薛 飛,董傳瑩,田 莉,張春瑞

(鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校臨床醫(yī)學(xué)系,鄭州 450000)

子宮內(nèi)膜癌是來(lái)源于子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤,近年來(lái),其發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升,約占女性生殖道惡性腫瘤的20%~30%,早期患者多為局限性病變,以手術(shù)治療為主,但因早期常忽略不規(guī)則陰道排液和流血現(xiàn)象,易失去早期診斷的機(jī)會(huì),而晚期及復(fù)發(fā)性患者的治療以放化療為主的綜合性治療[1]。 蘆薈大黃素(aloe emodin,AE)是一種天然的蒽醌衍生物,可從蘆薈中提取,具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、神經(jīng)保護(hù)和肝保護(hù)等作用[2]。 研究發(fā)現(xiàn),AE 不但能夠誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的自噬和凋亡[3],還能通過(guò)激活人胰腺癌細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)通路,破壞癌細(xì)胞線粒體膜電位,具有明顯的抑癌作用[4]。 另有研究發(fā)現(xiàn)AE 通過(guò)上調(diào)miR-133 表達(dá)減輕心肌梗死和心肌細(xì)胞凋亡[5]。 而miRNAs 是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)度約為19~25 個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá)調(diào)控中起重要作用[6],其中,miR-30b 過(guò)表達(dá)可降低自噬相關(guān)標(biāo)記基因的表達(dá)且直接靶向Beclin1 基因[7]。 而B(niǎo)eclin1 是第一個(gè)在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的與自噬相關(guān)的抑癌基因,是調(diào)控細(xì)胞自噬活性的關(guān)鍵靶點(diǎn)[8]。 但是,目前AE 調(diào)控miR-30b 對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞自噬的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。 因此,本研究通過(guò)上調(diào)或抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 HEC-1-B 中 miR-30b 表達(dá),并使用 AE 培養(yǎng)該細(xì)胞,觀察其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及自噬的影響,旨在揭示AE 調(diào)控miR-30b 促進(jìn)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬的作用機(jī)制,為子宮內(nèi)膜癌的治療提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞株 HEC-1-A(目錄號(hào):TCHu149)、HEC-1-B(目錄號(hào):TCHu115)、RL95-2(目錄號(hào):TCHu198)均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù);人正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞株由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室贈(zèng)與。

1.2 主要試劑與儀器

AE(純度:HPLC≥98%,規(guī)格:每瓶 20 mg,貨號(hào):SA8200)、BCA 蛋白定量試劑盒(貨號(hào):PC0020)和ECL 顯色試劑盒(貨號(hào):SW2040)均購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司; 胰蛋白酶(貨號(hào):27250018)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS;貨號(hào):16140071)和RPIM-1640 培養(yǎng)基(貨號(hào):72400120)均購(gòu)自美國(guó)Giboc 公司;細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8,CCK-8;貨號(hào):CK04)購(gòu)自上海復(fù)申生物科技有限公司;96 孔板(貨號(hào):F600418)購(gòu)自上海生工生物工程有限公司;RNA 提取試劑盒(貨號(hào):DP431)購(gòu)自北京天根生化科技有限公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào):QP056)購(gòu)自美國(guó) Genecopoeia 公司;miR-30b、U6 引物以及 miR-30b 模擬物(miR-30b mimics)、miR-30b 模擬物陰性對(duì)照(miR-30b mimics NC)、miR-30b 抑制物(miR-30b inhibitor)、miR-30b抑制物陰性對(duì)照(miR-30b inhibitor NC)均由上海生工生物科技有限公司合成;蛋白 marker(貨號(hào):B2787-1VL)、β-actin 鼠抗(貨號(hào):AB1970-100UL)和PVDF 膜(貨號(hào):3010040001)均購(gòu)自美國(guó) Sigma公司;AnnexinV-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(貨號(hào):LHK601-020)購(gòu)自嘉美生物技術(shù)有限公司;Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑盒(貨號(hào):L3000015)購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司; 單丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)熒光檢測(cè)試劑盒(貨號(hào):KFS305)購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司;Beclin1 兔多克隆抗體(貨號(hào):ab62557)、p62 兔單克隆抗體(貨號(hào):ab211324)、LC3-II 和 LC3-I 兔單克隆抗體(貨號(hào):ab221794)以及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG 二抗(貨號(hào):ab150077)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司;酶標(biāo)儀Fax-20100 購(gòu)自美國(guó)INStat 公司;尼康SMZ745 光學(xué)顯微鏡購(gòu)自于上海普赫生物科技有限公司;FACSCanto 流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Beckman 公司;徠卡倒置熒光顯微鏡DMILLED 購(gòu)自上海成貫儀器有限公司; 全能型凝膠成像分析系統(tǒng)ChemiDoc-MP 購(gòu)自山東三瑞科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

