郭 菲，林亞軍，王 凱，王舒豐，姚曉慧，馬木爾·阿克木漢，夏利寧

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆阿勒泰職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆 阿勒泰 836599)

隨著寵物越來(lái)越多的進(jìn)入人們的家庭生活，細(xì)菌交叉感染在寵物病中扮演著重要角色，由于寵物接觸的抗菌藥物與用于人類(lèi)治療的某些藥物類(lèi)似[1]，因此存在由寵物源耐藥菌傳遞給人，致使人無(wú)藥可用的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前已發(fā)現(xiàn)通過(guò)動(dòng)物傳染給人類(lèi)的疾病至少有816種，對(duì)動(dòng)物疾病的預(yù)防和控制普及不到位，則會(huì)為疾病的傳播埋下很多隱患[2]。歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家開(kāi)始重視小動(dòng)物的細(xì)菌耐藥問(wèn)題，已報(bào)道許多有關(guān)寵物源細(xì)菌耐藥性的研究[3]。國(guó)內(nèi)對(duì)細(xì)菌耐藥的研究主要在人醫(yī)及畜禽臨床用藥方面，少見(jiàn)對(duì)寵物源細(xì)菌耐藥性的研究報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)調(diào)查寵物源大腸桿菌、沙門(mén)菌、葡萄球菌對(duì)常用抗菌藥物的敏感性，為小動(dòng)物臨床合理使用抗菌藥物提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 2015年冬季和2016年春季在烏魯木齊市多家寵物醫(yī)院采集樣品，將滅菌肛拭子插入犬和貓的直腸采集新鮮糞便。共采集170份肛拭子樣品，其中含有149份犬源樣品，21份貓?jiān)礃悠?，從樣品中分離沙門(mén)菌、大腸桿菌、葡萄球菌。

1.2 菌株及培養(yǎng)基 大腸桿菌ATCC25922標(biāo)準(zhǔn)菌株和金黃色葡萄球菌ATCC29213標(biāo)準(zhǔn)菌株為質(zhì)控菌，均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。麥康凱培養(yǎng)基、普通肉湯和Mueller-Hinton(MH)培養(yǎng)基、瓊脂粉、Nutrient Broth(NB)營(yíng)養(yǎng)肉湯、氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)、SS瓊脂、沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基，均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。Baird-Parker瓊脂培養(yǎng)基，購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。

1.3 藥物 β-內(nèi)酰胺類(lèi)：頭孢噻呋(Ceftiofur，CEF)、苯唑西林(Oxacillin，OX)、阿莫西林/克拉維酸(Amoxicillin/Clavulanic acid，A/C)和氨芐西林(Ampicillin，AMP)；四環(huán)素類(lèi)：四環(huán)素(Tetracycline，TET)；安莎霉素類(lèi)：利福平(Rifampicin，RA)；酰胺醇類(lèi)：氟苯尼考(Florfenicol，F(xiàn)LR)；林可胺類(lèi)：克林霉素(Clindamycin，CLDM)；氟喹諾酮類(lèi)：諾氟沙星(Norfloxacin，NOF)、環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)、恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)、左氧氟沙星(Levofloxacin，LEV)；氨基糖苷類(lèi)：卡那霉素(Kanamycin，KANA)、安普霉素(Apramycin，APR)、慶大霉素(Gentamicin，GEN)和阿米卡星(Amikacin，AMK)，上述藥品均購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，且均為標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4 寵物源常見(jiàn)病原菌的分離鑒定 將采集糞樣的肛拭子在1 mL滅菌MH肉湯中增菌，增菌液在麥康凱瓊脂平板上劃線并挑取單菌落做革蘭染色鏡檢，進(jìn)行大腸桿菌的分離；將采集糞樣的肛拭子在含有7.5% NaCl的MH營(yíng)養(yǎng)肉湯中增菌，增菌液在Baird-Parker瓊脂培養(yǎng)基上劃線，經(jīng)革蘭染色鏡檢及觸酶試驗(yàn)，進(jìn)行葡萄球菌的分離；將采集糞樣的肛拭子在MM肉湯中增菌，在SS瓊脂上劃線并經(jīng)PCR鑒定，進(jìn)行沙門(mén)菌的分離，鑒定后的病原菌經(jīng)60%甘油保菌于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 藥敏試驗(yàn)及結(jié)果判定 按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)[4]推薦的瓊脂稀釋法對(duì)分離的大腸桿菌、沙門(mén)菌和葡萄球菌進(jìn)行臨床常用抗菌藥物的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentrations,MICs)值測(cè)定，以耐藥、中介和敏感3種形式記錄結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行耐藥率差異統(tǒng)計(jì)，用卡方檢驗(yàn)做差異顯著性分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 寵物源常見(jiàn)病原菌分離鑒定 在烏魯木齊市5家寵物醫(yī)院采集寵物肛拭子170份，對(duì)采集的樣品進(jìn)行葡萄球菌、大腸桿菌和沙門(mén)菌的分離，分離率分別為葡萄球菌90.6%(154/170)、大腸桿菌72.9%(124/170)和沙門(mén)菌25.9%(44/170)。

