趙麗萍，陳浩，宋敏

1.新疆維吾爾自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院（烏魯木齊 830011）；2.新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)疾病預(yù)防控制中心（烏魯木齊 830011）

黑桑椹，又稱“藥?！?，是自然界極為罕見(jiàn)的稀貴桑樹半栽培半野生資源，也是中國(guó)唯一的黑桑種，栽培適應(yīng)地只限于新疆[1]。黑桑椹作為維吾爾族民間傳統(tǒng)藥材，具有活血補(bǔ)腦、通脈護(hù)肝、強(qiáng)腎利尿、降壓降脂等作用[2]。黑桑椹成熟后，因存儲(chǔ)時(shí)間短，運(yùn)輸易損壞，除生食外，通常會(huì)將其晾曬成黑桑椹干食用。

農(nóng)藥可有效預(yù)防病蟲害，在果蔬種植中被廣泛使用，農(nóng)藥殘留可通過(guò)食物鏈在人體內(nèi)積累，造成神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，引起染色體畸變，導(dǎo)致癌變或畸形[3]，農(nóng)藥殘留問(wèn)題受到廣泛關(guān)注，農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)一直是國(guó)內(nèi)研究熱點(diǎn)[4-5]，但中國(guó)對(duì)新疆黑桑椹干中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)少有報(bào)道。

食品中農(nóng)藥殘留的前處理方法多采用液-液萃取，固相萃取凈化濃縮[6-7]，這些方法普遍存在操作步驟繁瑣、有機(jī)溶劑消耗量大等問(wèn)題[8]。QuEChERS法是近年來(lái)發(fā)展迅速的一種農(nóng)藥多組分殘留檢測(cè)前處理方法，該法因快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、高效、安全等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛用于農(nóng)藥多殘留快速檢測(cè)[9-12]?；赒uEChERS法開發(fā)氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)黑桑椹干中農(nóng)藥殘留的方法，旨在建立一種簡(jiǎn)單快速、重復(fù)性好，且能同時(shí)測(cè)定黑桑椹干中多種農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

TSQ 9000三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo公司）；SIGMA 3K15冷凍離心機(jī)（德國(guó)希格瑪公司）；IKA RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)艾卡集團(tuán)）。

1.2 材料與試劑

甲拌磷、氯唑磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、對(duì)硫磷、水胺硫磷、甲基異柳磷、腐霉利、丙環(huán)唑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、噠螨靈、氰戊菊脂、溴氰菊酯、環(huán)氧七氯（內(nèi)標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；乙腈（分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；乙酸乙酯（分析純，上海山浦化工有限公司）；丙酮（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取14種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品各1支，用丙酮反復(fù)轉(zhuǎn)移并定容至10 mL混勻，配制成質(zhì)量濃度10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，冷藏備用。按照樣品前處理方法，提取空白基質(zhì)溶液，配制質(zhì)量濃度分別為0.005，0.010，0.050，0.100和0.500 μg/mL的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；分別吸取1.0 mL的上述混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，準(zhǔn)確加入20 μL質(zhì)量濃度5 μg/mL的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液。

1.4 樣品提取液的制備

將樣品剪碎研磨后備用，稱取10 g（精確至0.01 g）制備后樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈和1 g氯化鈉，高速勻漿1 min，按4 200 r/min 離心5 min，取5 mL上清液到含有885 mg硫酸鎂、150 mg PSA、15 mg GCB離心管中，渦旋1 min；按4 200 r/min 離心5 min，取2 mL上清液氮?dú)獯抵两?，加? mL乙酸乙酯復(fù)溶，加入20 μL 10 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液環(huán)氧七氯，混勻后上機(jī)測(cè)定。

1.5 色譜條件

色譜柱，TG-5SILMS柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口280 ℃；進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣。升溫程序：90 ℃保持1.5 min，以25 ℃/min升溫至180℃保持1 min，以5 ℃/min升溫至280 ℃，以10 ℃/min升溫至300 ℃，保持2 min；載氣，高純氦氣（純度99.999%），流速1.0 mL/min。

