祖珍玉羅 敏*申?yáng)|翔張 科李軍鵬陳 潔吳 琳

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510000；2.中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，廣州 510000)

宮腔粘連(intrauterine adhesions，IUA)主要由外傷或手術(shù)引起的子宮內(nèi)膜損傷，導(dǎo)致宮腔部分或完全閉塞，并伴有進(jìn)行性纖維化嚴(yán)重的宮腔粘連，可能導(dǎo)致不孕、反復(fù)流產(chǎn)、腹痛和其他不良妊娠結(jié)局[1－3]。產(chǎn)后刮宮術(shù)最容易導(dǎo)致IUA的發(fā)生，臨床90%的IUA與其相關(guān)[4]。宮腔粘連的形成涉及一系列復(fù)雜的機(jī)制。在激素刺激下，正常子宮內(nèi)膜在整個(gè)生殖周期中都表現(xiàn)出從基底層再生功能層的能力[5]。一旦子宮內(nèi)膜受損而無(wú)法修復(fù)，子宮腔內(nèi)形成纖維粘連，粘連性結(jié)締組織缺乏血液循環(huán)，形成動(dòng)脈纖維化伴血管閉塞性損傷，導(dǎo)致局部缺氧壞死，從而影響著床和妊娠[6－9]。此外，細(xì)胞外基質(zhì)的內(nèi)穩(wěn)態(tài)被破壞將會(huì)產(chǎn)生異常的炎癥反應(yīng)，也會(huì)降低子宮內(nèi)膜容受性[10－12]。IUA治療的主要目的是重建宮腔并恢復(fù)子宮內(nèi)膜功能，然而對(duì)于基底層嚴(yán)重受損和功能性子宮內(nèi)膜喪失的中重度IUA，由于當(dāng)前研究缺乏高效穩(wěn)定且符合臨床病理特征的IUA動(dòng)物模型，子宮內(nèi)膜再生仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。

目前IUA建模方法包括各種自制刮匙和手術(shù)刀造成的機(jī)械損傷、電刀和雙向電極造成的電燒傷、酒精造成的化學(xué)損傷和細(xì)菌脂多糖造成的感染損傷[13－14]。這些造模方法的損傷部位不同，損傷程度不一，造模后的效果評(píng)價(jià)也無(wú)固定的標(biāo)準(zhǔn)。另外，這些模型的建立涉及子宮外漿膜層和肌層的穿透，可能會(huì)導(dǎo)致子宮全層損傷，這與典型臨床因素引起的IUA病理特征不同。在本研究中我們采用乙醇灌注、100℃沸水、機(jī)械損傷和機(jī)械損傷合并感染(宮腔留置LPS棉線)的方法建立新西蘭大白兔IUA模型，并從形態(tài)學(xué)和病理組織學(xué)方面對(duì)模型的有效性和行為表征進(jìn)行了優(yōu)化比較和評(píng)價(jià)，同時(shí)檢測(cè)造模后其對(duì)子宮內(nèi)膜容受性和生育力的影響，旨在建立穩(wěn)定高效符合臨床IUA病理特征的IUA動(dòng)物模型從而為探討IUA的損傷修復(fù)及防治機(jī)制提供初步依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)健康成年未孕雌性新西蘭大白兔125只，普通級(jí)健康成年雄性新西蘭大白兔8只，兔齡6~8周，體重2.4~2.6 kg，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(粵)2019-0023]。分籠飼養(yǎng)，使用標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其間自由攝食和飲水，室溫(22±2)℃，濕度45%~65%，通風(fēng)良好，定期進(jìn)行14 h∶10 h的光暗循環(huán)。兔子宮組織取材和相關(guān)實(shí)驗(yàn)于中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行[SYXK(粵)2019-0100]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格按照3R原則給予人道主義關(guān)懷，通過(guò)中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查(2019102502)。

1.2 主要試劑與儀器

脂多糖(LPS，Sigma，美國(guó))；Masson染色試劑盒(Sigma，美國(guó))；BX-51顯微鏡系統(tǒng)及數(shù)字圖像采集系統(tǒng)(Olympus，日本)；計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)Image-ProPlus6.0(SilverSpring，美國(guó))等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 脂多糖手術(shù)縫線制備

