李思瑾 陳龍清

（西南林業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院，云南省功能性花卉資源及產(chǎn)業(yè)化技術(shù)工程研究中心，云南 昆明 650233）

蠟梅（Chimonanthus praecox）是蠟梅科（Calycanthaceae）蠟梅屬（Chimonanthus）的落葉叢生灌木[1]，花開(kāi)于冬季，極具芳香，在園林中應(yīng)用廣泛。此外，蠟梅也是春節(jié)花卉市場(chǎng)所追捧的優(yōu)質(zhì)插花材料。近年來(lái)對(duì)于蠟梅切枝的保鮮有很多報(bào)道，在其預(yù)處理[2-3]、采收期[4]、激素添加[5]以及保鮮劑[6]方面，均有深入研究，并且蠟梅切花中的水分脅迫、衰老過(guò)程中的細(xì)胞內(nèi)含物及激素變化、落花生理等相關(guān)生理變化[7]也有所闡明。而對(duì)于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在蠟梅切枝催花保鮮上的運(yùn)用則較為少見(jiàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的蠟梅切枝采于西南林業(yè)大學(xué)校園內(nèi)。于2019年12月選取‘素心’蠟梅現(xiàn)蕾期的枝條（如圖1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采摘時(shí)間為上午10：00，所采切枝長(zhǎng)20～30 cm，迅速以濕毛巾包裹切枝基部后用小塑料袋扎緊，隨后用報(bào)紙作為緩沖物裹緊枝條，盡快運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，在清水中浸基復(fù)水1 h，再將花枝置于水中剪去基部2 cm左右后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

圖1 蠟梅切花相關(guān)形態(tài)Fig. 1 Related forms of C. praecox cut flowers

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蠟梅切枝在不同催花保鮮液中的瓶插處理

前期采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選出催花保鮮劑基本成分配方：30 g/L 蔗糖+300 mg/L 8-HQ+300 mg/L Al2(SO4)3，在此基礎(chǔ)上，添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑細(xì)胞分裂素類(lèi)物質(zhì)6-BA和 GA3，設(shè)置7個(gè)處理如表1。將1.1中采摘好的蠟梅枝條以瓶插的形式，插于裝有150 mL催花液的500 mL培養(yǎng)瓶中，放置于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，瓶插期間室溫15～20 ℃，相對(duì)濕度60%～70%，每個(gè)處理設(shè)置5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3～5枝切花（每個(gè)重復(fù)花蕾總數(shù)約40個(gè)，花枝數(shù)根據(jù)每花枝花蕾數(shù)而定）。每隔2 d更換1次瓶插液，每天進(jìn)行表型觀察，主要為瓶插壽命、花朵開(kāi)放率、催花時(shí)間、最大花徑、花枝鮮重變化率；每隔1 d進(jìn)行1次采樣用于生理指標(biāo)測(cè)定，每個(gè)處理中每個(gè)重復(fù)采2朵花混合后進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)3次。測(cè)定指標(biāo)包括可溶性糖和丙二醛（MDA）的含量以及超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化物酶（POD）活性。

表1 各處理成分配比設(shè)計(jì)表Table 1 Design of composition ratio of each treatment

1.2.2形態(tài)觀測(cè)指標(biāo)的測(cè)定

1）開(kāi)始瓶插后，每天稱量切枝質(zhì)量[14]，按公式（1）計(jì)算花枝鮮質(zhì)量變化率（X）。式中：Gn為當(dāng)天的花枝質(zhì)量，Gn+1為后1 d的花枝質(zhì)量，n≥ 1。

2）蕾的花瓣微張，可見(jiàn)花蕊，即算開(kāi)放，如圖1b，按公式（2）計(jì)算花朵開(kāi)放率（F）

式中：S為開(kāi)放的花蕾數(shù)，C為初始總花蕾數(shù)。

2020年2月公布分級(jí)結(jié)果，2020年分級(jí)包含的年份是2018、2019、2020、2021、2022。為了監(jiān)控葡萄酒品質(zhì)的保持，在分級(jí)包含的5個(gè)年份裝瓶前進(jìn)行兩次隨機(jī)檢查。若質(zhì)量沒(méi)有達(dá)標(biāo)，已獲得評(píng)級(jí)的酒莊可能會(huì)被取消分級(jí)。

