柳燕飛 劉雯雯 郭 蕾 張 藝 高天旸

廣東省第二人民醫(yī)院1.婦科；2.生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東 廣州 510317

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的婦科疾病，發(fā)病率約為10%。子宮內(nèi)膜異位癥患者不孕不育的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約為健康女性的20倍，是引起女性不孕不育的主要原因［1-2］。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜接受胚胎著床的能力，子宮內(nèi)膜只有在月經(jīng)周期的特定短暫時(shí)期具備接受胚胎植入的能力，該時(shí)期稱為“胚胎植入態(tài)”。研究顯示，半乳糖凝集素-3（Gelactin-3）在子宮內(nèi)膜“胚胎植入態(tài)”時(shí)期表達(dá)量顯著增加［3-4］，說明當(dāng)女性體內(nèi)Gelactin-3表達(dá)量增加時(shí)，子宮內(nèi)膜具備接受胚胎植入的能力，女性受孕幾率增加。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以參與新血管的形成，而血管生成在子宮內(nèi)膜異位癥中發(fā)揮重要作用，因此，VEGF可能參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展［5］。腹腔鏡檢查及手術(shù)治療是臨床常見的治療子宮內(nèi)膜異位癥的方式之一，但腹腔鏡治療是否可以提高女性患者子宮內(nèi)膜容受度，目前暫缺乏相關(guān)證據(jù)。本研究通過檢查女性患者手術(shù)前后Gelactin-3和VEGF的表達(dá)水平，分析腹腔鏡治療對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜容受性的療效，為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據(jù)。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2018年9月—2020年8月在我院就診并接受腹腔鏡治療的子宮內(nèi)膜異位癥女性患者，共105例。根據(jù)美國生育學(xué)會(huì)提出的“ASRM修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法”將其分為Ⅰ、Ⅱ期（57例），Ⅲ期（35例），Ⅳ期（13例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）腹腔鏡檢查和病理檢查確定為子宮內(nèi)膜異位癥，并接受腹腔鏡治療的患者；（2）患者年齡23～42歲；（3）夫妻正常性生活且未采取避孕措施1年以上未妊娠；（4）月經(jīng)周期規(guī)律，周期為26～32天；（5）無內(nèi)分泌、免疫和代謝性疾??；（6）手術(shù)前3個(gè)月未接受其他治療。對(duì)照組患者選擇因輸卵管不孕、卵巢良性病變等接受腹腔鏡治療的患者，子宮內(nèi)膜正常，共納入110例。

1.2 樣本收集

（1）血清樣本收集：所有患者在手術(shù)前后抽取外周靜脈血，離心后分離血清，-80℃冰箱保存；（2）子宮內(nèi)膜標(biāo)本采集：分別采集兩組患者手術(shù)前后的子宮內(nèi)膜，避免排卵期對(duì)子宮內(nèi)膜的影響，采集時(shí)間為手術(shù)前后月經(jīng)周期的第19～22天，采集后組織放置于10%中性福爾馬林中固定保存。采集方法：使用子宮內(nèi)膜采集器（北京賽普九洲科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)）采集患者的子宮內(nèi)膜。所有患者取膀胱截石位，暴露陰道和宮頸，將采集器置入患者宮腔底部，推出采集器的外套管，釋放采集環(huán)，將采集器順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)15圈左右，將其退回外套中，并將采集器退出宮腔。

1.3 Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平檢測

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平（1）稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）在樣本孔中加入血清樣本，37℃放置2 h；（3）加入酶結(jié)合物工作液，37℃放置45 min；（4）加入底物，37℃放置15 min，加入終止液終止反應(yīng)；（5）使用酶標(biāo)儀在450 nm波長檢測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中Gelactin-3和VEGF濃度。

1.3.2 免疫組化檢測子宮內(nèi)膜Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平 多聚甲醛固定采集的子宮內(nèi)膜樣本，石蠟包埋后將其分別置于二甲苯、100%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中脫蠟水化。PBS清洗后，滴加封閉液封閉。封閉完成后添加單克隆小鼠抗人Galectin-3或VEGF抗體，4℃過夜。PBS清洗后添加二抗，37℃放置30 min。添加顯色液，觀察切片顏色。當(dāng)切片顏色變成褐色時(shí)，用水洗掉顯色液。蘇木素復(fù)染后用PBS清洗。將切片分別放置于95%乙醇、100%乙醇中脫水，再放置于二甲苯中使其變透明，最后采用中性樹膠封片，顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，計(jì)數(shù)5個(gè)視野中陽性著色細(xì)胞，求取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)與相對(duì)數(shù)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平