2.2 寵物源常見(jiàn)病原菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性 寵物源大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星(98.4%)、氨芐西林(97.6%)、氟苯尼考(92.0%)這3種藥物的耐藥率均在90.0%以上，對(duì)阿莫西林/克拉維酸(81.4%)、慶大霉素(75.8%)、恩諾沙星(71.0%)、諾氟沙星(70.2%)這4種藥物的耐藥率均在70.0%以上，對(duì)頭孢噻呋(39.5%)、安普霉素(25.0%)、阿米卡星(12.0%)耐藥率在40.0%以下。

寵物源葡萄球菌對(duì)苯唑西林(94.2%)耐藥率較高，對(duì)四環(huán)素(60.4%)、氟苯尼考(58.4%)、氧氟沙星(57.1%)、克林霉素(55.8%)耐藥率均在50.0%以上；對(duì)利福平和阿米卡星的耐藥率較低，均在30.0%以下。

寵物源沙門(mén)菌對(duì)氟苯尼考、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、卡那霉素這5種藥物耐藥率高達(dá)100%，對(duì)氨芐西林(95.0%)、阿莫西林/克拉維酸(97.7%)、恩諾沙星(93.0%)這3種藥物耐藥率均在90.0%以上，對(duì)慶大霉素、安普霉素、阿米卡星與頭孢噻呋敏感率高。

卡方檢驗(yàn)結(jié)果如表1所示，葡萄球菌分離株對(duì)阿米卡星、氟苯尼考耐藥率顯著高于大腸桿菌和沙門(mén)菌(P<0.05)；沙門(mén)菌和大腸桿菌分離株對(duì)恩諾沙星和阿莫西林/克拉維酸耐藥率顯著高于葡萄球菌(P<0.05)。此外，葡萄球菌分離株對(duì)阿米卡星、慶大霉素、氟苯尼考和恩諾沙星的中介率也顯著高于大腸桿菌和沙門(mén)菌(P<0.05)。

表1 烏魯木齊寵物源常見(jiàn)病原菌耐藥結(jié)果Table1 Drug resistance results of common pathogens in pet sources in Urumqi (%)

2.3 寵物源常見(jiàn)病原菌多藥耐藥及耐藥譜型 結(jié)果如圖1所示，寵物源常見(jiàn)病原菌多藥耐藥情況嚴(yán)重，其中寵物源大腸桿菌以8耐為主，達(dá)到25.8%，其次是7耐和6耐，多藥耐藥率分別為17.7%和16.1%，并檢出3株超級(jí)耐藥菌株，對(duì)被檢的10種抗菌藥物都耐藥；寵物源葡萄球菌多藥耐藥分布較廣，在0～11耐均有分布，以4耐和6耐多藥耐藥為主，分別為15.0%和13.0%，檢出8株超級(jí)耐藥菌，對(duì)被檢的11種抗菌藥物都耐藥；寵物源沙門(mén)菌多藥耐藥在6～10 耐分布，多藥耐藥以8耐為主，達(dá)88.6%。

圖1 寵物源大腸桿菌、葡萄球菌及沙門(mén)菌多藥耐藥結(jié)果Fig.1 The multi-drug resistance results of Escherichia coli,Staphylococcus and Salmonella isolated from pets

耐藥譜型結(jié)果顯示，寵物源病原菌耐藥譜型多樣化，以葡萄球菌耐藥譜型最多，154株葡萄球菌對(duì)被檢的抗菌藥物共檢出81種耐藥譜型，以2耐、4耐 和6耐為主，2耐譜型中以LEV-FLR為主，占3.9%(6/154)，4耐譜型中以TET-FLR-LEV-OX為主，占3.9%(6/154)，6耐譜型中以TET-FLR-LEV-OX-CLDM-CEF為主，占3.2%(5/154)；大腸桿菌譜型次之，共有40種譜型，以6耐、7耐和8耐為主，6耐 譜型中以AMP-FLR-A/C-ENR-NOF-CIP為主，占4.0%(5/124)，7耐譜型以AMP-FLR-A/C-GEN-ENF-NOF-CIP為主，占12.9%(16/124)，8耐譜型以AMP-FLR-A/C-GEN-CEF-ENR-NOF-CIP和AMP-FLR-A/C-APR-GEN-ENR-NOF-CIP為主，分別占8.9%(11/124)和11.3%(14/124)；而44株沙門(mén)菌僅有4種耐藥譜型，以8耐譜型AMP-FLR-A/C-ENR-NOF-CIP-TET-KANA為主，占88.6%(39/44)。