稱(chēng)取0.6 mg細(xì)菌脂多糖溶于100 mL無(wú)菌生理鹽水中，配成濃度為6 mg/L的脂多糖溶液，將其置于4℃冰箱中保存，將0號(hào)醫(yī)用無(wú)菌手術(shù)縫線(10 cm)在使用前1 d浸泡在LPS生理鹽水中24 h。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組及模型的制備

選用100只健康雌性普通級(jí)新西蘭大白兔并將其隨機(jī)分為假手術(shù)組(I組)、機(jī)械損傷組(II組)、熱損傷組(III組)、化學(xué)損傷組(IV組)和機(jī)械感染雙損傷組(V組)，每組20只；余25只雌兔隨機(jī)分為假手術(shù)組(I組)、機(jī)械損傷組(II組)、熱損傷組(III組)、化學(xué)損傷組(IV組)和機(jī)械感染雙損傷組(V組)，每組5只。后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在其發(fā)情期進(jìn)行。成年雌性新西蘭白兔耳緣靜脈注射20%烏拉坦，劑量為5 mL/kg，所有手術(shù)都由同一個(gè)研究者在無(wú)菌條件下完成。為了最大限度地減少偏差，子宮角被隨機(jī)分配進(jìn)行處理。具體操作步驟如下:麻醉后置于仰臥位，下腹刮毛，用1%碘酊消毒。確認(rèn)充分麻醉后，在下腹正中縱切口2 cm進(jìn)入腹腔，找到雙側(cè)子宮，根據(jù)分組給與相應(yīng)處理后縫合子宮切口和腹部切口。假手術(shù)組:打開(kāi)腹腔后不對(duì)子宮作任何處理，關(guān)腹。機(jī)械損傷組:首先在一側(cè)子宮靠近卵巢端中下1/3處行0.5 cm縱切口手術(shù)，然后用8 mm的子宮內(nèi)膜刮匙器從4個(gè)不同方向(前、后、左、右)搔刮子宮中上2/3處的子宮內(nèi)膜，當(dāng)宮腔內(nèi)壁變得粗糙有顆粒感時(shí)，停止刮宮；機(jī)械損傷合并感染(雙重?fù)p傷)雙損傷IUA模型按Xiao等[15]研究方法，機(jī)械損傷后兔子宮腔留置LPS棉線2 d；熱損傷組IUA模型按Xu等[16]研究方法，采用100℃熱水損傷一側(cè)宮腔15 s后，用生理鹽水沖洗腹膜腔和宮腔；化學(xué)損傷組:將95%的乙醇輕輕注入一側(cè)子宮，損傷30 s后用生理鹽水沖洗腹膜腔和宮腔；各造模組對(duì)側(cè)子宮均不做任何處理。造模術(shù)后，給予每組每只新西蘭白兔每日十萬(wàn)IU青霉素，連續(xù)腹腔注射3 d。

1.3.3 觀察指標(biāo)

(1)病理組織大體形態(tài)觀察及切片染色

各組新西蘭大白兔在造模4、7、14和28 d后，開(kāi)腹取出子宮并分離，首先觀察其大體形態(tài)，是否有粗糙、腫脹、變窄、彈性喪失和充血等形態(tài)學(xué)改變。然后將分離出的子宮置于4%多聚甲醛浸泡固定后標(biāo)準(zhǔn)石蠟包埋，切成5μm切片以備后續(xù)染色。

(2)子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量檢測(cè)

兔子宮組織樣本的石蠟切片行HE染色。將染色的切片在室溫下風(fēng)干并用中性樹(shù)脂固定，用顯微鏡觀察子宮形態(tài)，計(jì)算腺體數(shù)量，并在每張切片上隨機(jī)選擇至少5個(gè)高倍鏡視野圖像，計(jì)算平均值。

(3)子宮內(nèi)膜纖維化程度檢測(cè)

