初 暉 張峰瑞 于慶港 蔡鋒隆 秦順義 李留安 楊 華 張建斌*

(1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.天津市廣源畜禽養(yǎng)殖有限公司，天津 301824)

L-肌肽(L-carnosine)被發(fā)現(xiàn)于1900年，其由β-丙氨酸和L-組氨酸組成，是一種天然存在、能夠通過內(nèi)源性肌肽酶合成的二肽類物質(zhì)[1]，存在于脊椎動(dòng)物的骨骼肌、大腦和肝臟中。L-肌肽已被證明具有多種生理功能，如抗氧化和抗凋亡作用[2]、抗炎和抗纖維化作用[3]、抗糖基化作用[4]以及抗腫瘤作用[5]等，尤其是其具有的抗腫瘤作用，使其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注[6]。目前認(rèn)為，L-肌肽是一種可以抗氧化、清除自由基、維持機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、抑制細(xì)胞增殖以及調(diào)控細(xì)胞免疫功能的藥物，可用于肝臟保護(hù)、延緩衰老、糖尿病傷口愈合以及在常規(guī)實(shí)體瘤治療中作為膳食補(bǔ)充劑提供輔助支持等[7]。

鑒于L-肌肽的生理功能，目前對(duì)于L-肌肽的研究已從醫(yī)學(xué)疾病領(lǐng)域向其他領(lǐng)域擴(kuò)展，其具有抗氧化、抗糖基化、維持pH穩(wěn)定等功能，可以調(diào)節(jié)葡萄糖和脂類代謝，維持機(jī)體健康，這都使得L-肌肽作為一種潛在的飼料添加劑，受到眾多畜牧工作者的關(guān)注。Cong等[7]研究表明，在雄性肉仔雞飼糧中添加L-肌肽，可以提高肉雞的生長性能，改善肉質(zhì)，提升機(jī)體抗氧化能力，降低肌纖維直徑和增加肌纖維密度。Zhang等[8]研究表明，飼糧添加L-肌肽可以提高黃羽肉雞的生長性能和抗氧化能力。還有研究表明，L-肌肽作為飼料添加劑，可以提高肉雞和豬的生長性能和肉品質(zhì)[9-11]。不過，關(guān)于L-肌肽在蛋雞上應(yīng)用效果的報(bào)道較少，尤其是剛開產(chǎn)蛋雞報(bào)道更少。蛋雞在開產(chǎn)前后面臨著生理、飼糧和環(huán)境等方面的應(yīng)激，這一階段的順利過渡對(duì)于蛋雞高峰期的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)具有很重要的作用。因此，本研究選取L-肌肽作為飼料添加劑，探究其對(duì)開產(chǎn)期蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、養(yǎng)分表觀消化率和血清生化指標(biāo)的影響，以期為L-肌肽在初產(chǎn)蛋雞飼糧中的合理利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用L-肌肽購自陜西某天然制品有限公司，純度99%，為白色粉末。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將240只19周齡健康海蘭褐蛋雞隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只蛋雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加300、600和900 mg/kgL-肌肽的飼糧。試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期42 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧和飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧參考NRC(1994)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)在天津農(nóng)學(xué)院西校區(qū)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)基地進(jìn)行，預(yù)試期間飼喂基礎(chǔ)飼糧。試驗(yàn)期間蛋雞自由采食和飲水，每天維持16 h光照(自然+人工)，每天定時(shí)飼喂(08：30和16：00)，其他常規(guī)飼養(yǎng)管理完全相同。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 樣品采集和指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 產(chǎn)蛋性能

每天16：00開始收集雞蛋，以重復(fù)為單位統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋數(shù)、平均蛋重和耗料量，計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均日采食量(ADFI)和料蛋比(F/E)。

平均日采食量(g/d)=統(tǒng)計(jì)期內(nèi)耗料量/
(試驗(yàn)天數(shù)×統(tǒng)計(jì)期內(nèi)蛋雞數(shù))；平均蛋重(g)=統(tǒng)計(jì)期內(nèi)產(chǎn)蛋重/
統(tǒng)計(jì)期內(nèi)產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)；產(chǎn)蛋率(%)=100×統(tǒng)計(jì)期內(nèi)產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)/
統(tǒng)計(jì)期內(nèi)蛋雞數(shù)；料蛋比=統(tǒng)計(jì)期內(nèi)耗料量/統(tǒng)計(jì)期內(nèi)產(chǎn)蛋重。

