趙廣西，劉志梅

（1.秦皇島市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北秦皇島 066000；2.秦皇島市食品化妝品稽查支隊(duì)，河北秦皇島 066000）

農(nóng)藥因能有效防治病蟲(chóng)雜草、調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)而成為重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料，但長(zhǎng)期濫用農(nóng)藥，不但污染環(huán)境，而且威脅人體健康。為了準(zhǔn)確對(duì)農(nóng)藥用量進(jìn)行監(jiān)控和評(píng)價(jià)，各個(gè)國(guó)家和組織制定了農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）包含483種農(nóng)藥的7 107項(xiàng)限量指標(biāo)。但農(nóng)藥性質(zhì)不同，食品種類多樣，對(duì)檢測(cè)造成極大的困難，因此建立簡(jiǎn)便、低成本、高靈敏度的檢測(cè)方法非常重要。

檢測(cè)過(guò)程中，前處理十分重要，時(shí)間約占60%。固相萃取法較為常用，但操作煩瑣，且不適用于檢測(cè)復(fù)雜樣品。磁性石墨烯有著絕佳的電學(xué)、光學(xué)、力學(xué)和磁學(xué)性質(zhì)[1-4]以及較大的比表面積[5]，因此石墨烯分散固相萃取成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)[6-8]。

本研究將磁性石墨烯分散固相萃取與超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)合，建立了水果中6種農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法，考察不同的條件對(duì)磁性石墨烯分散固相萃取效率的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-20A液相色譜儀（日本島津公司）、AB5500三重四級(jí)桿質(zhì)譜（美國(guó)AB公司）、Waters UPLC BEH C18-T3色譜柱（150 mm ×2.1 mm，1.7 μm）、氮吹儀（上海安譜公司）、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（上海安譜公司）。

甲醇（色譜純，迪馬公司），乙腈（色譜純，迪馬公司），甲酸（分析純，國(guó)藥試劑公司），實(shí)驗(yàn)用水（美國(guó)Millipore公司超純水裝置制備），抗蚜威、吡蟲(chóng)啉、速滅威、撲滅津、丙草胺以及異丙威均來(lái)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理方法

稱5.0 g樣品，加2.0 g無(wú)水硫酸鈉和10 mL乙腈磷酸溶液（100∶1），勻漿后在-4 ℃下，8 000 r/min離心15 min，取上清液于旋蒸瓶。重復(fù)后合并，45 ℃旋蒸到近干。加2 mL乙腈超聲溶解，再加3 mL乙腈飽和正己烷，渦旋后將上清液轉(zhuǎn)至離心管中，4 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移到盛有20 mg Fe3O4試管中，振蕩8 min，管底放磁鐵聚集石墨烯，棄去上層清液，加5 mL丙酮渦旋，將上清液轉(zhuǎn)到新試管。重復(fù)2次，收集洗脫液氮?dú)獯蹈桑? mL流動(dòng)相溶解。

1.2.2 色譜條件

Waters UPLC BEH C18柱（150 mm ×2.1 mm， 1.7 μm）分離，以0.1%甲酸水溶液（流動(dòng)相A），0.1%甲酸甲醇溶液（流動(dòng)相B）梯度洗脫，流速0.35 mL/min，柱溫40.0 ℃，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）下采用正離子掃描模式進(jìn)行定量分析。

梯度洗脫程序：0～2.0 min，10%B；2.0～9.0 min，90%B；9.0～10.0 min，20% B；10.0～12.0 min，10%B。

1.2.3 質(zhì)譜條件

抗蚜威保留時(shí)間3.22 min，離子對(duì)239/72、239/182；吡蟲(chóng)啉保留時(shí)間3.67 min，離子對(duì)256/175、256/209；速滅威保留5.27 min，離子對(duì)166/94、166/109；異丙威保留6.86 min，離子對(duì)194/95、194/137；撲滅津保留7.42 min，離子對(duì)229/188、229/146；丙草胺保留7.91 min，離子對(duì)312/176、312/252。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸附劑用量