3）以瓶插日起至剩余開(kāi)花數(shù)占總花蕾30%時(shí)的瓶插天數(shù)為瓶插壽命。

4）以瓶插日起至開(kāi)放花蕾數(shù)占總花蕾10%時(shí)的瓶插天數(shù)為催花時(shí)間。

5）瓶插期間每天對(duì)開(kāi)花的各處理分別取6～10朵開(kāi)放至最大的花，通過(guò)游標(biāo)卡尺（精確到0.05 mm）準(zhǔn)確量取外層花瓣的最大花徑，計(jì)算出每個(gè)處理每天的平均最大花徑。

1.2.3 相關(guān)生理指標(biāo)的測(cè)定

1）可溶性糖含量的測(cè)定 使用植物可溶性糖含量測(cè)試盒（比色法），進(jìn)行測(cè)定。稱取新鮮的待測(cè)樣本0.1 g，按照m待測(cè)樣本質(zhì)量∶V蒸餾水=1∶10比例研磨成勻漿液，離心稀釋制備上清液備用。按說(shuō)明書(shū)加入試劑充分混勻，置沸水浴反應(yīng)10 min，冷卻后放入1 cm光徑4 mm內(nèi)徑比色皿，分光光度計(jì)波長(zhǎng)620 nm，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。

2）MDA含量的測(cè)定 使用MDA測(cè)定試劑盒（TBA法），進(jìn)行測(cè)定。按說(shuō)明書(shū)加入試劑，離心后開(kāi)蓋煮沸40 min，取出用流水沖涼冷卻，進(jìn)行

3 500～4 000 r/min，離心10 min。取上清液進(jìn)行吸光度值的測(cè)定。

3）SOD活性的測(cè)定 使用總超氧化物歧化酶測(cè)試盒（羥胺法），進(jìn)行測(cè)定。樣品稱取0.1 g，制備成4%的勻漿離心后取上清液。按說(shuō)明書(shū)加入試劑混勻，室溫放置10 min，后在波長(zhǎng)550 nm處，用1 cm光徑比色杯，雙蒸水調(diào)零，進(jìn)行比色。

4）POD活性的測(cè)定 使用南京建成公司POD測(cè)定試劑盒（測(cè)植物）（比色法），在冰水浴條件下制備組織勻漿液，離心后取上清液備用。按說(shuō)明書(shū)加入試劑混勻，離心10 min，取上清液于420 nm處，用1 cm光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)方法

用Excel 2007進(jìn)行原始數(shù)據(jù)整理及制圖, 用SPSS 19.0軟件進(jìn)行One Way Anova方差分析及Duncan 法檢驗(yàn)顯著性差異。

2 結(jié)果及分析

2.1 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝開(kāi)花相關(guān)形態(tài)指標(biāo)的影響

由圖2～3可知，在基本催花保鮮液的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的GA3和6-BA，在第2天時(shí)蠟梅切枝的觀賞品質(zhì)均有較好的效果。CK的切枝開(kāi)花少，加入催花保鮮液基本配方（JS1）的切枝開(kāi)花較多，特別是添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的切枝開(kāi)花率有更高的提升，說(shuō)明植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的添加的催花保鮮劑能夠有效促進(jìn)蠟梅切枝開(kāi)花。

圖2 蠟梅切枝在催花保鮮劑中瓶插后第2天開(kāi)花情況對(duì)比Fig. 2 The flowering conditions of cut branches in plant growth regulator on the second day

由表2可知，CK的瓶插壽命最短，為4.33 d；而JS5的瓶插壽命最長(zhǎng)，約10 d，瓶插壽命較CK延長(zhǎng)了6～7 d的時(shí)間，效果最佳；JS6的插壽命僅次于JS6，為9 d左右。同時(shí)，除JS1外，其他處理組的開(kāi)花率均顯著高于CK（P＜0.05），其中，JS5的開(kāi)花率最高（69.46%），是CK的3.04倍。此外，JS5的蠟梅切枝的平均最大花徑顯著高于CK（P＜0.05），增長(zhǎng)了76.64%，催花時(shí)間顯著低于其他所有處理組（P＜0.05）。因此，JS5即加入了120 mg/L GA3和120 mg/L 6-BA的瓶插液在瓶插壽命、開(kāi)花率、催花時(shí)間3個(gè)形態(tài)觀測(cè)指標(biāo)中表現(xiàn)較好。

