樊雪梅， 王書民， 李哲建， 王毅夢， 劉 萍

(商洛學(xué)院化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院，陜西商洛 726000)

甲氧芐啶(TMP)主要用于治療敏感的大腸埃希菌、奇異變形桿菌，以及某些腸桿菌所致的急性單純性尿路感染，可與多種抗生素合用產(chǎn)生協(xié)同作用，增強療效。故建立快速、準(zhǔn)確檢測TMP的方法在臨床上具有重要意義。目前檢測TMP方法有色譜法[1]、質(zhì)譜法[2]、電化學(xué)法[3]、毛細(xì)管電泳法[4]、熒光法[5]、紫外分光光度法[6]、化學(xué)發(fā)光法[7]等。但這些方法存在儀器昂貴，操作步驟繁瑣等缺點。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

UV-1600PC紫外-可見分光光度計(上海美譜達(dá)儀器有限公司)；JEM-2100型透射電子顯微鏡(日本，電子株式會社)；79-2雙向磁力攪拌加熱器(江蘇金壇富華儀器有限公司)。

0.25 g/L甲氧芐啶(TMP)標(biāo)準(zhǔn)品溶液：準(zhǔn)確稱取0.0010 g TMP，加1 mL冰HAc溶解，以超純水定容至4.0 mL。HAuCl4·H2O(阿拉丁試劑)，檸檬酸鈉(Sigma公司)，HCl、HNO3、HAc、NaAc購自天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠。用水為超純水。

1.2 Au NPs的制備

在250 mL錐形瓶中，加入100 mL 0.01%的HAuCl4溶液，于磁力加熱攪拌器上加熱至沸騰，再加入2.75 mL 1%檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)攪拌，煮沸12 min，顏色由紫紅色變?yōu)榫萍t色，自然冷卻至室溫后，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，4 ℃保存。

1.3 實驗方法

于5 mL具塞刻度試管中，加入2.0 mL Au NPs溶液，1.0 mL不同濃度TMP溶液，1.0 mL檸檬酸鈉-HCl緩沖溶液(pH=3.95)。室溫下避光反應(yīng)50 min后，取適量溶液于1 cm比色皿中，于分光光度計上，測定其在648 nm波長處的吸光度(A648)，以A648定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 可行性驗證

利用透射電鏡(TEM)表征了TMP 加入前后 Au NPs形貌的變化。制備的Au NPs平均直徑約20 nm，分散效果較好(圖1A)，當(dāng)加入TMP后，Au NPs 發(fā)生團聚(圖1B)，說明TMP和Au NPs之間存在靜電作用。同時以超純水為空白，在波長400～800 nm范圍內(nèi)對不同體系進(jìn)行光譜掃描(圖略)。Au NPs最大吸收波長在520 nm處，這是球形Au NPs表面等離子吸收的特征峰。當(dāng)向Au NPs中加入TMP后，于648 nm 處出現(xiàn)一新吸收峰，而原來520 nm處吸光度降低。此外，TMP濃度越大，648 nm新峰處吸光度越大，據(jù)此可知根據(jù)A648對TMP進(jìn)行定量分析。

圖1 Au NPs(A)和Au NPs-TMP(B)的透射電鏡(TEM)圖Fig.1 TEM images of Au NPs(A) and Au NPs-TMP (B)

2.2 實驗條件的選擇

實驗了4種不同緩沖溶液及其pH值的影響(圖3A)。pH過大或過小時，A648比較小，在pH=3.95的檸檬酸鈉-HCl緩沖溶液中A648最大。實驗選擇檸檬酸鈉-HCl緩沖溶液(pH=3.95)為介質(zhì)。

以30 mg/L和40 mg/L TMP為例，測定其與Au NPs作用不同時間對應(yīng)的A648值(圖3B)。結(jié)果表明，30 min后A648基本為恒定值，考慮到越低濃度的TMP需要越長的作用時間，故實驗選擇反應(yīng)時間為50 min。

圖3 介質(zhì)(A)和反應(yīng)時間(B)對吸光度的影響Fig.3 The effect of medium (A) and reaction time (B) on absorhancea.sodium citrate-HCl;b.sodium citrate-Na2HPO4;c.HAc-NaAc;d.HCl-NaAc.

考察了Au NPs和TMP用量比例對測定的影響。發(fā)現(xiàn)當(dāng)Au NPs和TMP的體積比為2∶1 時，光譜圖形狀較好且A648值較大，考慮到測定所用比色皿適宜容量，實驗選擇2 mL Au NPs與1 mL TMP進(jìn)行實驗。

2.3 干擾實驗

2.4 線性范圍和檢出限

在最優(yōu)條件下，繪制工作曲線。在10～150 mg/L范圍內(nèi)A648與TMP濃度成呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A648=0.0081c+0.3121，相關(guān)系數(shù)為0.9957，檢出限(S/N=3)為3.5 mg/L。

2.5 樣品測定

取甲氧芐啶片劑(特一藥業(yè)集團股份有限公司) 3片，研細(xì)后平均分為4份，以適量冰HAc溶解，加入100 mL超純水，過濾，將濾液定容至500 mL容量瓶中。移取該溶液1.0 mL于5 mL具塞刻度試管中，加入2.0 mL Au NPs溶液及1.0 mL pH=3.95的檸檬酸鈉-HCl緩沖溶液，按照實驗方法進(jìn)行測定，同時進(jìn)行加標(biāo)回收實驗，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定及回收率實驗Table 1 Detection results of TMP in real samples(n=11)

3 結(jié)論

制備得到帶有負(fù)電荷的Au NPs，在酸性條件下，帶正電荷的TMP與Au NPs發(fā)生靜電吸引，致使Au NPs發(fā)生聚集，吸收峰發(fā)生變化。據(jù)此建立了檢測TMP的新方法。