兔子宮組織樣本的石蠟切片行Masson染色。使用Masson染色試劑盒對(duì)石蠟包埋的載玻片進(jìn)行染色。然后用顯微鏡觀察纖維化，應(yīng)用圖像處理軟件Image-ProPlus 6.0計(jì)算每個(gè)視野中子宮內(nèi)膜間質(zhì)纖維化(藍(lán)色膠原纖維)面積與每個(gè)視野子宮內(nèi)膜間質(zhì)及腺體總面積的比值，并在每張切片上隨機(jī)選擇至少5個(gè)高倍鏡視野圖像，計(jì)算平均值。

(4)子宮內(nèi)膜厚度檢測(cè)

兔子宮組織樣本的石蠟切片行HE染色和Masson染色。采用圖像處理軟件Image-ProPlus 6.0測(cè)量子宮內(nèi)膜厚度，計(jì)算平均值。

(5)生殖功能檢測(cè)

評(píng)價(jià)經(jīng)過(guò)四種造模方法損傷過(guò)的兔子宮的生殖功能，通過(guò)檢測(cè)各造模組在妊娠率和增加胚胎著床數(shù)方面的變化來(lái)評(píng)估受損雌兔子宮在接受受精卵和為發(fā)育中的胎兒提供足夠的營(yíng)養(yǎng)，并支持胚胎正常發(fā)育的功能。造模后第14天，將假手術(shù)組、機(jī)械損傷組、機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組每組各5只雌兔與雄兔合籠交配，在妊娠中期(7~9 d)處死雌兔，檢查并記錄各組子宮的妊娠率及胚胎著床數(shù)目。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用IBM SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有的測(cè)量數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用雙尾非配對(duì)和t檢驗(yàn)進(jìn)行配對(duì)比較，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Dunnett檢驗(yàn)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，數(shù)據(jù)條形圖采用GrapgPad Prism 8.0軟件進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果

2.1 子宮組織學(xué)損傷情況

觀察各組子宮腔狹窄及出血水腫情況。假手術(shù)組兔宮腔形態(tài)規(guī)則，子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整。損傷4 d后，化學(xué)損傷和熱損傷組兔宮腔形態(tài)規(guī)則，間質(zhì)出現(xiàn)出血、水腫，其余兩組宮腔有未見(jiàn)明顯腫脹或充血；損傷后7 d，四組兔子宮壁均有粗糙和有粘連帶出現(xiàn)，化學(xué)損傷和熱損傷組兔部分宮腔縮小變窄；損傷后14 d后，機(jī)械損傷組兔宮腔基本恢復(fù)正常形態(tài)，未見(jiàn)出血水腫，機(jī)械感染雙損傷組兔子宮壁粗糙比較明顯，化學(xué)損傷組部分宮腔水樣擴(kuò)張，宮腔形態(tài)改變；損傷28 d后，除熱損傷組外，其余3組兔子宮外觀基本恢復(fù)，子宮壁光滑無(wú)粗糙感，出血水腫基本消失，熱損傷組兔部分子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)壞死脫落(圖1)。

圖1 各組造模后子宮大體形態(tài)學(xué)變化Figure 1 Gross morphological changes of the uterus after modeling in each group

2.2 HE染色評(píng)價(jià)損傷后子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目變化

HE染色后，對(duì)照組子宮的漿膜、肌肉、子宮內(nèi)膜和上皮層均正常，組織結(jié)構(gòu)連續(xù)完整。上皮細(xì)胞多為單層柱狀，子宮內(nèi)膜層富含管狀腺體，間質(zhì)細(xì)胞均勻分布。四組模型子宮內(nèi)膜間質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松，粘膜下纖維化，可見(jiàn)散在的柱狀細(xì)胞，腺體較少，部分間質(zhì)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并伴有不同程度的充血和出血。機(jī)械損傷組和機(jī)械感染雙損傷組子宮內(nèi)膜功能層均有少量腺體再生，化學(xué)損傷組和熱損傷組均未觀察到這種現(xiàn)象(圖2)。在造模后4、7、14和28 d測(cè)定各組模型的子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目。術(shù)后4、7和14 d，機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組相對(duì)于假手術(shù)組的子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目逐漸減少，均具有顯著性差異(P<0.05)；機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組造模28 d，相較于14 d的腺體數(shù)目增多(P<0.01)，而熱損傷組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目仍繼續(xù)下降，均具有顯著性差異(P<0.001)；與假手術(shù)組相比，機(jī)械損傷組的腺體數(shù)目略有減少，無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖3)。

