張永芝，王 旭，李慧明，于翰林，李長(zhǎng)虹

(青島瀚生生物科技股份有限公司，山東青島 266000)

小麥赤霉病又稱(chēng)麥穗枯、紅麥頭，是由多種鐮刀菌侵染引起的、能寄生在100多種植物殘?bào)w上的、典型的氣候性病害，是全球小麥的主要病害之一，也是小麥穗期“三病三蟲(chóng)”中較為嚴(yán)重的病害之一[1]。小麥整個(gè)生育期均能被其侵染，其中危害最嚴(yán)重的時(shí)期為抽穗和揚(yáng)花期，如果遇到適宜的溫度和濕度，其很容易引起病害流行[2]。小麥主要分布在濕潤(rùn)和半濕潤(rùn)地區(qū)，近年來(lái)由于氣候變暖和耕作制度的改變，出現(xiàn)了小麥赤霉病發(fā)生的區(qū)域逐漸擴(kuò)大、流行頻率也不斷升高、灌漿期發(fā)病情況不斷加重、危害日益嚴(yán)重等特點(diǎn)[3-4]。全球來(lái)說(shuō)，我國(guó)小麥產(chǎn)量最高，但小麥赤霉病的發(fā)病率也很高。我國(guó)小麥赤霉病發(fā)生區(qū)域由長(zhǎng)江中下游向黃淮海和北方麥區(qū)蔓延，造成很多小麥絕產(chǎn)絕收，不但嚴(yán)重影響小麥產(chǎn)量，而且降低了小麥的品質(zhì)，使我國(guó)小麥糧食安全受到嚴(yán)重威脅[5]。小麥赤霉病病原菌侵染小麥后可產(chǎn)生多種引起人畜中毒的毒素物質(zhì)，其中污染水平最高的是一種倍半萜類(lèi)化合物脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)[6]。DON不僅具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能夠破壞動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，而且還具有胃腸毒性，能使人和動(dòng)物出現(xiàn)食欲下降和嘔吐的癥狀，所以又叫嘔吐毒素，直接對(duì)人畜健康和生命安全構(gòu)成威脅。

麥類(lèi)赤霉病除了為害小麥外，還能對(duì)大麥、燕麥、水稻等禾本科植物，以及棉花、甘薯、紅麻等作物造成侵染。因?yàn)槿狈τ行У目剐云贩N，小麥赤霉病的防治仍以施用殺菌劑為主。目前市場(chǎng)上防治小麥赤霉病的藥劑極多，但良莠不齊[7]。由于長(zhǎng)期使用單一殺菌劑，使病原菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性?；诖?，本研究采用室內(nèi)菌絲生長(zhǎng)速率法和田間藥效試驗(yàn)相結(jié)合的方法，開(kāi)展了6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病病原菌的毒力和田間藥效評(píng)價(jià)，以期為小麥赤霉病的有效防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

供試病原菌為小麥赤霉病病原菌[Fusarium graminearum Schw]，采自江蘇省宿遷市泗洪縣上塘鎮(zhèn)麥田發(fā)病的小麥穗。取患病的新鮮組織，用剪刀或解剖針在病健交界處切取數(shù)塊小塊病組織。將病組織放入70%酒精中浸3～5 s后，移入0.1%的升汞水溶液中處理3 min，用無(wú)菌水連續(xù)漂洗3次，移至平板培養(yǎng)基上，每皿4～6塊，在25 ℃左右恒溫箱中培養(yǎng)。將菌種接種到適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長(zhǎng)后，棉塞部分用油紙包好，移至2～8 ℃的冰箱中保存，2～4個(gè)月移種1次。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL，自然pH。用于小麥赤霉病菌的分離、保存以及室內(nèi)藥劑試驗(yàn)。

