈區(qū)域的微生物監(jiān)測(cè)，經(jīng)考核后合格方能上崗。