1.4.2 蛋品質(zhì)

試驗(yàn)結(jié)束前3天，每天每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3枚雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)檢測(cè)。用游標(biāo)卡尺(哈爾濱量具刃具集團(tuán)有限責(zé)任公司)檢測(cè)蛋形指數(shù)(縱徑/橫徑)，用蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀(日本FHK公司)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度，用羅氏比色扇(日本FHK公司)測(cè)定蛋黃顏色。蛋黃系數(shù)為蛋黃高度/蛋黃直徑。用蛋白高度測(cè)定儀(日本FHK公司)測(cè)定蛋白高度和哈氏單位。

哈氏單位=100×lg(H-1.7W0.37+7.57)。

其中：H為蛋白高度(mm);W為雞蛋重量(g)。

1.4.3 養(yǎng)分表觀消化率

養(yǎng)分表觀消化率的測(cè)定采用鹽酸不溶灰分做內(nèi)源指示劑的方法。在正試期第26、27和28天上午喂食之后，收集2 h內(nèi)每組蛋雞的新鮮糞便，收集之后立即放入-20 ℃冰箱中保存，連續(xù)收集3 d，每組混勻65 ℃烘干粉碎后，進(jìn)行干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、鈣和磷表觀消化率的測(cè)定。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

正試期的第42天從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只雞，空腹12 h后心臟采血2 mL，然后于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱孵育15 min，4 000 r/min離心10 min，取上清置于-80 ℃低溫冰箱內(nèi)保存。采用全自動(dòng)生化分析儀(UV-VIS METROLAB S.A.，GLAMOUR 3000)測(cè)定以下指標(biāo)：血清總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化氫酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測(cè)定；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)活性以及尿素(UREA)、總蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TCHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量采用中生北控生物科技股份有限公司提供的試劑盒測(cè)定；血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)含量采用英科新創(chuàng)(廈門)科技股份有限公司提供的試劑盒測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 L-肌肽對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組蛋雞平均日采食量和平均蛋重均降低，產(chǎn)蛋率均升高，但差異均不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，900 mg/kgL-肌肽添加組料蛋比顯著降低(P<0.05)；300和600 mg/kgL-肌肽添加組料重比降低，但差異不顯著(P>0.05)。各組產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)。結(jié)果表明，飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能無顯著影響。

表2 L-肌肽對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

2.2 L-肌肽對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組蛋黃顏色均顯著提高(P<0.05)；900 mg/kgL-肌肽添加組蛋形指數(shù)和蛋殼強(qiáng)度顯著提高(P<0.05)，300和600 mg/kgL-肌肽添加組蛋形指數(shù)無顯著差異(P>0.05)，300 mg/kgL-肌肽添加組蛋殼強(qiáng)度顯著提高(P<0.05)；飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋黃系數(shù)、蛋黃比例、蛋殼厚度以及哈氏單位均無顯著影響(P>0.05)。

2.3 L-肌肽對(duì)蛋雞養(yǎng)分表觀消化率的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋雞粗蛋白質(zhì)、粗灰分、鈣、磷和粗纖維的表觀消化率均無顯著影響(P>0.05)。

2.4 L-肌肽對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，300和600 mg/kgL-肌肽添加組蛋雞血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G含量顯著提高(P<0.05)，900 mg/kgL-肌肽添加組差異不顯著(P>0.05)；飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶活性以及總蛋白、尿素、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和免疫球蛋白M含量均無顯著影響(P>0.05)。

表3 L-肌肽對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 L-肌肽對(duì)蛋雞養(yǎng)分表觀消化率的影響

表5 L-肌肽對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.5 L-肌肽對(duì)蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組蛋雞血清總抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性顯著提高(P<0.05)，且試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)組蛋雞血清谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著提高(P<0.05)，且900 mg/kgL-肌肽添加組顯著高于300和600 mg/kgL-肌肽添加組(P>0.05)；900 mg/kgL-肌肽添加組蛋雞血清丙二醛含量顯著降低(P<0.05)，且顯著低于300和600 mg/kgL-肌肽添加組(P<0.05)。