3 討論

本試驗(yàn)從同一批寵物糞便樣本中進(jìn)行寵物源常見(jiàn)3種病原菌的分離鑒定，結(jié)果顯示：3種病原菌分離率從高到低依次為葡萄球菌(90.6%)、大腸桿菌(72.9%)、沙門(mén)菌(25.9%)，對(duì)葡萄球菌的分離率顯著高于吳鐵花等[5](10.7%)、郭立軍[6](71.4%)和馮言言等[7](16.0%)的報(bào)道，其原因可能是不同報(bào)道中對(duì)葡萄球菌的分離鑒定方法不同。此外，烏魯木齊市寵物源大腸桿菌的分離率顯著高于其他地區(qū)的報(bào)道，文英等[8]報(bào)道的青海省寵物源大腸桿菌分離率為27.9%，吳萍萍[9]報(bào)道的安徽地區(qū)寵物源大腸桿菌的分離率為47.6%，本試驗(yàn)中寵物源大腸桿菌的分離率與劉果等[10]報(bào)道長(zhǎng)春地區(qū)寵物源大腸桿菌分離率(70.4%)基本一致。造成分離率存在較大差異的原因可能是不同地區(qū)所采集的寵物健康狀態(tài)不同。查閱相關(guān)文獻(xiàn)可知，寵物源沙門(mén)菌的分離率整體較低，如陳傳榮等[11](2.3%，17/746)、顏衛(wèi)等[12](1.91%，13/682)報(bào)道的寵物源沙門(mén)菌的分離率均未超過(guò)5.0%，而李玉蘭[13]報(bào)道的青海省寵物源沙門(mén)菌的分離率為18.8%(23/122)，本試驗(yàn)中寵物源沙門(mén)菌的分離率(25.9%，44/170)與龔大春等[14](27.8%，10/36)報(bào)道的基本一致。

寵物源不同病原菌對(duì)被檢抗菌藥物存在不同程度的耐藥，多藥耐藥集中在6～8耐，耐藥譜型多樣化，整體耐藥嚴(yán)重程度為沙門(mén)菌>大腸桿菌>葡萄球菌。44株寵物源沙門(mén)菌對(duì)被檢的7種抗菌藥物耐藥率超過(guò)90.0%，本試驗(yàn)結(jié)果與林亞軍等[15]報(bào)道的對(duì)阿米卡星、頭孢噻呋的藥敏試驗(yàn)結(jié)果一致，對(duì)阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林耐藥性結(jié)果與王元蘭[16]報(bào)道的合肥地區(qū)寵物源沙門(mén)菌一致，但高于陳傳榮等[11]報(bào)道的17株寵物源沙門(mén)菌對(duì)氨芐西林的耐藥結(jié)果。124株寵物源大腸桿菌對(duì)被檢的7種抗菌藥物的耐藥率在60.0%以上，部分抗菌藥物耐藥結(jié)果高于文英等[8]報(bào)道的百株寵物源大腸桿菌的耐藥率以及吳立婷[17]報(bào)道的寵物源大腸桿菌的耐藥率(6.9%72.2%)，與張美君等[18]報(bào)道的寵物源大腸桿菌對(duì)安普霉素、阿米卡星的耐藥結(jié)果相符；但對(duì)頭孢噻呋的耐藥率低于師志海等[19]的報(bào)道，對(duì)阿莫西林/克拉維酸(73.6%)、頭孢菌素(49.5%)、慶大霉素(87.9%)的耐藥率則低于波蘭Rzewuska等[20]報(bào)道的犬貓?jiān)创竽c桿菌。154株寵物源葡萄球菌對(duì)被檢的5種抗菌藥物耐藥率超過(guò)50.0%，寵物源葡萄球菌對(duì)苯唑西林的耐藥率高達(dá)94.3%，與軒慧勇等[21]等報(bào)道的寵物源葡萄球菌對(duì)臨床常用抗菌藥物耐藥結(jié)果一致，對(duì)克林霉素(55.2%)和四環(huán)素(59.7%)的耐藥率低于馮言言等[7]報(bào)道的耐藥率(對(duì)這2種抗菌藥物的耐藥率都超過(guò)80.0%)，對(duì)阿莫西林/克拉維酸的耐藥率(48.1%)低于龔大春等[14]的報(bào)道(84.5%)。造成寵物源常見(jiàn)病原菌耐藥情況及多藥耐藥率如此高的原因可能是家庭式飼養(yǎng)使寵物自身免疫力低，國(guó)家藥物監(jiān)管制度不完善，診療機(jī)構(gòu)肆意加大藥物使用劑量，導(dǎo)致寵物耐藥情況日益嚴(yán)重。

綜上可知，烏魯木齊市寵物糞便中3種常見(jiàn)病原菌攜帶率較高，且沙門(mén)菌與大腸桿菌對(duì)部分被檢抗菌藥物的耐藥率高達(dá)90.0%以上。寵物源常見(jiàn)病原菌多藥耐藥譜型寬，其中沙門(mén)菌多藥耐藥譜型集中在8耐，且檢出8株對(duì)11種抗菌藥物都耐藥的超級(jí)耐藥菌。表明新疆烏魯木齊寵物源3種常見(jiàn)病原菌耐藥情況較為嚴(yán)重，應(yīng)加強(qiáng)寵物源菌耐藥性的監(jiān)控力度。此外，臨床治療中應(yīng)避免重復(fù)使用同一種藥物，規(guī)范使用抗菌藥物，從而減少耐藥細(xì)菌的產(chǎn)生和傳播。