韋紅群，何珊珊，李燕飛，胡文娟，黃藝，夏青，梁思思，賴艷梅，莫云霞*

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市530007；2.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)科學(xué)研究院，南寧市530007）

蠶種是蠶業(yè)生產(chǎn)中最基本的生產(chǎn)資料［1］，蠶種發(fā)育整齊、孵化率高是蠶種保護與人工孵化的技術(shù)目標。研究認為，蠶種人工活化技術(shù)決定了蠶種孵化率的高低、蠶體的強弱以及飼養(yǎng)發(fā)育情況等，在實際生產(chǎn)中孵化率只是其中一個重要的參考因素，而蠶種孵化后蠶體的強健性、蠶的飼養(yǎng)發(fā)育情況才是反映蠶種人工活化處理技術(shù)效果的關(guān)鍵因素［2-6］。蠶種孵化率高、蠶體強健、發(fā)育整齊，可有效降低飼養(yǎng)過程的人工成本，從而提高飼養(yǎng)成績和養(yǎng)蠶效益。

本研究主要在莫云霞等［7］對亞熱帶地區(qū)蠶種免浸酸處理低溫冷藏保護技術(shù)研究的基礎(chǔ)上，以蠶種實用孵化率為初選目標，結(jié)合蠶種胚子發(fā)育，初步確定亞熱帶地區(qū)蠶種免浸酸處理低溫冷藏保護的技術(shù)參數(shù)，進一步驗證前期篩選出的兩廣地區(qū)蠶種免浸酸處理的技術(shù)參數(shù)是否實用可行。課題組以篩選出的實用孵化率達標的組合為研究對象，通過調(diào)查蟻蠶的強健性以及進行飼養(yǎng)跟蹤對比，記錄蠶期發(fā)育經(jīng)過、飼養(yǎng)情況、制種情況，調(diào)查生命力及飼養(yǎng)成績，重點對比分析24 h疏毛率、72 h生命力以及4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率等主要指標，進一步驗證低溫冷藏保護免浸酸處理技術(shù)的冷藏范圍，特別是二次冷藏的時間參數(shù)是否實用可行，以期為廣西地區(qū)蠶種免浸酸處理冷藏保護技術(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

兩廣二號原種932×芙蓉、7532×湘暉，由廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣站原種場提供。

1.2 試驗時間與試驗地點

試驗時間為2019年9月—2020年11月，試驗地點為廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站冷庫。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗材料準備 待蠶種產(chǎn)下后，按表1 進行保護冷藏備種。其中第一次冷藏保護時間下文簡稱“一冷”，第二次冷藏保護時間下文簡稱“二冷”。

表1 強健性跟蹤調(diào)查試驗冷藏保護備種時間 d

1.3.2 調(diào)查方法 將經(jīng)過低溫冷藏保護的蠶種進行卵面消毒后放入催青室按標準（前4 d 溫度24～25 ℃、第5 d后溫度28～29 ℃、濕度80%～85%）進行催青。蠶種孵化后進行蟻蠶強健性調(diào)查和飼養(yǎng)跟蹤調(diào)查。蟻蠶強健性調(diào)查包括蟻蠶24 h 疏毛率和72 h生命力的調(diào)查。24 h 蟻蠶疏毛率調(diào)查方法為每個處理設(shè)3 個重復(fù)，每個重復(fù)設(shè)100 頭蟻蠶，在溫度為28 ℃、濕度為85%條件下，給桑后調(diào)查24 h蟻蠶疏毛率。蟻蠶72 h生命力調(diào)查方法為，每個處理設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)設(shè)100 頭蟻蠶，在溫度為28 ℃、濕度為85%條件下調(diào)查72 h 蟻蠶生命力。飼養(yǎng)跟蹤調(diào)查是指調(diào)查4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率，其方法為每個處理以7個蛾區(qū)蟻蠶充分混合，收取蟻量的三分之一進行飼養(yǎng)，4齡餉食后分蠶，選取300頭蠶為一個重復(fù)，每個處理設(shè)3個重復(fù)，調(diào)查飼育成績并計算4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率。以上各項試驗均以正常冷藏到期浸酸蠶種為對照春制秋用種以庫外保護6 d、中感0.5 d、冷藏110 d 到期為對照1；秋制春用種以庫外保護25 d、中感15 d、冷藏120 d到期為對照2。

1.4 計算方法

各指標計算公示如下。

1.5 數(shù)據(jù)分析

經(jīng)過現(xiàn)場數(shù)據(jù)測定以及收集整理，采用SPSS 25.0軟件對調(diào)查的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 932×芙蓉春制秋用種生命力調(diào)查