分別將各個(gè)細(xì)胞株接種于含10%胎牛血清的RPIM-1640 培養(yǎng)基中,放于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2~3 d 用0.25%胰蛋白酶消化傳代,使細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng)。

1.3.2 qRT-PCR 檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平

使用RNA 提取試劑盒分別提取正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1-A、HEC-1-B、RL95-2 細(xì)胞株的總 RNA,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,以cDNA 為模板,按照qRT-PCR 試劑盒說(shuō)明書配置 PCR 反應(yīng)體系:2×SYBR mix 10 μL,H2O 8 μL,上下游引物各 0.5 μL,10×cDNA 模板 1 μL。 反應(yīng)條件設(shè)定為:94℃預(yù)變性5 min、94℃變性15 s、55℃退火 50 s、35 個(gè)循環(huán)、72℃延伸 10 min。 以 U6為內(nèi)參,根據(jù) 2-ΔΔCt算法,計(jì)算 miR-30b 表達(dá)水平。miR-30b 和U6 引物序列見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR 引物序列Table 1 qRT-PCR primer sequences

1.3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組

HEC-1-B 癌細(xì)胞隨機(jī)分為HEC-1-B 癌細(xì)胞組(正常培養(yǎng),未轉(zhuǎn)染)、miR-30b inhibitor NC 組(正常培養(yǎng),轉(zhuǎn)染miR-30b inhibitor NC)、miR-30b inhibitor(正常培養(yǎng),轉(zhuǎn)染 miR-30b inhibitor)以及 AE 組(含終濃度為 30 μmol/L AE 培養(yǎng)[9],未轉(zhuǎn)染)、AE+miR-30b mimics NC 組(含終濃度為 30 μmol/L AE 培養(yǎng),轉(zhuǎn)染 miR-30b mimics NC)、AE+miR-30b mimics 組(含終濃度為 30 μmol/L AE 培養(yǎng),轉(zhuǎn)染 miR-30b mimics),當(dāng)HEC-1-B 癌細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)50%~60%時(shí),使用Lipofectamine 3000 轉(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后分別進(jìn)行正常培養(yǎng)或使用含終濃度為30 μmol/L AE 培養(yǎng),各組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng) 24 h 后,檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.3.4 CCK-8 法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性

收集各組細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為每毫升1×105個(gè),每孔接種100 μL 至96 孔板中,空白孔加入100 μL 培養(yǎng)基,在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 使細(xì)胞貼壁,加入濃度為10%的CCK-8 溶液,繼續(xù)培養(yǎng)2 h后,于酶標(biāo)儀上檢測(cè)各孔在450 nm 波長(zhǎng)下的OD值。 每組各設(shè)6 個(gè)復(fù)孔。 細(xì)胞增殖率(%)= (實(shí)驗(yàn)組OD450nm-空白組OD450nm)/(對(duì)照組OD450nm-空白組OD450nm)。

1.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率

收集轉(zhuǎn)染或培養(yǎng)24 h 后的各組細(xì)胞,1200 r/min 離心 5 min,棄上清,用 PBS 洗滌細(xì)胞2 次,加入400 μL 結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞,再加入5 μL Annexin V 染液,輕輕混勻后于2℃~8℃下避光孵育15 min,然后加入10 μL PI 輕輕混勻,再次于2℃~8℃避光孵育5 min,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,每組重復(fù)6 次。