子宮內(nèi)膜異位癥患者手術(shù)前Gelactin-3水平顯著低于對(duì)照組，而VEGF表達(dá)則顯著高于對(duì)照組；經(jīng)過手術(shù)治療后，子宮內(nèi)膜異位癥患者Gelactin-3表達(dá)顯著升高，而VEGF則顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組患者手術(shù)治療前后Gelactin-3和VEGF水平均無顯著變化。見表1。

表1 兩組患者手術(shù)前后血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平（±s，pg/mL）

表1 兩組患者手術(shù)前后血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平（±s，pg/mL）

2.2 子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)

與血清中Gelactin-3和VEGF表達(dá)結(jié)果一致。手術(shù)治療可以提高子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜組織的Gelactin-3水平，并降低VEGF水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組患者手術(shù)前后Gelactin-3和VEGF水平均無顯著變化。見表2。

表2 兩組患者手術(shù)前后子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平比較（±s）

表2 兩組患者手術(shù)前后子宮內(nèi)膜組織中Gelactin-3和VEGF表達(dá)水平比較（±s）

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種生育期婦女常見的慢性炎癥性疾病，是女性不孕不育的主要原因之一。其基本病理變化是異位的內(nèi)膜細(xì)胞增生黏附、侵襲和血管生成等，導(dǎo)致周圍纖維組織增生、粘連、形成結(jié)節(jié)或囊腫等［6-8］。子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病原因不明，目前的治療方式無法從根本上治愈，其引發(fā)的疼痛、不孕和性生活異常極大地影響了患者的心理健康和生活質(zhì)量［9］。目前臨床上常見的治療手段是腹腔鏡手術(shù)，通過手術(shù)可以定點(diǎn)治療異位組織，顯著提高患者的妊娠率［10-11］，但腹腔鏡手術(shù)治療目前仍存在較大的爭議，需進(jìn)一步在臨床研究評(píng)估其價(jià)值。本研究旨在探討腹腔鏡治療對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜容受性的治療效果，為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據(jù)。

新血管生成是子宮內(nèi)膜異位發(fā)生的關(guān)鍵過程，而VEGF是參與調(diào)控血管生成最重要的血管生成因子［12］，其主要功能包括促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、刺激新血管生成、提高血管通透性等。目前研究顯示，子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清、腹腔液和子宮內(nèi)膜組織中VEGF的表達(dá)均顯著高于健康婦女，且子宮內(nèi)膜異位癥越嚴(yán)重的患者，VEGF表達(dá)量越高［13-15］。推測VEGF可以促進(jìn)異位病灶血管的生長，為內(nèi)膜異位提供了生長環(huán)境。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和子宮內(nèi)膜組織中的VEGF水平均顯著高于對(duì)照組患者，與其他研究結(jié)果一致［16］，提示VEGF表達(dá)可能可以作為診斷子宮內(nèi)膜異位癥的分子標(biāo)志物之一。子宮內(nèi)膜異位癥患者接受腹腔鏡手術(shù)治療后，血清和子宮內(nèi)膜組織中的VEGF水平均顯著降低，說明腹腔鏡手術(shù)可以緩解子宮內(nèi)膜異位癥患者的病情，改善其不孕癥狀。

Galectin-3是一種結(jié)合蛋白，可以參與細(xì)胞黏附、凋亡、分化、遷移等多種生理病理過程［17］。有研究表明，Galectin-3的表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥之間具有一定的相關(guān)性［18-19］。也有文獻(xiàn)報(bào)道，Galectin-3在子宮內(nèi)膜容受的植入窗期表達(dá)量顯著增加，在異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)顯著低于正常子宮內(nèi)膜，其表達(dá)量與不孕不育可能存在一定的相關(guān)性［20］。本研究結(jié)果顯示，Galectin-3在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組患者，接受腹腔鏡手術(shù)治療后，其表達(dá)量升高，說明Galectin-3可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展過程。

綜上所述，VEGF和Galectin-3可能參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展，而腹腔鏡手術(shù)可以顯著降低VEGF的表達(dá)，并增加Galectin-3表達(dá)，可以改善子宮內(nèi)膜異位癥患者的病情，增加其妊娠率，該結(jié)果為臨床上進(jìn)一步使用腹腔鏡治療提供了理論依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突