2.1.1 24 h 疏毛率 由表2 可知，庫外保護5 d、一冷80 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為94.00%，最高值為99.67%；一冷90 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為94.00%，最高值為99.67%；一冷100 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為95.00%，最高值為100%。庫外保護6 d、一冷80 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為95.00%，最高值為99.67%；一冷90 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為95.00%，最高值為99.67%；一冷100 d 的蠶種24 h 疏毛率最低值為94.67%，最高值為99.67%；對照1 的24 h疏毛率為99.00%。

2.1.2 72 h蟻蠶生命力 由表2可知，庫外保護5 d、一冷80 d 的蠶種72 h 蟻蠶生命力最低值為94.00%，最高值為98.00%；一冷90 d 的蠶種72 h 蟻蠶生命力最低值為95.00%，最高值為99.00%；一冷100 d 的蠶種72 h 蟻蠶生命力最低值為93.00%，最高值為99.00%。庫外保護6 d、一冷80 d的蠶種72 h蟻蠶生命力最低值為94.00%，最高值為99.00%；一冷90 d的蠶種72 h 蟻蠶生命力最低值為94.00%，最高值為97.00%；一冷100 d的蠶種72 h蟻蠶生命力最低值為93.00%，最高值為96.00%；對照1的72 h蟻蠶生命力為98.00%。

表2 932×芙蓉春制秋用種生命力調(diào)查

2.1.3 4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率 庫外保護5 d、一冷80 d的蠶種4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為92.54%，最高值為96.31%；一冷90 d 的蠶種4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為93.19%，最高值為95.88%；一冷100 d 的蠶種4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為93.55%，最高值為96.20%。庫外保護6 d、一冷80 d 的蠶種4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為93.25%，最高值為96.69%；一冷90 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為92.28%，最高值為95.65%；一冷100 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最低值為91.07%，最高值為94.79%；對照1 的4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率為95.06%。

2.1.4 春制秋用種932×芙蓉的各項調(diào)查指標與對照的差異顯著性分析結(jié)果 通過對24 h疏毛率、72 h生命力、4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率數(shù)據(jù)進行Levene齊性檢驗和方差分析，結(jié)果見表3。從表3數(shù)值可知，24 h疏毛率從方差分析P值看，不同冷藏方式、第二冷藏時間50 d 的值均為0，差異達到極顯著，其他處理值均大于0.05，說明在試驗范圍內(nèi)第二次冷藏時間40 d以內(nèi)24 h 疏毛率與對照差異不顯著，第二次冷藏時間達到50 d后24 h疏毛率與對照相比下降明顯。72 h蟻蠶生命力從方差分析P值看，不同冷藏方式、第二次冷藏時間50 d的值在0.001～0.007之間，達到差異極顯著水平，其他處理P值均大于0.05，差異不明顯。4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率從方差分析P值看，庫外保護5 d 與庫外保護6 d、第一次冷藏90 d、第二次冷藏50 d 的P值分別為0.014 和0.013，與對照間差異顯著；庫外保護6 d，第一次冷藏80 d 和100 d 的第二次冷藏50 d的P值分別為0.007和0，差異極顯著。第二次冷藏時間為50 d，4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率與對照相比差異顯著或極顯著，第二次冷藏時間在40 d以內(nèi)，其他處理顯著值均大于0.05，與對照1差異不顯著。

表3 932×芙蓉春制秋用種生命力各指標與對照的顯著性差異表

由3項調(diào)查結(jié)果的比較可知，二冷時間在40 d的各處理與對照1的差異不顯著；當(dāng)二冷時間延長至50 d時，各項調(diào)查指標都有不同程度的下降，與對照相比，部分達到差異極顯著，說明932×芙蓉春制秋用種免浸酸處理蠶種第二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d以內(nèi)，超出40 d后繼續(xù)冷藏會導(dǎo)致蠶體生命力數(shù)值的下降。

2.2 932×芙蓉秋制春用種生命力調(diào)查

各項指標調(diào)查結(jié)果見表4。

2.2.1 24 h 疏毛率 各處理的蠶種24 h 疏毛率最高值為99.67%，最低值為97.33%，出現(xiàn)在庫外保護30 d、第一次冷藏110 d、第二次冷藏50 d 的處理；對照2的蠶種24 h疏毛率為99.67%。

2.2.2 72 h蟻蠶生命力 結(jié)果顯示，庫外保護10 d，所有處理中蠶種的72 h蟻蠶生命力最高值為100%，最低值為95.00%；庫外保護20 d的處理中，最高值為100%；一冷90 d、二冷10～50 d 的處理，最高為98.00%，最低為96.00%；庫外保護30 d、一冷90 d、二冷10～50 d最高值為99.00%，最低值為96.67%；對照2為99.67%。