表6 L-肌肽對(duì)蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 L-肌肽對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

L-肌肽主要存在于動(dòng)物的骨骼肌中，由L-組氨酸和β-丙氨酸組成，是機(jī)體內(nèi)存在的天然抗氧化劑，可以直接清除氧自由基[12]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加L-肌肽對(duì)蛋雞平均日采食量和平均蛋重?zé)o顯著影響，但添加900 mg/kgL-肌肽可顯著降低料蛋比。Zang等[8]研究表明，在黃羽肉雞飼糧中添加400 mg/kgL-肌肽，能夠降低平均日采食量，提高平均日增重，并顯著降低料重比。Bao等[13]研究表明，在60～110 kg“長×大”豬飼糧中添加0.1%的L-肌肽，能夠顯著提高豬的末重、平均日采食量和平均日增重。Cong等[14]研究表明，在肉雞飼糧中添加L-肌肽，可以顯著降低料重比。本研究結(jié)果表明，飼糧添加L-肌肽能夠降低蛋雞平均日采食量，提高產(chǎn)蛋率，顯著降低料蛋比，從而改善蛋雞的產(chǎn)蛋性能。

3.2 L-肌肽對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)和養(yǎng)分表觀消化率的影響

雞蛋品質(zhì)受到蛋雞品種、飼糧因素和產(chǎn)蛋周期等因素的影響[15]。蛋形指數(shù)直接影響受精率和雞蛋的運(yùn)輸[16-17]；蛋黃顏色是由色素沉積到蛋黃中形成的，是消費(fèi)者衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)之一[18]；蛋黃系數(shù)[19]、哈氏單位[20-21]是表示雞蛋新鮮程度的指標(biāo)；蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度是表示蛋雞蛋殼質(zhì)量的指標(biāo)之一，影響雞蛋破損和運(yùn)輸[22]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加L-肌肽顯著提高了蛋黃顏色和蛋殼強(qiáng)度，其中添加900 mg/kgL-肌肽顯著提高了蛋形指數(shù)。

飼糧中養(yǎng)分表觀消化率的高低與營養(yǎng)價(jià)值密切相關(guān)，同時(shí)也影響到蛋雞的生產(chǎn)性能，是作為一個(gè)衡量蛋雞對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的重要指標(biāo)[23-24]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋雞粗蛋白質(zhì)、粗灰分、鈣、磷和粗纖維的表觀消化率均無顯著影響。飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)的消化代謝對(duì)于動(dòng)物生長、生產(chǎn)及繁殖有著重要的意義。家禽通過胃、腸道的消化吸收功能，將飼糧中的營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為滿足自身生理需求和生產(chǎn)需要的物質(zhì)。處于同一生理狀態(tài)的蛋雞，養(yǎng)分表觀消化率越高，說明營養(yǎng)物質(zhì)被機(jī)體利用的越多，從而有利于維持動(dòng)物機(jī)體需要，并在此基礎(chǔ)上提高生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加900 mg/kgL-肌肽在一定程度上提高了營養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率，從而顯著降低了料重比，提高了蛋雞的生產(chǎn)性能。

3.3 L-肌肽對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性高低可間接反映機(jī)體的肝功能及健康水平[25]。堿性磷酸酶是診斷肝臟膽道系統(tǒng)及腎臟時(shí)常用的指標(biāo)。有報(bào)道認(rèn)為，L-肌肽可以通過抗氧化和抑制致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，保護(hù)肝臟不受損傷。王曉艷等[26]研究表明，L-肌肽對(duì)蛋雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性影響均不顯著，這與本試驗(yàn)中結(jié)果一致，表明飼糧添加L-肌肽對(duì)蛋雞的肝臟功能無損傷作用。