磁性石墨烯的用量是影響效率的重要因素。為研究不同用量對(duì)萃取效率影響，設(shè)定吸附劑為5 mg、10 mg、15 mg、20 mg和35 mg。結(jié)果表明用量在0～20 mg，回收率增加，當(dāng)用量超過(guò)20 mg，回收率略有減低，因此選擇石墨烯用量為20 mg。

2.2 樣液pH

樣液pH值對(duì)萃取效率有著重要影響，對(duì)吸附劑表面的電荷種類、密度及目標(biāo)物存在狀態(tài)有著重要影響，實(shí)驗(yàn)要求分析物以電中性存在，避免吸附劑表面存在的電荷對(duì)吸附過(guò)程的影響。實(shí)驗(yàn)研究pH分別為2.0、4.5、7.0、8.0及10.0時(shí)對(duì)萃取效率影響。結(jié)果表明當(dāng)pH在6.0～8.0時(shí)效率最高。可能是目標(biāo)物在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性下易分解，并且此條件下吸附劑也較穩(wěn)定，因此選擇pH為8.0。

圖1 抗蚜威、吡蟲(chóng)啉、速滅威、異丙威、撲滅津和丙草胺的UPLC-MS/MS色譜圖

2.3 離子強(qiáng)度的確定

鹽濃度也是影響萃取效率的重要因素。實(shí)驗(yàn)對(duì)0%、2%、4%、5%及10%的NaCl系列濃度進(jìn)行研究，結(jié)果表明NaCl的濃度為2%時(shí)萃取效率最高，繼續(xù)增大反而降低?？赡苁请S著NaCl濃度的增高，溶液的離子強(qiáng)度也隨之增加，從而影響了待測(cè)物在溶液和萃取劑間的分配系數(shù)，使有機(jī)物的溶解度降低，有利于目標(biāo)物析出；而濃度過(guò)高，則粘滯阻力影響溶質(zhì)傳質(zhì)速度，目標(biāo)物的擴(kuò)散系數(shù)和萃取能力下降，因此選擇NaCl加2%。

2.4 解吸條件的選擇

目標(biāo)物的洗脫對(duì)回收率的影響十分顯著。比較乙腈、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4種有機(jī)溶劑的解吸效果。結(jié)果表明，丙酮最好，乙腈其次，兩者的解吸效果明顯好于乙醇和乙酸乙酯，因此選取丙酮作為解吸劑。

分別使用2 mL、4 mL、5 mL、8 mL及10 mL丙酮進(jìn)行洗脫實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在2～5 mL時(shí)回收率增加，5 mL時(shí)回收率最大，繼續(xù)增加略有降低。這應(yīng)是隨著萃取量的增加，雜質(zhì)也增加，影響洗脫效率，因此選擇5 mL作為洗脫體積。

2.5 方法學(xué)考察

6種農(nóng)殘的相關(guān)系數(shù)在0.995～0.998，有良好的線性關(guān)系。以信噪比10倍為定量限，結(jié)果表明，6種農(nóng)藥的定量限為2.5～5.5 μg/kg。取葡萄作為基質(zhì)，在0.01 mg/kg、0.05 mg/kg和0.50 mg/kg 3個(gè)添加水平下，每個(gè)濃度6份樣品，回收率范圍為85%～106%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.6%～8.2%。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)探索了以磁性石墨烯為吸附劑，建立分散固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水果中多種農(nóng)藥殘留量的方法。對(duì)石墨烯用量、pH、離子強(qiáng)度以及解吸條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，磁性石墨烯作為固相萃取吸附劑，有良好的富集能力和負(fù)載量。本方法具有良好的線性關(guān)系，回收率高，定量限滿足需求。據(jù)此推斷，石墨烯經(jīng)過(guò)不斷推廣改良之后，將應(yīng)用于更多復(fù)雜基質(zhì)的處理中，具有好的發(fā)展前景。