2.2.3 4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率 結(jié)果顯示，庫外保護10 d，蠶種的4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最高值為第一次冷藏110 d，第二次冷藏30 d的處理（95.63%）；最低值出現(xiàn)在第一次冷藏90 d、第二次冷藏50 d 的處理為（92.39%）；庫外保護20 d，最高值為第一次冷藏80 d，第二次冷藏30 d 的（95.88%）；最低值出現(xiàn)在第一次冷藏110 d，第二次冷藏50 d 的處理為（91.02%）；庫外保護30 d，最高值的處理為第一次冷藏80 d，第二次冷藏30 d（96.00%）；最低值的處理為第一次冷藏90 d，第二次冷藏50 d的（91.02%）；對照組為94.64%。

2.2.4 各項調(diào)查指標與對照的顯著性分析 差異顯著性結(jié)果見表5。從24 h 疏毛率的差異顯著性結(jié)果可知，庫外保護10 d（一冷100 d、第二次冷藏50 d）、庫外保護20 d（一冷80 d、第二次冷藏50 d）、庫外保護30 d（一冷110 d、第二次冷藏50 d）的P值分別為：0.007、0.002、0.001均與對照差異達到極顯著；庫外保護30 d（一冷80 d、第二次冷藏50 d）以及庫外保護30 d（一冷90 d、第二次冷藏50 d）的P值分別為0.039、0.013，與對照差異達到顯著；其他處理P值均大于0.05，說明在試驗范圍內(nèi)第二次冷藏時間在40 d以內(nèi)各處理的24 h 疏毛率與對照差異不顯著，第二次冷藏時間達到50 d 后，蟻蠶24 h 疏毛率有不同程度下降。

表5 932×芙蓉秋制春用種各指標調(diào)查數(shù)據(jù)與對照的顯著性方差分析

72 h蟻蠶生命力的差異性分析結(jié)果顯示，庫外保護10 d，第一次冷藏100 d、第二次冷藏50 d的處理，P值為0.007，達到極顯著水平；除此以外，其他處理的P值均大于0.05，與對照2差異不明顯；庫外保護20 d，第一次冷藏80 d、90 d、100 d，第二次冷藏相同的50 d的處理，P值分別為0.034、0.038、0.028，三個處理與對照差異顯著；第一次冷藏110 d、第二次冷藏50 d處理的P值為0，差異極顯著；第二次冷藏時間在40 d以內(nèi)的處理P值均大于0.05，與對照差異不明顯；庫外保護30 d，第一次冷藏110 d、第二次冷藏50 d處理的P值為0，差異極顯著，其他處理的P值均大于0.05，與對照差異不明顯。

4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率的差異性分析結(jié)果顯示，在試驗范圍內(nèi)，從第二次冷藏時間10～40 d 可見，P值最小的處理為第一次冷藏100 d，第二次冷藏40 d 的0.050，與對照2差異不顯著；第二次冷藏時間延長至50 d 時，庫外保護10 d，除一冷80 d 的4 齡蟲蛹統(tǒng)一生命率的P值大于0.05，差異不顯著外，其他二冷50 d 的處理的平均值差異達到顯著或極顯著；庫外保護20 d 和30 d，第一次冷藏90 d、100 d、110 d，第二次冷藏均為50 d 的6 個處理與對照2 差異均達到極顯著。

綜合3項調(diào)查結(jié)果，表明二冷時間在40 d的各處理的3項指標與對照的差異不顯著；當(dāng)二冷時間延長至50 d時，各項調(diào)查指標不同程度的下降，與對照相比差異顯著甚至極顯著，說明932×芙蓉秋制春用種免浸酸處理蠶種第二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d以內(nèi)，超出40 d后繼續(xù)冷藏會引起蠶體生命力數(shù)值的下降。

2.3 7532×湘暉春制秋用種生命力調(diào)查

生命力各項調(diào)查結(jié)果見表6。

表6 7532×湘暉春制秋用種生命力調(diào)查

2.3.1 24 h 疏毛率 庫外保護6 d 的蠶種24 h 疏毛率最高值為99.67%，最低值為95.67%；庫外保護7 d的蠶種24 h 疏毛率最高值出現(xiàn)在99.67%，最低值為97.67%；對照組為100%。