圖2 各造模組兔子宮內(nèi)膜腺體情況Figure 2 Intrauterine gland conditions of rabbits in each model group

圖3 各組造模后不同時(shí)間子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目分析比較Figure 3 Number of endometrial glands in each group at different time after modeling was analyzed and compared

2.3 Masson染色評(píng)價(jià)損傷后纖維化增生的變化

正常子宮的上皮、血管、腺體和肌肉染成紅色，而子宮內(nèi)膜和子宮漿膜染成淺藍(lán)色，表明膠原纖維水平較低。四組模型子宮內(nèi)深藍(lán)色染色面積均有擴(kuò)大，表明膠原纖維增生。有部分子宮內(nèi)膜碎片散落宮腔內(nèi)，間質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，膠原纖維分布不均(圖4)。在造模后4、7、14和28 d測(cè)定各組模型的纖維化面積比率。術(shù)后14 d，機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組子宮內(nèi)膜纖維化面積比逐漸增高，均具有顯著性差異(P<0.05)；機(jī)械感染雙損傷組和化學(xué)損傷組在造模后28 d，纖維化面積比率相較于14 d有所降低(P<0.01)，而熱損傷組纖維化面積比仍繼續(xù)增高，差異具有顯著性(P<0.001)；與假手術(shù)組相比，機(jī)械損傷組的纖維化面積比略有增高，無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖5)。

圖4 各造模組兔子宮內(nèi)膜纖維化情況Figure 4 Intrauterine membrane fibrosis of rabbits in each model group

圖5 各組造模后不同時(shí)間子宮內(nèi)膜纖維化面積比分析比較Figure 5 Analysis and comparison of area ratio of endometrial fibrosis in different time after modeling in each group

2.4 HE染色和Masson染色評(píng)價(jià)損傷后子宮內(nèi)膜厚度變化

正常子宮內(nèi)膜表面呈波浪形，子宮黏膜下層和基底層呈圓形或橢圓形。四組損傷模型兔子宮宮腔形態(tài)不規(guī)則，有擴(kuò)張或萎縮，部分淺肌層缺失，腺體稀疏，部分損傷部位有脫落的內(nèi)膜碎片(圖6)。在造模后4、7、14和28 d測(cè)定各組模型的子宮內(nèi)膜厚度。術(shù)后14 d，機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組子宮內(nèi)膜厚度均有變薄(P<0.05)；化學(xué)損傷組在造模后28 d，內(nèi)膜厚度相較于14 d有增厚(P<0.01)，而熱損傷組內(nèi)膜厚度仍繼續(xù)下降，具有顯著性差異(P<0.001)；與假手術(shù)組相比，機(jī)械感染雙損傷組和機(jī)械損傷組的內(nèi)膜厚度略有下降，無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖7)。

圖6 各造模組兔子宮內(nèi)膜厚度情況Figure 6 Intrauterine film thickness of rabbits in each model group

圖7 各組造模后不同時(shí)間子宮內(nèi)膜厚度分析比較Figure 7 Analysis and comparison of endometrial thickness of each group at different time after modeling

2.5 生殖功能檢測(cè)研究

評(píng)價(jià)假手術(shù)組、機(jī)械損傷組、機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組五組模型雌兔子宮內(nèi)膜的生殖功能變化(圖8)。根據(jù)子宮大體形態(tài)學(xué)觀察及HE和Masson染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)造模14 d后兔子宮內(nèi)膜損傷程度較接近于中重度IUA病理特征，為進(jìn)一步驗(yàn)證，在造模14 d后，將雌兔、雄兔進(jìn)行合籠交配，并計(jì)算妊娠率和子宮胚胎著床數(shù)目。結(jié)果顯示與假手術(shù)組相比，化學(xué)損傷組和熱損傷組兔子宮胚胎著床數(shù)目減少，妊娠率下降，均具有顯著性差異(P<0.05)；而機(jī)械感染雙損傷組和機(jī)械損傷組兔子宮的胚胎著床數(shù)目和妊娠率相比于假手術(shù)組略有下降，無(wú)顯著差異(P>0.05)；熱損傷組子宮胚胎植入數(shù)目和妊娠率相較于假手術(shù)組顯著下降(P<0.01)(圖9)。