1.1.3 供試藥劑

25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME(青島瀚生生物科技股份有限公司)；25%氰烯菌酯SC(江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司)；45%戊唑醇·咪鮮胺SC(江蘇克勝集團(tuán)股份有限公司)；430 g/L戊唑醇SC(拜耳作物科學(xué)(中國(guó))有限公司)；450 g/L咪鮮胺EW(河北省農(nóng)藥化工有限公司)；25%吡唑醚菌酯SC(濟(jì)南仕邦農(nóng)化有限公司)。

1.2 室內(nèi)毒力測(cè)定

1.2.1 菌絲生長(zhǎng)速率法

采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定[8]。每種藥劑設(shè)定7個(gè)濃度(表1)，每處理3次重復(fù)，設(shè)不加藥為對(duì)照。將培養(yǎng)好的病原菌在無(wú)菌條件下用0.65 mm打孔器沿菌落邊緣打取菌餅，再將菌餅輕放于制備好的含藥平板上，置于溫度為25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對(duì)照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng)皿直徑的約2/3處時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量每個(gè)處理的菌落直徑，計(jì)算出其菌絲生長(zhǎng)抑制率。

表1 6種殺菌劑培養(yǎng)基的濃度梯度

1.2.2 數(shù)據(jù)處理與計(jì)算

用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算回歸方程及藥劑的EC50。

通過(guò)公式⑴和公式⑵，計(jì)算供試藥劑對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制率，然后將其轉(zhuǎn)換為機(jī)率值Y，求出機(jī)率值(Y)與濃度對(duì)數(shù)(x)的回歸方程Y=a+bx，計(jì)算各供試藥劑對(duì)小麥赤霉病的EC50和相關(guān)系數(shù)R。

式中：D為菌落增長(zhǎng)直徑(cm)；D1為菌落直徑(cm)；D2為菌餅直徑(cm)；I為菌絲生長(zhǎng)抑制率(%)；D0為藥劑處理菌落增長(zhǎng)抑制率(%)；Dt為空白對(duì)照菌落增長(zhǎng)抑制率(%)。

1.3 田間藥效試驗(yàn)

1.3.1 試驗(yàn)處理

選取在江蘇省宿遷市泗洪縣上塘鎮(zhèn)麥田進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)地栽培管理?xiàng)l件均勻一致，小麥品種為濟(jì)麥20號(hào)。試驗(yàn)設(shè)7個(gè)處理，分別為⑴ 25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME 540 mL/hm2；⑵ 25%氰烯菌酯SC 1 500 mL/hm2；⑶ 45%戊唑醇·咪鮮胺EW 337.5 mL/hm2；⑷ 430 g/L戊唑醇SC 300 mL/hm2；⑸ 450 g/L咪鮮胺EW 450 mL/hm2；⑹ 25%吡唑醚菌酯SC 502.5 mL/hm2；⑺ 空白對(duì)照(CK)。采用隨機(jī)區(qū)組排列，每處理重復(fù)4次，共28個(gè)小區(qū)，小區(qū)面積為36 m2。

1.3.2 施藥方法

采用工農(nóng)-16型手動(dòng)噴霧器進(jìn)行常規(guī)均勻噴霧，共施藥2次，第1次施藥時(shí)間為4月中旬小麥揚(yáng)花期，間隔10 d第2次施藥，用藥量相同。對(duì)葉片正反面均勻噴霧施藥，以葉片不滴水為宜。施藥內(nèi)24 h未降雨，試驗(yàn)期間無(wú)特殊惡劣天氣，田間常規(guī)化管理。

1.3.3 藥效調(diào)查及計(jì)算方法

試驗(yàn)按《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》GB/T 17980.30—2000進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查2次，時(shí)間為第2次施藥后7 d和14 d；調(diào)查方法為每小區(qū)隨機(jī)取5點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)調(diào)查100株，調(diào)查感病穗面積占整個(gè)穗面積之比；根據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，記錄每株各個(gè)分級(jí)的病穗數(shù)，并計(jì)算病穗率、防效和病情指數(shù)。在試驗(yàn)期間要連續(xù)觀察小麥的生長(zhǎng)情況，藥劑處理對(duì)小麥的葉片和植株長(zhǎng)勢(shì)等是否產(chǎn)生藥害。