2.3.2 72 h 蟻蠶生命力 庫外保護6 d 的蠶種72 h蟻蠶生命力最高值出現(xiàn)在第一次冷藏100 d、第二次冷藏30 d的處理為97.00%，最低值出現(xiàn)兩次，為第一次冷藏80 和90 d、第二次冷藏均為50 d 的處理，為92.00%；庫外保護7 d的蠶種72 h蟻蠶生命力最高值為第一次冷藏110 d、第二次冷藏30 d 的處理，為99.00%，最低值為第一次冷藏110 d、第二次冷藏20 d的處理，為91.00%；對照1為95.00%。

2.3.3 4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率 庫外保護6 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最高值為第一次冷藏100 d、第二次冷藏30 d的處理，為96.53%，最低值為第一次冷藏90 d、第二次冷藏50 d的處理，為93.29%。庫外保護7 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最高值為第一次冷藏90 d、第二次冷藏30 d 的處理，為96.85%，最低值為第一次冷藏100 d、第二次冷藏50 d 的處理，為92.18%；對照1為96.54%。

2.3.4 春制秋用7532×湘暉的各項調(diào)查指標與對照方差分析結(jié)果 差異顯著性分析結(jié)果見表7。從24 h疏毛率的顯著性分析結(jié)果可知，在試驗范圍內(nèi)，第二次冷藏時間小于40 d的各個處理P值均大于0.05，與對照1 差異不顯著；第二次冷藏50 d 的各處理中，當(dāng)庫外保護6 d，第一次冷藏80 d和100 d的P值分別為0.044、0.012，與對照1 差異顯著；第一次冷藏90 d 和110 d 的P值分別為0.004、0，差異達極顯著；當(dāng)庫外保護7 d，二冷相同時間50 d 時，第一次冷藏90 d、100 d 和110 d 的P值分別為0.041、0.028 和0.035，與對照差異顯著；其中第一次冷藏80 d 的P值為0，差異極顯著，說明第二次冷藏達到50 d 后24 h 疏毛率下降明顯。

表7 7532×湘暉春制秋用種生命力指標與對照的差異顯著性分析表

從72 h 蟻蠶生命力的顯著性分析結(jié)果可知，在試驗范圍內(nèi)，第二次冷藏時間在40 d 處理P值均大于0.05，與對照1 差異不顯著。第二次冷藏50 d，庫外保護6 d，第一次冷藏110 d的P值為0.025，差異顯著；第一次冷藏80 d、90 d、100 d 的三個處理，P值均為0，差異極顯著；庫外保護7 d，第二次冷藏50 d的4 個處理，P值在0～0.007 之間，與對照相比，差異極顯著。

從4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率顯著性分析結(jié)果可知，不論是庫外保護6 d、7 d，所有第二次冷藏50 d的檢驗P值都小于0.05，差異顯著；差異最顯著的處理為庫外保護7 d，第一次冷藏80 d 和100 d，第二冷藏50 d 的處理，P值分別為0.002和0.006，與對照差異極顯著，說明第二次冷藏時間達到50 d，4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率顯著或極顯著低于對照。

綜合3 項指標調(diào)查分析比較結(jié)果，在試驗范圍內(nèi)，二冷時間小于40 d的各處理的24 h疏毛率和72 h蟻蠶生命力、4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率與對照的差異不顯著；當(dāng)二冷時間延長至50 d時，各項調(diào)查指標與對照相比均差異顯著甚至達到極顯著，說明7532×湘暉春制秋用種二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d 以內(nèi)，超出40 d后繼續(xù)冷藏會引起蠶體生命力的下降。

2.4 7532×湘暉秋制春用種生命力調(diào)查

春用種生命力調(diào)查見表8。

表8 7532×湘暉秋制春用生命力調(diào)查

2.4.1 24 h 疏毛率 庫外保護10 d，所有處理的蠶種24 h 疏毛率最高值為99.67%，最低值為97.67%；庫外保護20 d，最高值為100%，最低值為97.33%；庫外保護30 d 的蠶種24 h 疏毛率最高值為99.33%，最低值為97.00%；對照2為98.75%。

2.4.2 72 h 蟻蠶生命力 庫外保護10 d，所有處理的蠶種72 h 蟻蠶生命力最高值為98.67%，最低值為95.00%；庫外保護20 d 的蠶種72 h 蟻蠶生命力最高值為99.00%，最低值為96.50%；庫外保護30 d 的蠶種72 h 蟻蠶生命力最高值為99.00%，最低值為95.67%；對照2為98.00%。