1.3.6 MDC 試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞自噬率

取轉(zhuǎn)染或培養(yǎng)24 h 后的各組細(xì)胞,每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔重復(fù),每孔取2 mL 細(xì)胞懸液,800 r/min 離心5 min,棄上清,1×Wash buffer 清洗細(xì)胞 1 次并重懸細(xì)胞,調(diào)整濃度為每毫升1×105個(gè),各取90 μL 細(xì)胞懸液至新的EP 管中,加入10 μL MDC 染液,輕輕混勻,室溫避光孵育30 min,然后800 r/min 離心 5 min,棄上清,1×Wash buffer 清洗細(xì)胞 2 次后,加入100 μL collection buffer 重懸細(xì)胞滴加于載玻片上,蓋上蓋玻片,于熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)波長(zhǎng)355 nm,阻斷波長(zhǎng)512 nm)并計(jì)數(shù)MDC 陽(yáng)性細(xì)胞(核周和胞漿出現(xiàn)高密度著色點(diǎn)),以MDC 陽(yáng)性細(xì)胞率表示細(xì)胞自噬率。

1.3.7 Western blot 法檢測(cè)各組細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平

收集轉(zhuǎn)染或培養(yǎng)24 h 后的各組細(xì)胞,采用蛋白抽提試劑盒提取各組細(xì)胞總蛋白,使用BCA 蛋白定量試劑盒對(duì)蛋白進(jìn)行定量,依次進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn) PVDF 膜、5%脫脂奶粉封閉、1 ∶2000濃度稀釋后的 Beclin1、p62、LC3-II 和 LC3-I 一抗4℃過(guò)夜孵育、置于含辣根過(guò)氧化物酶綴合的二抗(1 ∶5000)中室溫孵育 2 h、洗膜,用 ECL 試劑盒顯色,全能型凝膠成像分析系統(tǒng)拍照,以β-actin 為內(nèi)參,分析各組蛋白表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究所得數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,使用GraphPad Prism7.0 軟件繪制條形圖,多組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn);當(dāng)P<0.05 時(shí),代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-30b 在正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞和不同子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中的表達(dá)

與人正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(1.00±0.00)相比,HEC-1-A、HEC-1-B 和 RL95-2 癌細(xì)胞中 miR-30b表達(dá)水平分別為(1.87±0.19)、(2.14±0.22)、(1.69±0.17)均顯著升高(P< 0.05)。 其中 HEC-1-B 癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平最高,所以后續(xù)將選擇HEC-1-B 癌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

2.2 抑制miR-30b 對(duì)HEC-1-B 癌細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響

與HEC-1-B 癌細(xì)胞組和miR-30b inhibitor NC組相比,miR-30b inhibitor 組癌細(xì)胞miR-30b 表達(dá)水平、細(xì)胞增殖率以及p62 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P< 0.05),細(xì)胞凋亡率、自噬率以及Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值顯著升高(P< 0.05)。 見(jiàn)圖 1、圖 2。

圖1 各組癌細(xì)胞增殖、凋亡及自噬比較Note. A, Apoptosis detection chart. B, Autophagy body fluorescence diagram. C, Western blot analysis of autophagy related proteins.Figure 1 Comparison of proliferation, apoptosis and autophagy of cancer cells in each group

圖2 各組HEC-1-B 癌細(xì)胞增殖凋亡及自噬比較Note. A, Expression level of miR-30b and autophagy related proteins. B, Proliferation, apoptosis and MDC positive cell rate. Compared with HEC-1-B cancer cell group, #P < 0.05. Compared with miR-30b inhibitor NC group, △P < 0.05.Figure 2 Comparison of proliferation, apoptosis and autophagy of HEC-1-B cancer cells in each group