表2 不同激素濃度配比處理組的瓶插壽命、開(kāi)花率、最大花徑和催花時(shí)間Table 2 Vase life, bloomed ratio, max flower diameter and flower forcing time of bottle insert under the treatment of different hormone concentration ratio

圖3 蠟梅切枝在催花保鮮劑中花蕾開(kāi)放數(shù)量Fig. 3 The number of open flowers of C. praecox in plant growth regulator

2.2 催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝開(kāi)花相關(guān)生理指標(biāo)的影響

2.2.1 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中可溶性糖含量的測(cè)定

由圖4可知，CK蠟梅切枝花瓣中可溶性糖含量隨瓶插天數(shù)增加呈先上升后下降趨勢(shì)，在瓶插的第4天之后，可溶性糖含量逐漸降低；總體來(lái)看，添加了生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理組糖含量均比CK高，且存在顯著差異（P＜0.05）。其中，JS5的可溶性糖含量變化幅度較大且在第10天達(dá)到最高。因此，JS5催花保鮮液對(duì)瓶插過(guò)程中切枝花瓣中的可溶性糖含量影響最大，有效增加了蠟梅切枝中的糖含量，從而延緩植物的衰老。

圖4 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中可溶性糖含量的影響Fig. 4 Effects of different plant hormone vase treatments on soluble sugar content in the petals of cut flowers

2.2.2 不 同 催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝 花 瓣 中MDA含量的影響

由圖5可知，蠟梅切枝在不同催花保鮮劑中瓶插的2～10 d，CK及JS1的MDA含量均較其他處理高，且在后期呈上升趨勢(shì)，表明JS1基本催花配方和CK細(xì)胞膜過(guò)氧化損傷較為嚴(yán)重。與CK和JS1相比，JS4、JS5在前8 d的MDA含量變化較小，均是所有處理組中最低的，但在第8天之后迅速升高，表明這2組切花在前期的細(xì)胞過(guò)氧化損傷較低；而JS3、JS6、JS7的MDA含量變化較平穩(wěn)，且在第10天時(shí)時(shí)含量最低的。

圖5 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑瓶插液對(duì)切枝花瓣中MDA含量的影響Fig. 5 Effects of different plant hormone vase treatments on MDA content content in the petals of cut flowers

2.2.3 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中超氧化物歧化酶活性的影響

由圖6可知，CK的蠟梅切枝內(nèi)SOD隨瓶插天數(shù)增加呈下降的趨勢(shì)，表明其抗氧化能力越來(lái)越弱，花枝加速衰老；其余處理組中JS4、JS5的SOD活性隨瓶插天數(shù)增加而先在第2～6天降至最低，隨后在第6～10 天升至最高。

圖6 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中超氧化物歧化酶活性的影響Fig. 6 Effects of different plant hormone vase treatments on SOD total activity content in the petals of cut flowers

2.2.4 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中過(guò)氧化物酶活性的影響

由圖7可知，隨瓶插天數(shù)增加，蠟梅切枝花瓣中的POD活性總體變化趨勢(shì)為逐漸增加。說(shuō)明所有處理均提高了POD酶的活性，增強(qiáng)了抗衰老能力。而其中JS2、JS4、JS5和JS7的POD活性上升幅度較大，抗衰老能力迅速增加，在第10天達(dá)到峰值，在蠟梅切枝衰老后期能有效地清除自由基，從而延緩衰老。而CK中的變化則較為平緩，抗氧化能力沒(méi)有明顯提高。

圖7 不同催花保鮮劑對(duì)蠟梅切枝花瓣中過(guò)氧化物酶活性的影響Fig. 7 Effects of different plant hormone vase treatments on POD activity content in the petals of cut flowers

