陳相峰，胡利華，羅 奎，張 敏，冀德偉

(浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護重點實驗室，浙江 溫州 325005)

刀額新對蝦亦稱基圍蝦、泥蝦，隸屬于節(jié)肢動物門、甲殼綱、十足目、對蝦科、新對蝦屬，主要分布在中國東南沿海，是新對蝦屬中個體較大的品種。近年來的大量海底拖網(wǎng)捕撈作業(yè)對刀額新對蝦的種質(zhì)資源造成了一定的破壞，刀額新對蝦的資源量大幅降低。因此，有必要對刀額新對蝦進行種質(zhì)保護。

溫度是影響甲殼動物生長與繁殖的重要因素。趙玉超等(2019)研究顯示，溫度對凡納濱對蝦受精卵的孵化率有顯著的影響，隨溫度的上升，平均孵化率呈階梯式上升；而超出孵化適宜溫度，會導致胚胎發(fā)育異常甚至死亡(張彬等，2014)。本文以海區(qū)捕撈的自然成熟、性腺飽滿的刀額新對蝦雌蝦所產(chǎn)的受精卵為實驗材料，研究不同溫度下刀額新對蝦胚胎及幼體發(fā)育情況，為刀額新對蝦的人工繁育提供參考，以減少刀額新對蝦的海捕需求，對刀額新對蝦的種質(zhì)資源進行保護。

一、材料與方法

1.實驗材料

親本取用從廣東饒平外海區(qū)捕撈的自然成熟、卵巢發(fā)育至4期左右的刀額新對蝦雌蝦，平均規(guī)格(15.0±1.0)克/尾，通過親蝦袋活水充氧運輸?shù)秸憬『Ｑ笏a(chǎn)養(yǎng)殖研究所清江基地暫養(yǎng)。

卵巢發(fā)育期根據(jù)性腺發(fā)育進行分期：l期(01)的GSI 值為0.43±O.02，此時卵巢呈透明細線狀；2 期(02)的GSI 值為0.89±0.02，卵巢呈白濁色細帶狀；3 期(03)的GSI 值為2.45±0.33，卵巢體積繼續(xù)增大，呈白色；4 期(04)的GSI 值為6.30±0.31，卵巢體積明顯增大，呈淡黃色；5期(05)的GSI值為8.95±1.75，卵巢體積達到最大，呈灰綠色(賈錫偉等，2011)。

親蝦暫養(yǎng)：將親蝦放入水泥池中，養(yǎng)殖密度為8 尾/米2。池水為鹽度23 的自然海水經(jīng)過沉淀、沙濾后用濃縮機濃縮調(diào)整到所需鹽度28，再用雙層濾水棉袋過濾入池，然后用消毒劑消毒，曝氣36 小時后潑灑10 毫克/升EDTA 溶液，絡(luò)合水中重金屬離子，溫度為(30±0.5)℃。

受精卵的獲得：從親蝦池中挑選性腺發(fā)育至5 期的雌蝦，將其放入200 升聚乙烯桶內(nèi)，微充氣，產(chǎn)卵后移走雌蝦。

幼體的獲得及培育：對在聚乙烯桶內(nèi)的受精卵繼續(xù)培養(yǎng)，到無節(jié)幼體期后進行燈誘收集，用水體比例法定量放入其他200升聚乙烯桶內(nèi)，充氣養(yǎng)殖。所有養(yǎng)殖桶的養(yǎng)殖條件除溫度外均相同，從Z1(溞蝦1 期)開始喂食金藻，從M1(糠蝦1 期)開始喂食配合飼料，從M2開始用輪蟲(蛋羹)和配合飼料輪換喂食，日換水1/4，餌料量均為適當過量。

用水體比例法進行計數(shù)：將收集的受精卵放入裝有5升水體的水桶中，用500毫升的玻璃燒杯取樣，每個桶取兩次計數(shù)，再取平均值。

2.實驗設(shè)計

(1)不同溫度下受精卵孵化實驗。設(shè)置4 個溫度梯度(24、27、30、33℃)，同時設(shè)置3 個平行，共12 個實驗組。整個實驗都在控溫系統(tǒng)中進行，溫度誤差在±0.5℃，鹽度均為28。對移走產(chǎn)卵后雌蝦的養(yǎng)殖桶，每過1 小時用攪卵棒輕輕攪拌1 次，防止受精卵沉底和結(jié)塊。從第6 小時開始觀察受精卵孵化情況，每0.5小時計數(shù)1次，每次取50粒受精卵，記錄各個實驗組的孵化時間。

(2)不同水溫下幼體發(fā)育實驗。設(shè)置4 個溫度梯度(24、27、30、33℃)，同時設(shè)置3個平行，共12 個實驗組。整個實驗都在控溫系統(tǒng)中進行，溫度誤差在±0.5℃，鹽度均為28。每個實驗組放5 000 尾無節(jié)幼體于200 升聚乙烯桶內(nèi)，充氣培育。從糠蝦期開始觀察記錄幼體的發(fā)育情況。

用水體比例法進行計數(shù)：用500毫升的玻璃燒杯從水體充氣“鼓沸”處取樣，每個桶取兩次計數(shù)，取平均值。

3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

(1)數(shù)據(jù)處理。初孵時間(h0)為受精卵從胚胎發(fā)育開始到無節(jié)幼體(N)破膜而出所需最短時間。幼體集中孵化時間(h)為受精卵孵化60%～90%的平均用時。幼體生長時間為從N開始到60%～90%的幼體達仔蝦(P)的時間。

