張進(jìn)隆，唐文雅*，王福厚，賈志江，楊紅梅，張瀟文

(1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威 733006；2.西北民族大學(xué)，甘肅 蘭州 730030)

豬偽狂犬病是目前影響我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要傳染病之一，近年來(lái)，通過(guò)加強(qiáng)免疫接種及生物安全措施，豬偽狂犬病的發(fā)生和流行得到了有效控制，發(fā)病率和死亡率明顯降低。該病在成年豬上一般為隱性感染，但可導(dǎo)致繁殖障礙，給豬場(chǎng)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，采取凈化措施，可以根除隱性感染豬，提高豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀(北京普朗新技術(shù)有限公司，型號(hào)DNM9602)。

豬偽狂犬病病毒gE 抗體檢測(cè)試劑盒(上海博研生物科技公司，批號(hào)20210311)。

1.2 血樣采集與處理

選擇3 家規(guī)?；i場(chǎng)作為試驗(yàn)豬場(chǎng)，隨機(jī)選取34 頭豬作為備檢豬，耳靜脈或前腔靜脈采血2 mL，不加抗凝劑，血液自然凝固，待血清析出后，分離血清，留待檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

采用ELISA 檢測(cè)。首先在酶標(biāo)反應(yīng)板每孔加樣品稀釋液40 μL，然后加血清10 μL，用封板膜封板后置37 ℃孵育30 min，用洗滌液洗板5 次，加入酶標(biāo)試劑50 μL，繼續(xù)孵育30 min，洗板后每孔先加入顯色劑A、B 各50 μL，37 ℃避光顯色15 min，每孔加終止液50 μL 終止反應(yīng)。以空白孔調(diào)零，450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。為了準(zhǔn)確判定結(jié)果，設(shè)陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 凈化方案

在執(zhí)行生物安全措施的基礎(chǔ)上，豬群按免疫程序進(jìn)行免疫，一個(gè)月后檢測(cè)疫苗抗體效價(jià)，出現(xiàn)陰性的，重新免疫，若疫苗抗體陽(yáng)性，抗體水平合格，再進(jìn)行豬偽狂犬病病毒gE 抗體檢測(cè)。如果gE抗體陽(yáng)性，淘汰豬，如果gE抗體陰性，則無(wú)豬偽狂犬病野毒感染，建立健康示范群。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬偽狂犬病凈化gE 前抗體檢測(cè)結(jié)果

3 家豬場(chǎng)共采集34 份血清樣品，采用ELISA 檢測(cè)豬偽狂犬病病毒gE 抗體，1 號(hào)豬場(chǎng)陽(yáng)性數(shù)1 個(gè)，抗體陽(yáng)性率8.3%，2 號(hào)豬場(chǎng)陽(yáng)性數(shù)2 個(gè)，抗體陽(yáng)性率16.67%，3 號(hào)豬場(chǎng)陽(yáng)性數(shù)0 個(gè)，平均陽(yáng)性率為8.82%(表1)。

2.2 豬偽狂犬病凈化后gE 抗體檢測(cè)結(jié)果

3 家豬場(chǎng)共采集34 份血清樣品，采用ELISA 檢測(cè)豬偽狂犬病病毒gE 抗體，陽(yáng)性率為0(表2)。

2.3 分析與討論

(1)豬偽狂犬病病毒免疫抗體檢測(cè)不能區(qū)分人工免疫與自然感染，由于gE基因是豬偽狂犬病病毒的主要致病性基因，通過(guò)分支生物學(xué)技術(shù)，研發(fā)出gE基因缺失苗，豬接種該疫苗后，產(chǎn)生缺失基因的抗體，豬偽狂犬病病毒gE 抗體的血清學(xué)檢測(cè)很容易區(qū)分疫苗株與野毒株感染。

(2)通過(guò)gE 抗體檢測(cè)，淘汰處理陽(yáng)性豬，消除傳染源，從根本上凈化豬偽狂犬病，實(shí)際凈化效果表明，這一方法是可行的。

(3)加強(qiáng)免疫是關(guān)鍵：豬群全部使用豬偽狂犬病病毒 Bartha-K61 株gE 基因缺失弱毒疫苗免疫，同時(shí)結(jié)合抗體檢測(cè)等結(jié)果，進(jìn)一步調(diào)整免疫程序。

(4)ELISA 技術(shù)具有特異性強(qiáng)、敏感、檢測(cè)快速、適合群體檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在豬偽狂犬病病毒凈化中，有很好的實(shí)用性。