1.6 質(zhì)譜條件

電離方式采用電子轟擊（EI）；電離能量70 eV；傳輸線溫度280 ℃；離子源溫度280 ℃；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）方式；溶劑延遲時(shí)間5 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.1.1 前處理優(yōu)化

黑桑椹干中色素、有機(jī)酸、糖等干擾物質(zhì)含量較高，試驗(yàn)證明，QuEChERS法操作簡(jiǎn)便，PSA可有效吸附樣品中有機(jī)酸、脂肪酸和糖等物質(zhì)；GCB對(duì)色素、甾醇、芳香烴具有較好吸附作用，可明顯降低基質(zhì)效應(yīng)。

2.1.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

14種農(nóng)藥的氣相色譜-質(zhì)譜總離子流圖見(jiàn)圖1，其中9（丙環(huán)唑），11（氯氟氰菊酯），13（氰戊菊脂）和14（溴氰菊酯）號(hào)組分各分離出2組峰形，互為同分異構(gòu)體。由圖1可知，經(jīng)條件優(yōu)化，14種組分在31 min前全部出分，且各組分峰形較好，分離效果好。分別選擇質(zhì)量數(shù)較大、響應(yīng)較高的碎片離子進(jìn)行二級(jí)碎裂，采用儀器軟件Auto SRM優(yōu)化碰撞電壓，建立質(zhì)譜檢測(cè)條件，母離子、子離子及最佳碰撞能量見(jiàn)表1。

圖1 14種農(nóng)藥的氣相色譜-質(zhì)譜總離子流圖

表1 14種農(nóng)藥SRM參數(shù)

2.2 檢測(cè)方法的線性范圍與檢出限

用空白基質(zhì)將農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成0.005~0.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以濃度為橫坐標(biāo)，定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性擬合。結(jié)果表明，在0.005~0.5 μg/mL的范圍內(nèi)各組分線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r在0.998 1以上，以3倍信噪比（S/N）計(jì)算檢測(cè)方法的檢出限，結(jié)果見(jiàn)表2，各組分檢出限在0.001~0.005 mg/kg，低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的限量值[13]。

表2 14種農(nóng)殘線性范圍和檢出限

2.3 方法的加標(biāo)回收率

為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，向黑桑椹干空白樣品中添加14種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度分別為0.1，0.5和1.0 mg/kg，按照前處理方法進(jìn)行處理，每個(gè)水平重復(fù)5次，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 14種農(nóng)殘加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏（n=5）

由表3可知，加標(biāo)量0.1 mg/kg時(shí)，回收率為85.3%~96.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差SRSD為5.2%~8.1%；加標(biāo)量0.5 mg/kg時(shí)，回收率為86.8%~102.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差SRSD為5.3%~8.2%；加標(biāo)量1.0 mg/kg時(shí)，回收率為88.9%~104.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差SRSD為5.2%~8.1%。結(jié)果表明，3組加標(biāo)樣品的回收率均在80%~120%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差SRSD均不大于10%，且加標(biāo)濃度越高，回收率越好，由此可知，該方法可靠，重現(xiàn)性較好。

2.4 方法的精密度

稱取10 g（精確至0.01 g）制備后樣品，加入0.1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，同1.3小節(jié)的方法前處理后加入內(nèi)標(biāo)混勻上機(jī)，平行測(cè)定6次，用于驗(yàn)證方法的精密度，結(jié)果見(jiàn)表4，該方法測(cè)定的14種農(nóng)殘的精密度范圍為0.9%~2.3%，該方法精密度較好。

表4 精密度（n=6）

3 結(jié)論

針對(duì)黑桑椹干建立14種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，并進(jìn)行方法學(xué)論證，結(jié)果表明，該方法可在31 min內(nèi)完成檢測(cè)，在0.005~0.5 μg/mL范圍內(nèi)各組分具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r在0.998 1以上；方法檢出限為0.001~0.005 mg/kg；在3個(gè)不同濃度的添加水平下，回收率為85.3%~104.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差SRSD為5.2%~8.2%，精密度為0.9%~2.3%。因此，該方法操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、精密度好，適合進(jìn)行黑桑椹干中14種農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)，該方法的建立，不僅對(duì)黑桑椹干中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)具有一定應(yīng)用價(jià)值，還可為其他農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供技術(shù)參考。