幼體孵化率(%)＝N/總卵數(shù)×100

幼體存活率(%)＝P/N×100

(2)統(tǒng)計分析。實驗結(jié)果數(shù)據(jù)均采用“平均值±標準差”表示，借助SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，利用單因子方差分析(one-way ANOVA)比較不同處理間的差異，利用LSD 法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

二、結(jié)果

1.溫度對胚胎發(fā)育的影響

實驗結(jié)果表明，在實驗溫度范圍內(nèi)溫度影響平均孵化率，不同溫度下平均孵化率呈峰值變化。24～33℃條件下，隨溫度的上升，平均孵化率先上升、后下降；30℃時平均孵化率明顯高于24℃(P＜0.05)；27、33℃時平均孵化率雖然比24℃高，但差別不明顯(P＞0.05)。刀額新對蝦平均孵化率隨溫度的升高而升高，在超出一定溫度后下降，在30℃時平均孵化率最高，為91.7%。刀額新對蝦受精卵的孵化時間，24℃和27℃時明顯長于30、33℃(P＜0.05)；30℃與33℃時的孵化時間相當，無顯著差異(P＞0.05)。在實驗范圍內(nèi)，隨溫度的升高所需孵化時間縮短，孵化率先升高、后降低。

2.溫度對刀額新對蝦幼體發(fā)育的影響

實驗結(jié)果表明，24℃時與27、30、33℃時刀額新對蝦幼體發(fā)育時間相比顯著延長(P＜0.05)，存活率明顯降低(P＜0.05)。由此看出，24℃及以下溫度對刀額新對蝦幼體的發(fā)育有較大的影響，不適合幼體培育；27、30、33℃時刀額新對蝦幼體發(fā)育時間差別不明顯(P＞0.05)；幼體存活率在33℃時明顯低于27℃和30℃(P＜0.05)而高于24℃(P＜0.05)，雖然30℃時的存活率高于27℃，但差別不明顯(P＞0.05)。這表明實驗中刀額新對蝦幼體適宜的培育溫度為27～30℃，而最適溫度應(yīng)為30℃，刀額新對蝦的平均存活率為81.0%，幼體平均發(fā)育時間為7.7天。

三、討論

1.刀額新對蝦胚胎的發(fā)育

溫度是影響刀額新對蝦胚胎和幼體發(fā)育的重要因素。刀額新對蝦受精卵在不同溫度下，所需的孵化時間不同，孵化率也不同。30℃時刀額新對蝦受精卵的孵化率明顯高于24℃時(P＜0.05)，而24℃時的孵化率雖然低于27、33℃，但卻沒有顯著性差異(P＞0.05)，這說明在30℃左右，刀額新對蝦受精卵的孵化率達到了最高。溫度影響孵化率，在一定范圍內(nèi)升高溫度可以提高孵化率，這與薛素燕等(2012)的研究結(jié)果相似。但溫度過高，則會導致胚胎發(fā)育異常，孵化率降低(林偉雄等，1991)。

刀額新對蝦受精卵的孵化時間在24℃和27℃時與30、33℃有顯著性差異(P＜0.05)，前兩者孵化時間顯著長于后兩者；30℃和33℃之間孵化時間相當，無顯著性差異(P＞0.05)。這說明在一定溫度范圍內(nèi)，升高溫度會縮短胚胎發(fā)育時間。實驗結(jié)果表明適當提高孵化溫度，有利于受精卵的孵化。刀額新對蝦受精卵的初孵時間最短在30～33℃，結(jié)合溫度對刀額新對蝦孵化率和孵化時間的影響，可得出理想的孵化水溫是30℃左右，這應(yīng)該與相關(guān)胚胎發(fā)育酶的活力有關(guān)，適宜的溫度有助于提高相關(guān)胚胎發(fā)育酶的活力，而過高或者較低的溫度則會降低相關(guān)胚胎發(fā)育酶活力(楊世平等，2014)，導致孵化率降低，孵化時間變長。在本次實驗中，溫度為30℃時，刀額新對蝦受精卵的孵化率最高，孵化時間最短，而在33℃和27℃時，受精卵孵化率降低，孵化時間變長，所以最適孵化溫度在30℃左右。

2.刀額新對蝦幼體的發(fā)育

不同溫度下刀額新對蝦幼體的發(fā)育情況不同，在24℃的條件下平均存活率為44.3%，平均生長時間10.2 天，其存活率明顯低于27、30、33℃時(P＜0.05)，生長時間顯著長于27、30、33℃時(P＜0.05)。升高溫度會減少幼體發(fā)育時間，但過高的溫度也會導致幼體存活率下降。33℃時刀額新對蝦幼體存活率62.0%，明顯低于27℃時的75.3%和30℃時的81.0%(P＜0.05)，這可能是溫度超過一定范圍時，對蝦消化酶活力降低，攝食能力減弱，從而影響了幼體的健康和抗病力，導致其存活率下降。從實驗結(jié)果可以看出，溫度過低或過高都不適合幼體的培育，27～30℃是刀額新對蝦幼體發(fā)育的適宜溫度范圍。結(jié)合實驗結(jié)果中刀額新對蝦幼體的生長時間和存活率，在溫度為30℃時，刀額新對蝦幼體的存活率為81.0%，生長時間為7.7 天，優(yōu)于24、27、33℃時，可得出30℃左右是刀額新對蝦幼體發(fā)育的最適宜溫度。