3 結(jié)論與討論

切花采后開(kāi)花及衰老所發(fā)生的一系列生理和生化變化不同于在完整植物上的開(kāi)花與衰老[15]。在激素水平上來(lái)看，切花體內(nèi)原本處于平衡狀態(tài)的激素環(huán)境，在瓶插過(guò)程被打破，細(xì)胞分裂素（CTK）類(lèi)、GA3類(lèi)等延緩衰老的這一類(lèi)激素合成量在逐漸減少，而脫落酸（ABA）等促進(jìn)衰老的激素含量則在逐漸的增多。在切花催花保鮮液中，其他切花上均有研究表明適宜濃度的GA3處理[16-18]和6-BA[19-21]可延長(zhǎng)瓶插壽命、促進(jìn)開(kāi)花，對(duì)切花催花保鮮效果及生理特性均有較好的影響。并且盛愛(ài)武等[22]也通過(guò)處理證實(shí)，可利用CTK類(lèi)及GA3處理蠟梅切枝，達(dá)到保鮮促進(jìn)開(kāi)花的效果，這為我們的研究提供了前期理論支持。因此，本研究通過(guò)研究7種不同濃度配比的GA3與6-BA的催花保鮮液對(duì)其外觀形態(tài)和生理特性的影響，發(fā)現(xiàn)JS5（30 g/L 蔗糖 +300 mg/L 8-HQ +300 mg/L Al2(SO4)3+GA3120 mg/L +6-BA 120 mg/L）在形態(tài)方面效果最佳，瓶插壽命約為10 d；開(kāi)花率最高（69.46%）；最大開(kāi)花直徑為1.89 cm，與CK相比增大76.64%；催花時(shí)間最短（2 d）。在前人的研究中，濃度蔗糖30 g/L+赤霉素150 mg/L的配比，能夠顯著的提高迎春切枝的開(kāi)花量，催花效果較為顯著，這與本研究得出的最優(yōu)配方120 mg/L GA3的濃度是接近的，但周琦[10]曾做過(guò)關(guān)于催花保鮮技術(shù)在梅花切枝切采后的應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)，添加了10 mg/L GA3和50 mg/L GA3催花液處理的催花保鮮效果較好，這與本研究中的濃度則相差較大，可能是因?yàn)橹参锊煌?，并且因其切枝的長(zhǎng)短、粗細(xì)、花量不同，催花保鮮過(guò)程中每種植物的開(kāi)花對(duì)赤霉素濃度的需求不同；并且每種試劑的濃度配比不同，效果也有所不同。對(duì)于蠟梅切枝的催花保鮮劑方面尚無(wú)前人研究，但在保鮮劑方面，章志紅等[23]認(rèn)為2 000 mg/L維生素E對(duì)蠟梅切花的保鮮作用最好，最大花徑比CK花徑促進(jìn)了76.5%，開(kāi)花率在60%以下，這一結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)相比，花徑增加率、開(kāi)花率均低于本試驗(yàn)結(jié)果，表明本研究中催花保鮮劑的保鮮作用較好，且兼顧催花的效果。

在生理方面，JS5有效緩解了可溶性糖的降解，則提高了細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，改善了花枝內(nèi)部環(huán)境，提高了蠟梅切枝催花的開(kāi)花品質(zhì)。JS5可溶性糖含量隨瓶插天數(shù)增加呈先上升后下降再上升的趨勢(shì)，可溶性糖含量的這一變化結(jié)果與在梅花[10]和切花菊[11]上是一致的，在催花和瓶插過(guò)程中由于呼吸強(qiáng)度增大，體內(nèi)可溶性糖類(lèi)的消耗也逐漸增加，GA3和6-BA的添加可以通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境從而達(dá)到減緩切花催花過(guò)程中的物質(zhì)消耗的目的，延緩衰老癥狀的出現(xiàn)。MDA含量，JS5的波動(dòng)幅度為最小，最有效的維持了細(xì)胞膜的穩(wěn)定性；而SOD活性呈“U”型變化，前期下降這一變化可能是植物切枝在采后保護(hù)自身的應(yīng)激反應(yīng)，而后幾天又上升為最高這一過(guò)程則是在瓶插液的作用下增強(qiáng)了活性；POD酶活性的變化說(shuō)明JS5中抗氧化能力得到明顯提升，衰老速度會(huì)相應(yīng)減慢，這與在切花菊[11]上的研究是一致的。