2.3 AE 對(duì) HEC-1-B 癌細(xì)胞 miR-30b 表達(dá)水平的影響

與 HEC-1-B 癌細(xì)胞組(1.00±0.00)相比,AE 組(0.32±0.04)和 AE+miR-30b mimics NC 組(0.35±0.05)癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平顯著降低(P<0.05);與 AE+miR-30b mimics NC 組相比,AE+miR-30b mimics 組(1.17±0.12)癌細(xì)胞中 miR-30b 表達(dá)水平顯著升高(n=6,P< 0.05)。

2.4 AE 對(duì) HEC-1-B 癌細(xì)胞增殖活性和凋亡的影響

與HEC-1-B 癌細(xì)胞組相比,AE 組和AE+miR-30b mimics NC 組癌細(xì)胞增殖率顯著降低,細(xì)胞凋亡率顯著升高(P< 0.05);與AE+miR-30b mimics NC組相比,AE+miR-30b mimics 組癌細(xì)胞增殖率顯著升高,細(xì)胞凋亡率顯著降低(P< 0.05)。 見(jiàn)圖3、圖4。

圖3 各組細(xì)胞凋亡情況檢測(cè)結(jié)果Note. A, HEC-1-B cancer cell group. B, AE group. C, AE+miR-30b mimics NC group. D, AE+miR-30b mimics group.Figure 3 Detection results of apoptosis in each group.

圖4 各組HEC-1-B 癌細(xì)胞增殖率和凋亡率比較Note. Compared with HEC-1-B cancer cell group, #P < 0.05.Compared with AE+miR-30b mimics NC group, △P < 0.05.Figure 4 The ratio of proliferation rate and apoptosis rate of HEC-1-B cancer cells in each group

2.5 AE 對(duì)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬率的影響

與HEC-1-B 癌細(xì)胞組(2.26±0.29)%相比,AE組(24.57±2.51)%和 AE+miR-30b mimics NC 組(29.22±3.20)%癌細(xì)胞自噬率顯著升高(P<0.05);與 AE+miR-30b mimics NC 組相比,AE+miR-30b mimics 組(15.19±1.71)%癌細(xì)胞自噬率顯著降低(P< 0.05)。 見(jiàn)圖 5。

圖5 各組HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬小體熒光圖Note. A, HEC-1-B cancer cell group. B, AE group. C, AE+miR-30b mimics NC group. D, AE+miR-30b mimics group.Figure 5 Fluorescence of autophagy bodies of HEC-1-B cancer cells in each group

2.6 AE 對(duì)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響

與HEC-1-B 癌細(xì)胞組相比,AE 組和AE+miR-30b mimics NC 組癌細(xì)胞 Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值顯著升高,p62 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P< 0.05)。 與 AE+miR-30b mimics NC 組相比,AE+miR-30b mimics 組癌細(xì)胞Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值顯著降低,p62 蛋白表達(dá)水平顯著升高(P< 0.05)。 見(jiàn)圖 6、圖 7。

圖6 各組HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)Western blot 圖Note. A,HEC-1-B cancer cell group. B,AE group. C,AE+miR-30b mimics NC group. D, AE+miR-30b mimics group.Figure 6 Expression of autophagy related proteins in HEC-1-B cancer cells of each group by Western blot

圖7 各組HEC-1-B 癌細(xì)胞中Beclin1、p62 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值比較Note. Compared with HEC-1-B cancer cell group, #P < 0.05.Compared with AE+miR-30b mimics NC group, △P < 0.05.Figure 7 Comparison of Beclin1 and p62 protein expression levels and LC3-II/I ratio in HEC-1-B cancer cells of each group

3 討論

子宮內(nèi)膜癌好發(fā)于圍絕經(jīng)期與絕經(jīng)后婦女,目前早期患者的5 年生存率可達(dá)80%~90%,但晚期患者預(yù)后較差,5 年生存率僅為5%,確切病因仍不清楚,臨床觀察發(fā)現(xiàn)可能與雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜的長(zhǎng)期持續(xù)刺激有關(guān),還可能與子宮內(nèi)膜增生、不育、晚絕經(jīng)、家族史等有關(guān)[10],其發(fā)病機(jī)制也較為復(fù)雜。因此探究子宮內(nèi)膜癌具體發(fā)病機(jī)制對(duì)其后期治療至關(guān)重要。 本研究發(fā)現(xiàn),與正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞相比,不同子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1-A、HEC-1-B 和RL95-2 中 miR-30b 表達(dá)水平均顯著升高,其中HEC-1-B 癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平最高。