圖8 各組造模后14 d的兔子宮胚胎植入情況Figure 8 Implantation of rabbit uterine embryos with different modeling methods

圖9 各組造模7 d后兔子宮妊娠率及胚胎著床數(shù)目分析比較Figure 9 Analysis and comparison of pregnancy rate and number of embryo implantation in each group after modeling

3 討論

近年來(lái)，不孕不育的發(fā)病率逐年增高，在臨床中因子宮內(nèi)膜損傷引起的宮腔纖維化和粘連是引發(fā)不孕不育的主要原因，子宮內(nèi)膜再生已成為婦科和生殖醫(yī)學(xué)亟待解決的重要難題。當(dāng)前很多研究在不同的子宮損傷模型中通過(guò)使用干細(xì)胞和藥物療法對(duì)其治療效果進(jìn)行了評(píng)估，然而由于缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的模型導(dǎo)致療效的客觀評(píng)價(jià)和定量分析模式很難統(tǒng)一，因此建立穩(wěn)定有效的子宮損傷IUA動(dòng)物模型非常必要且迫切。

許多研究人員嘗試使用各種方法構(gòu)建IUA動(dòng)物模型，有通過(guò)在宮腔內(nèi)放置銅線的方法，也有通過(guò)細(xì)菌性脂多糖棉線宮腔感染的方法模擬建立子宮內(nèi)膜損傷模型，但尚未找到最佳高效的方案建立符合臨床IUA病理特征的動(dòng)物模型[17]。本研究通過(guò)優(yōu)化比較新西蘭大白兔不同宮腔粘連模型的相關(guān)病理指征，并從生殖功能方面評(píng)價(jià)其對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證其有效性和安全性，以探討更符合人類(lèi)IUA臨床病理特征的穩(wěn)定動(dòng)物模型，為后續(xù)研究其發(fā)病機(jī)制及治療策略提供參考。

IUA是由于子宮內(nèi)膜損傷導(dǎo)致子宮內(nèi)膜變薄、纖維化和粘連形成而引起的。子宮內(nèi)膜厚度是判斷IUA最直觀的方法[18]。腺體細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞在子宮內(nèi)膜增殖期起著重要作用。正常子宮內(nèi)膜受損或周期性脫落后，開(kāi)始一系列自我修復(fù)過(guò)程，這涉及子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分化及纖維化因子和抗纖維化因子的平衡機(jī)制[15]。因此子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)目及纖維化比率是本研究中主要觀察的指標(biāo)。另外，本研究中所用的新西蘭大白兔子宮與一般家畜不同，兩個(gè)子宮是完全獨(dú)立的，無(wú)子宮角和子宮體之分，左右各一個(gè)子宮，各自有一個(gè)子宮頸，分別開(kāi)口于陰道基部，兩子宮頸間有間膜固定[16]。由于是兩個(gè)完全獨(dú)立的子宮，而本研究目的是比較和評(píng)價(jià)經(jīng)四種不同損傷方法處理的新西蘭大白兔宮腔粘連IUA模型，并設(shè)置假手術(shù)組進(jìn)行對(duì)照，所以在造模時(shí)選擇雌兔的隨機(jī)一側(cè)子宮進(jìn)行不同干預(yù)處理，對(duì)側(cè)子宮僅作自身對(duì)照并未檢測(cè)相關(guān)數(shù)據(jù)。