血清尿素氮含量高低在一定程度上可以判斷機(jī)體腎功能的好壞，血清總蛋白含量可間接了解機(jī)體的營養(yǎng)狀況，血清甘油三酯和總膽固醇是反映機(jī)體脂肪沉積狀況的重要指標(biāo)，高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇是膽固醇代謝的2個(gè)重要指標(biāo)。本研究表明，飼糧添加L-肌肽對(duì)上述指標(biāo)均無顯著影響。有研究表明，L-肌肽可降低小鼠血漿中甘油三酯和總膽固醇含量，表明L-肌肽可以顯著抑制脂肪酸合成酶活性[27]。本試驗(yàn)中，飼糧添加L-肌肽降低了血清中甘油三酯和總膽固醇的含量，表明飼糧添加L-肌肽可以在一定程度上改善脂肪代謝，降低血清中總膽固醇的含量。有研究表明，L-肌肽可以降低血清中總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量，提高血清中高密度脂蛋白膽固醇含量，表明L-肌肽可以增強(qiáng)機(jī)體對(duì)脂肪的利用，改善脂類代謝[28-29]。

免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M是機(jī)體內(nèi)重要的非特異免疫因子。本試驗(yàn)中，飼糧添加L-肌肽均可以提高蛋雞血清中免疫球蛋白的含量，其中，添加300和600 mg/kgL-肌肽可以顯著提高血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G含量，說明L-肌肽可以顯著提高蛋雞機(jī)體的免疫機(jī)能。Fadda等[30]研究表明，在大鼠飼糧中添加200 mg/kgL-肌肽可以顯著提高血清免疫球蛋白G含量。本試驗(yàn)與上述結(jié)果相比，雖然添加劑量存在差異，但均表明L-肌肽可以提高機(jī)體的免疫功能。

3.4 L-肌肽對(duì)蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

總抗氧化能力是一個(gè)全面反映組織抗氧化能力的指標(biāo)[31]；谷胱甘肽過氧化物酶是機(jī)體中重要的抗氧化酶，超氧化物歧化酶能特異地清除超氧陰離子，與谷胱甘肽過氧化物酶協(xié)同作用減少活性氧的產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力[32]；丙二醛是生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，其含量的高低可反映組織細(xì)胞受自由基損傷的程度[31]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加L-肌肽能顯著提高蛋雞血清總抗氧化能力以及谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性，且添加900 mg/kgL-肌肽可顯著降低血清丙二醛含量。L-肌肽作為一種重要的抗氧化劑，可以直接減少肉仔雞肌肉的氧化應(yīng)激[9]，同時(shí)激活抗氧化系統(tǒng)[33]。Ma等[11]研究表明，在育肥豬飼糧中添加L-肌肽可以提高肌肉中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的基因表達(dá)量。Liu等[26]研究表明，在大鼠飼糧中添加L-肌肽可以通過提高機(jī)體抗氧化能力，從而改善由酒精導(dǎo)致的慢性肝損傷。還有研究表明，L-肌肽可顯著提高肉雞血清的總抗氧化能力，提高肉雞血清谷胱甘肽過氧化物酶活性，降低血清丙二醛含量，且L-肌肽能與由丙二醛產(chǎn)生的羰基反應(yīng)，起到保護(hù)細(xì)胞的作用[34]。

雞的產(chǎn)蛋受神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)控。母雞在產(chǎn)蛋初期，生理變化較大，除了飼養(yǎng)管理、飼養(yǎng)環(huán)境及飼養(yǎng)方式改變?cè)斐傻膽?yīng)激外，還有來自于自身的生理刺激，這導(dǎo)致機(jī)體對(duì)卵巢和輸卵管功能調(diào)節(jié)能力較差、激素分泌不穩(wěn)定等，因此這一階段的順利過渡及雞體的健康對(duì)于蛋雞高峰期的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)具有很重要的意義。而L-肌肽具有緩解應(yīng)激以及抗氧化功能，可通過提高蛋雞血清總抗氧化能力及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性，降低血清丙二醛含量，起到保護(hù)細(xì)胞的作用，提高機(jī)體的抗氧化功能；同時(shí)，L-肌肽可以增強(qiáng)機(jī)體對(duì)脂肪的利用，改善脂類代謝，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，從而改善初產(chǎn)蛋雞的健康水平，提高生產(chǎn)性能。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加L-肌肽可以降低蛋雞料蛋比，提高雞蛋蛋形指數(shù)、蛋黃顏色和蛋殼強(qiáng)度，提高血清免疫球蛋白含量和抗氧化能力，且以900 mg/kg添加水平效果較佳。