AE 為大黃中有效抗菌成分,在多種人類癌細(xì)胞系中具有抗癌特性,包括抑制癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞死亡,調(diào)節(jié)免疫信號(hào)等[11]。 除本身具有的抗腫瘤作用外,還可提高腫瘤對(duì)放療、化療的敏感性[12]。 另外劉豪杰等[13]研究發(fā)現(xiàn),AE 可通過(guò)提高胃癌細(xì)胞自噬,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,Gao 等[14]研究發(fā)現(xiàn)AE 可誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡。 而誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬和凋亡可發(fā)揮抗子宮內(nèi)膜癌的作用[15]。 其中自噬蛋白Beclin1 表達(dá)水平及LC3-II/I 比值可用于反映自噬程度,而自噬溶酶體降解底物p62 表達(dá)的增加與自噬水平呈反相關(guān)[16]。本研究發(fā)現(xiàn),AE 可顯著降低 HEC-1-B 癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平、細(xì)胞增殖率以及p62 蛋白表達(dá)水平,顯著提高細(xì)胞凋亡率、自噬率以及Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值,提示AE 可能通過(guò)促進(jìn)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬,進(jìn)一步促進(jìn)其凋亡,抑制其增殖,但是否調(diào)控miR-30b 尚需進(jìn)一步研究。Li 等[17]研究發(fā)現(xiàn)miR-30b 可通過(guò)抑制自噬減輕肝缺血再灌注損傷。 miR-30b 還通過(guò)抑制耐順鉑胃癌細(xì)胞的自噬來(lái)消除肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1 誘導(dǎo)的順鉑耐藥性[18]。 本研究發(fā)現(xiàn),抑制miR-30b 可顯著降低HEC-1-B 癌細(xì)胞中miR-30b 表達(dá)水平、細(xì)胞增殖率、以及p62 蛋白表達(dá)水平,顯著提高細(xì)胞凋亡率、自噬率以及Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值,提示抑制miR-30b 可能通過(guò)促進(jìn)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬,進(jìn)一步促進(jìn)其凋亡。 而B(niǎo)ai 等[19]研究發(fā)現(xiàn)AE 不但可通過(guò)抑制miR-1 來(lái)緩解高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠心電圖中Q 波和T 波時(shí)間延長(zhǎng),還可通過(guò)上調(diào)miR-15a,從而抑制凋亡相關(guān)基因Bcl-2 表達(dá),誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡[20]。 本研究為進(jìn)一步探究AE調(diào)控miR-30b 對(duì)HEC-1-B 癌細(xì)胞的影響,將HEC-1-B 癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-30b mimics 后,使用 AE 處理,發(fā)現(xiàn)與AE+miR-30b mimics NC 組相比,AE+miR-30b mimics 組癌細(xì)胞miR-30b 表達(dá)水平、細(xì)胞增殖率以及p62 蛋白表達(dá)水平顯著升高,而細(xì)胞凋亡率、自噬率以及Beclin1 蛋白表達(dá)水平和LC3-II/I 比值顯著降低,提示上調(diào)miR-30b 可逆轉(zhuǎn)AE 對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮的作用。

綜上所述,AE 可能通過(guò)抑制miR-30b 表達(dá),促進(jìn)HEC-1-B 癌細(xì)胞自噬,進(jìn)一步抑制癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡,而上調(diào)miR-30b 可逆轉(zhuǎn)AE 對(duì)HEC-1-B 癌細(xì)胞的作用。 然而AE 對(duì)子宮內(nèi)膜癌的作用機(jī)制較為復(fù)雜,尚需深入研究。