本研究從形態(tài)學(xué)、病理組織學(xué)方面對(duì)化學(xué)損傷、熱損傷、機(jī)械損傷和機(jī)械損傷合并感染(雙損傷)四種損傷方法誘導(dǎo)的兔IUA模型進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，在術(shù)后4、7 d，化學(xué)損傷組和熱損傷組兔子宮宮腔出現(xiàn)輕微出血水腫，機(jī)械損傷和感染雙損傷組病理組織學(xué)形態(tài)方面基本無(wú)變化，術(shù)后14 d，與假手術(shù)組對(duì)比，機(jī)械感染雙損傷組、化學(xué)損傷組和熱損傷組子宮內(nèi)膜厚度均變薄(P<0.05)，化學(xué)損傷組和熱損傷組纖維化率增高、腺體數(shù)目減少(P<0.05)，機(jī)械損傷和感染雙損傷腺體數(shù)目及纖維化面積比變化不明顯。為了進(jìn)一步探討四種造模方法對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響，本研究在造模后14 d進(jìn)行了生殖功能實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明相對(duì)于假手術(shù)組，化學(xué)損傷組和熱損傷組妊娠率和子宮胚胎著床數(shù)目均有降低(P<0.05)，其中熱損傷組妊娠率和子宮胚胎著床數(shù)目急劇下降(P<0.001)。機(jī)械損傷組和機(jī)械感染雙損傷妊娠率及子宮胚胎著床數(shù)目與假手術(shù)組相比基本無(wú)差異，這說(shuō)明機(jī)械損傷及感染雙損傷程度較輕，并未嚴(yán)重?fù)p傷子宮內(nèi)膜進(jìn)而導(dǎo)致妊娠率及子宮胚胎著床數(shù)目的顯著下降；而化學(xué)損傷和熱損傷這兩種造模方法都在不同程度上損傷了子宮內(nèi)膜的生育功能。

LPS經(jīng)常用于肺炎、膿毒癥等疾病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建，也被用于構(gòu)建子宮內(nèi)膜炎動(dòng)物模型[19]。本研究初步推測(cè)損傷和炎癥是IUA最常見(jiàn)的病因，因此機(jī)械損傷和機(jī)械感染雙損傷模型應(yīng)該是比較符合臨床病理特征，然而在實(shí)驗(yàn)中卻并未達(dá)到理想穩(wěn)定的損傷效果。Kim等[19]對(duì)此有兩種解釋?zhuān)紫仁菣C(jī)械損傷穩(wěn)定性低，實(shí)驗(yàn)操作人員選擇刮宮的力度、時(shí)間和角度的不一致都可能會(huì)導(dǎo)致?lián)p傷造成的效果不同，通過(guò)這種方法建立的模型受到操作者經(jīng)驗(yàn)、手術(shù)器械和實(shí)驗(yàn)條件的限制。其次是機(jī)械損傷和LPS引起的炎癥反應(yīng)會(huì)刺激子宮內(nèi)膜的自我修復(fù)機(jī)制，由于自身修復(fù)作用使模型的準(zhǔn)確性受到一定的影響。

熱損傷法引起的溫度升高對(duì)子宮內(nèi)膜的功能層和基底層均造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜細(xì)胞蛋白的凝固，繼而壞死、脫落和纖維化，最終導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的缺失，并可能損傷子宮內(nèi)膜肌層，導(dǎo)致出血和周?chē)鷫乃?。這與IUA臨床病理特征不符，因此不推薦推廣應(yīng)用。

化學(xué)損傷法中所有乙醇的濃度、用量和灌注的起止時(shí)間是固定的，這保證了模型的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。此外，化學(xué)損傷建立的IUA模型與在臨床IUA中觀察到的的病理特征相似，包括子宮內(nèi)膜變薄，腺體數(shù)量減少、纖維化。后續(xù)的生殖功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示其損傷子宮內(nèi)膜的容受性而導(dǎo)致妊娠率和胚胎著床數(shù)目下降。雖然化學(xué)損傷誘導(dǎo)的IUA模型在臨床上較少見(jiàn)，但從其與臨床IUA病理特征的相似性、實(shí)驗(yàn)操作可控性、模型穩(wěn)定性及可重復(fù)性考慮，可以作為一種穩(wěn)定高效的IUA動(dòng)物模型。

綜上所述，化學(xué)損傷造模法對(duì)子宮內(nèi)膜厚度、腺體數(shù)量和纖維化程度及妊娠率、子宮胚胎著床數(shù)均有一定的影響，同時(shí)可以保留子宮全層結(jié)構(gòu)，這是判斷中重度IUA模型成功與否的最基本的表型指標(biāo)，是一種符合IUA臨床病理特征的動(dòng)物模型，可以為深入研究IUA的發(fā)病及治療機(jī)制提供重要的模型參考。