張 斌，宋囡囡，劉 浩，李 玲，邱樹磊，郭廣富，武彩紅*

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇泰州 225300；2.泰州醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)鳳凰畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰州 225300）

巴馬香豬遺傳性穩(wěn)定，具有早熟、耐粗飼、抗病力強和產(chǎn)仔多等特點，是我國優(yōu)良的地方豬種，2001年被列入國家種質(zhì)資源保護計劃（舒黎輝和邢君，2015）。作為優(yōu)良種質(zhì)資源被保護，同時，因巴馬香豬肉質(zhì)營養(yǎng)豐富和味道鮮美，被作為食品開發(fā)；又因其體重輕，生長慢，作為試驗動物被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。此外，巴馬香豬因其毛色“兩頭烏”，外形圓潤俊俏，深受寵物市場青睞（玉萍等，2011）。

巴馬香豬因具有獨特的種質(zhì)特性而具有良好的開發(fā)利用前景。在目前疫情頻發(fā)的背景下，對巴馬香豬進行高效繁殖研究與開發(fā)顯得尤為緊迫。因此，本研究以巴馬香公豬為研究對象，研究在日糧中添加復(fù)方中草藥對其精液品質(zhì)及免疫的影響，對提高巴馬香豬繁殖和種質(zhì)資源保存具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和分組 試驗將12只健康、成年、性成熟性能相近的巴馬香公豬隨機分為4組，每組3只，1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；2組為低劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加1%復(fù)方中草藥；3組為中劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加2%復(fù)方中草藥；4組為高劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加3%復(fù)方中草藥。

所有試驗動物每天飼喂2次，1.0 kg/次，自由飲水。分別在試驗開始后第0、7、14和21 d采集精液，檢測精液品質(zhì)；空腹前腔靜脈采集血液，分離血清，-20℃保存，用于測定免疫指標。

1.2 復(fù)方中草藥組方及制備 淫羊藿、菟絲子、補骨脂、覆盆子等以一定比例混合后粉碎，然后于溫箱中烘干后分裝備用。

1.3 測定方法

1.3.1 精液采集 手握法無菌采集精液，將精液盛于37℃預(yù)熱的燒杯中，用量筒測量精液體積。

1.3.2 精子活力測定 參照張斌等（2018）方法，精液經(jīng)稀釋后置于預(yù)熱載玻片上，加蓋玻片后顯微鏡下計數(shù)200個精子中直線運動精子所占的百分率，即為精子活力。

1.3.3 精子畸形率 采用吉姆薩染色法，具體方法參照 GB 23238-2009（2009）。精液抹片，干燥后置于中性福爾馬林液中固定15 min，經(jīng)吉姆薩液染色1.5 h，顯微鏡下計數(shù)200個精子中的畸形精子所占百分率，即為精子畸形率。

1.3.4 免疫指標 血清中IgA、IgG、IgM含量測定分別按照豬IgA、IgG、IgM ELASA檢測試劑盒說明書操作，利用酶標儀在450 nm波長測量各孔的OD值，然后根據(jù)公式換算，得出血清中IgA、IgG、IgM含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件中ANOVA進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果分析

2.1 日糧添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì)的影響 由圖1可知，給藥后14 d，中、高劑量組精液量顯著高于對照組（P＜0.05）；而21 d時，所有給藥組精液量均顯著高于對照組（P＜0.05），但以中劑量組增加最為明顯，且顯著高于低、高劑量組（P＜0.05）。給藥后各組的精液量呈增加趨勢，但低劑量組14、21 d時精液量顯著高于0、7d（P ＜ 0.05）；中劑量組 7、14和 21 d精液量均顯著高于0 d（P＜0.05）；在高劑量組中，僅21 d時精液量顯著高于0、7 d（P＜0.05）。