2.4.3 4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率 庫外保護10 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率值最高的處理為一冷80 d，二冷40 d的處理，為95.63%，最低值為一冷100 d，二冷50 d的處理，為91.69%；庫外保護20 d的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最高值為一冷80 d，二冷40 d 的處理，為94.76%，最低平均值出現(xiàn)在一冷110 d，二冷50 d 的處理，數(shù)值為90.56%；庫外保護30 d 的蠶種4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率最高值為一冷100 d，二冷30 d的處理，為94.25%，最低值是一冷110 d，二冷50 d 處理，為90.67%；對照2為94.27%。

2.4.4 秋制春用種7532×湘暉的各項調(diào)查指標與對照方差分析結(jié)果 方差分析結(jié)果見表9。從24 h疏毛率的差異性結(jié)果可知，庫外保護10 d的P值最小值為第一次冷藏90 d、第二次冷藏20 d 的處理，為0.069；庫外保護20 d 的P值最小值為第一次冷藏110 d、第二次冷藏20 d與40 d的處理，為0.057；庫外保護30 d的P值最小值為第一次冷藏80 d、第二次冷藏50 d的處理，為0.069，以上指標的P值均大于0.050，證明3 個指標與對照2無顯著差異。

表9 7532×湘暉秋制春用種生命力指標與對照的差異顯著性分析表

從72 h蟻蠶生命力的差異性結(jié)果可知，第二次冷藏50 d的處理，除了庫外保護10 d、第一次冷藏110 d、第二次冷藏50 d 的P值為0.079，與對照2 差異不顯著，其他處理檢驗P值均達到顯著或者極顯著水平。第二次冷藏40 d處理均差異不顯著，說明當(dāng)?shù)诙卫洳貢r間達到50 d時，蟻蠶生命力呈現(xiàn)不同程度下降。

從4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率的差異性結(jié)果可知，庫外保護10 d、第一次冷藏100 d、第二次冷藏50 d的P值為0.049，與對照2差異顯著；第一次冷藏110 d、第二次冷藏50 d 的P值為0，與對照2 差異極顯著。庫外保護20 d、第一次冷藏100 d和110 d、第二次冷藏50 d的P值分別為0.001、0.007，與對照2 差異極顯著；庫外保護30 d、第一次冷藏100 d 和110 d、第二次冷藏50 d的P值分別為0.003、0.001，與對照2差異極顯著。

綜上，3 項生命力指標驗證了7532×湘暉秋制春用種免浸酸處理第二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d以內(nèi)，第二次冷藏達到50 d時，蟻蠶強健性下降顯著。

3 小結(jié)與討論

3.1 小結(jié)

本試驗以兩廣二號原種932×芙蓉、7532×湘暉為研究對象，以24 h疏毛率、蟻蠶生命力、4齡蟲蛹統(tǒng)一生命率為主要考核指標，進行亞熱帶地區(qū)蠶種低溫冷藏保護免浸酸處理的蠶種強健性跟蹤調(diào)查。由調(diào)查結(jié)果分析可知，第二次冷藏40 d以內(nèi)的處理，兩個品種的3 項成績與對照相仿，差異不明顯；第二次冷藏50 d，兩個品種3 項指標成績均有不同程度下降，與對照相比，只有極個別處理差異不顯著，大部分處理差異達到顯著或極顯著，說明低溫冷藏保護免浸酸處理時，蠶種第二次冷藏時間達到50 d，蟻蠶孵化后蠶體強健性明顯下降，對生產(chǎn)有明顯的影響，建議第二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d以內(nèi)。本次試驗處理雖然沒有完全包括前期冷藏研究所確定的技術(shù)參數(shù)組合方式，但也是進行了絕大部分組合的跟蹤調(diào)查，具備客觀真實的代表性。所以免浸酸處理低溫冷藏保護第二次冷藏時間應(yīng)當(dāng)控制在40 d以內(nèi)。

3.2 討論

本次試驗總結(jié)蠶種低溫冷藏保護免浸酸處理的第二次冷藏的冷藏時間與張三妹等［8］研究發(fā)現(xiàn)的冷藏浸酸種以丙1胚子入庫的冷藏時間相符，也與鄭煥生［9］等研究發(fā)現(xiàn)的含多化性血統(tǒng)家蠶兩廣二號一代雜交種浸酸后以丙胚子再冷藏的冷藏期限一致，說明低溫冷藏保護免浸酸處理二次冷藏時間范圍是適宜的。通過本次試驗進一步確認了亞熱帶地區(qū)蠶種的低溫冷藏保護免浸酸處理技術(shù)的保護與冷藏的時間參數(shù)科學(xué)可行，為亞熱帶地區(qū)蠶種的免浸酸處理提供了科學(xué)可靠的依據(jù)。