藥效計(jì)算公式[9]如下：

小麥赤霉病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：全穗無(wú)?。?級(jí)：感病穗面積/全穗面積為1/4以下；3級(jí)：感病穗面積/全穗面積為1/4～1/2；5級(jí)：感病穗面積/全穗面積為1/2～3/4；7級(jí)：感病穗面積/全穗面積為3/4以上。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)與分析

采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)Duncan’s新復(fù)極差法，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和比較。比較在5%水平下的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力

6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果如表2?？梢?jiàn)，在6種供試殺菌劑中，25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME對(duì)小麥赤霉病病原菌的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.32 μg/mL；其次是45%戊唑醇·咪鮮胺EW，其EC50為0.47 μg/mL，430 g/L戊唑醇SC和25%氰烯菌酯SC抑制作用相當(dāng)，其EC50分別為0.55 μg/mL、0.58 μg/mL；25%吡唑醚菌酯SC的抑制作用最弱。

表2 6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病室內(nèi)毒力測(cè)定

2.2 田間藥效

在室內(nèi)篩選基礎(chǔ)上，開(kāi)展了6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病的田間小區(qū)藥效試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，在試驗(yàn)劑量下，6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病具有良好的防治效果，且不同殺菌劑之間的防效差異顯著，其中25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME的防效最高，顯著高于其他5種殺菌劑，其藥后7 d和14 d的病指防效分別為82.63%和81.70%；其次是45%戊唑醇·咪鮮胺EW，其病指防效分別為78.44%、75.26 %。

表3 6種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病的田間防治效果

藥后7 d時(shí)，25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME的病指防效最優(yōu)，為82.63%，其次是45%戊唑醇·咪鮮胺EW、25%氰烯菌酯SC，其病指防效分別為78.44%和75.45%；而430 g/L戊唑醇SC、450 g/L咪鮮胺EW、25%吡唑醚菌酯SC防治效果稍差，病指防效 在60%以上，且株防效比病指防效高，感病的麥穗中，感病嚴(yán)重的稍多。其他3種藥劑株防效和病指防效結(jié)果和趨勢(shì)基本一致。

藥后14 d時(shí)，25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME的病指防效為81.70%，顯著優(yōu)于其他藥劑；45%戊唑醇·咪鮮胺EW、25%氰烯菌酯SC的病指防效明顯，在73.71%以上；430 g/L戊唑醇SC、45 g/L咪鮮胺EW、25%吡唑醚菌酯SC的防治效果稍差。其中，25%吡唑醚菌酯SC病指防效下降明顯，株防效和病指防效結(jié)果和趨勢(shì)基本一致，只有430 g/L戊唑醇SC株防效較病指防效高，感病的麥穗中，感病嚴(yán)重的稍多。

在整個(gè)田間試驗(yàn)期間，未觀察到供試殺菌劑對(duì)小麥的葉片和植株長(zhǎng)勢(shì)等方面的不良影響，表現(xiàn)出較好的作物安全性。

3 小結(jié)與討論

經(jīng)室內(nèi)毒力測(cè)定和田間小區(qū)藥效試驗(yàn)證實(shí)，6種供試殺菌劑對(duì)小麥赤霉病均表現(xiàn)出較好的防治效果。其中25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME對(duì)小麥赤霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最顯著，其EC50為0.32 μg/mL，且在田間推薦劑量下，藥后7 d和14 d的防治效果顯著高于其他5種殺菌劑，分別為82.63%和81.70%。建議25%吡唑醚菌酯·戊唑醇ME的推薦用量在450～ 630 mL/hm2，在小麥赤霉病發(fā)病初期使用，施藥2次，2次施藥間隔10 d左右，并與其他作用機(jī)制不同的殺菌劑輪換使用以減緩赤霉病病菌抗藥性的產(chǎn)生。