圖1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液量的影響

由圖2可見，與對照組相比，不同給藥組在同一日齡下，7、14 d時僅中劑量組精子活力顯著高于對照組（P＜0.05），21d時各給藥組精子活力與對照組均存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。同一給藥組相比，低劑量組14、21 d時精子活力與0、7 d間存在顯著差異（P＜0.05）；中劑量組在給藥后7、14和21 d時，精子活力與0 d均存在顯著差異（P＜0.05），但14、21 d間差異不顯著（P＞0.05）；在高劑量組中，雖精子活力逐漸升高，但僅21 d時精子明顯高于0、7d（P＜0.05）。

圖2 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精子活力的影響

由圖3可知，中劑量組精子畸形率在14 d和21 d時顯著低于對照組，低、高劑量組精子畸形率在21 d時也顯著低于對照組（P＜0.05）。與同一給藥組相比，隨著給藥時間增加，除高劑量組14 d外，14 d和21 d各給藥組間精子畸形率均明顯降低（P＜0.05）。

圖3 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精子畸形率的影響

2.2 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬免疫指標的影響 由表1可知，給藥后0、7d各組IgA、IgG和IgM含量與對照組無明顯變化（P＞0.05）；14 d和21 d中劑量組IgA顯著高于對照組（P＜0.05）。組內(nèi)相比，21 d各給藥組IgA和IgG含量均最高（P＜0.05）。就IgM含量來看，組間和組內(nèi)相比均無顯著差異（P＞0.05）。

表1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬血清中IgA、IgG、IgM含量的影響 g/L

3 討論

3.1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì) 精子是精液的主要成分，精子數(shù)量、活力、畸形率等直接影響精液質(zhì)量（李葉子和劉波，2016）。因此，本試驗主要通過精液量、精子活力和精子畸形率評價日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì)的影響。在動物繁殖方面，中草藥改善公畜精液品質(zhì)也發(fā)揮了積極作用（楊飛來等，2020）。

本試驗復(fù)方中草藥選擇淫羊藿、菟絲子、補骨脂、覆盆子為主藥。其中淫羊藿主要含有黃酮、生物堿、多糖等壯陽類活性成分（黃濤，2017），具有雄激素樣作用。菟絲子主要包含黃酮、多糖、糖苷化學(xué)成分，具有補肝腎、益精髓作用（劉運鎮(zhèn)等，2014）。補骨脂具有補腎助陽，固精縮尿功效（楊闊等，2021）。覆盆子具有補腎益精、補助腎陽功效（曾小艷等，2020）。楊飛來等（2020）研究表明，淫羊藿提取物可顯著改善公豬精液量和精液品質(zhì)。菟絲子黃酮可通過保護生精細胞，抑制生精細胞凋亡，促進生精細胞活性（2021）。嚴迪華等（2012）研究表明，日糧添加含有一定劑量的補骨脂和覆盆子的中草藥復(fù)方制劑可顯著提高種公豬的精液品質(zhì)。本試驗中，在日糧添加淫羊藿、菟絲子、補骨脂、覆盆子等組成的復(fù)方中草藥在提高巴馬香公豬精液量，增加精子活力，降低精子畸形率方面具有一定作用，特別是中劑量組在給藥14 d和21 d時作用顯著。

3.2 日糧添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬免疫功能的影響 免疫球蛋白是由淋巴細胞特別是漿細胞合成的一類具有抗體活性的球蛋白，包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中IgA、IgG、IgM常用于評價動物機體免疫能力。IgA主要存在于外分泌液中，是黏膜細胞表面的主要免疫活性成分；IgG含量高，持續(xù)時間久，是發(fā)揮免疫功能的主要因子（Allaire等，2018）。本試驗復(fù)方中草藥的主藥淫羊藿、菟絲子、補骨脂、覆盆子均具有提高和改善機體免疫功效（曾小艷等，2020）。本試驗結(jié)果表明，日糧中添加復(fù)方中草藥可有效提高巴馬香公豬血清中IgA和IgG含量，說明該復(fù)方中草藥可提高巴馬香公豬免疫能力。