賈義平，趙 魯，沈俊俊，李翠玲

(1.菏澤市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東 菏澤 274000；2.菏澤市行政審批踏勘評(píng)審中心，山東 菏澤 274000)

豬藍(lán)耳病(豬繁殖與呼吸障礙綜合征，porcine reproductive and respiratory syndrome)是由藍(lán)耳病病毒引起的一種繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)異常的傳染病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為厭食、發(fā)熱、母豬懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎，幼豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病并大量死亡。該病作為豬場(chǎng)常見(jiàn)的傳染病，也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定的B類(lèi)疾病，具有危害范圍廣、感染時(shí)間長(zhǎng)、診斷和治療復(fù)雜、混合感染、隱性帶毒、凈化困難、容易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的損失[1]。藍(lán)耳病野毒一旦大規(guī)模感染，免疫接種則是規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采取的主要手段之一，通過(guò)疫苗毒株的選擇、疫苗質(zhì)量的檢查、制定并執(zhí)行合理的免疫程序，同時(shí)結(jié)合抗體、抗原的持續(xù)監(jiān)測(cè)，不斷調(diào)整免疫程序，確保免疫效果[2]。本案例通過(guò)豬場(chǎng)近一年的臨床及實(shí)驗(yàn)室診斷處理分析，將藍(lán)耳病陰性場(chǎng)轉(zhuǎn)為穩(wěn)定型陽(yáng)性場(chǎng)，成功控制豬場(chǎng)藍(lán)耳病的流行暴發(fā)，具有一定的臨床實(shí)踐意義。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源 2019年8月至2020年4月期間，根據(jù)菏澤市某規(guī)模豬場(chǎng)生產(chǎn)管理情況需要，對(duì)豬群進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查并對(duì)豬群進(jìn)行常見(jiàn)繁殖障礙類(lèi)病原及藍(lán)耳病血清抗體開(kāi)展檢測(cè)工作。2019年9月前豬場(chǎng)藍(lán)耳病未使用任何疫苗預(yù)防。豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬522頭，后備母豬142頭，公豬5頭，分娩室存欄616頭、保育舍存欄1 373頭、肥育舍存欄1 288頭。血清采集后置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑和儀器 RT-PCR檢測(cè)儀、自動(dòng)酶標(biāo)儀、核酸提取試劑盒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)抗體檢測(cè)試劑盒，獸用一次性5毫升采血盛血器，恒溫培養(yǎng)箱，平板震蕩儀等。

1.2 方法

樣品檢測(cè)方法及判定結(jié)果根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

利用Office軟件對(duì)試驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 豬群臨床診斷結(jié)果

2019年9月，發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)配種舍經(jīng)產(chǎn)母豬開(kāi)始出現(xiàn)不食、早產(chǎn)、流產(chǎn)等癥狀，流產(chǎn)母豬主要集中在妊娠后期。通過(guò)對(duì)生產(chǎn)母豬進(jìn)行注射抗生素、黃體酮及飲用電解質(zhì)多維等治療方案后，早產(chǎn)、流產(chǎn)情況未得到有效控制，最終導(dǎo)致9月份流產(chǎn)2窩，10月份流產(chǎn)10窩，11月份流產(chǎn)12窩。保育豬9月份的死亡率也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，12月份死亡率高達(dá)3.13%，肥育豬死亡率從9月份開(kāi)始出現(xiàn)增加趨勢(shì)(圖1和圖2)。

圖1 2019年8月至2020年4月保育豬死亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

圖2 2019年8月至2020年4月肥育豬死亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

病死豬進(jìn)行病理學(xué)解剖，主要為肺臟心葉、尖葉壞死，嚴(yán)重充血、淤血，肺部質(zhì)地變硬；脾臟腫大、邊緣不整齊，局部壞死；腎臟表面顏色蒼白，并有點(diǎn)狀出血點(diǎn)，內(nèi)部腎盂出血；產(chǎn)木乃伊胎兒(圖3—圖6)。

圖3 肺臟

圖4 脾臟

圖5 腎臟

圖6 木乃伊胎

2.2 豬群病原檢測(cè)結(jié)果

采集病死胎兒肺臟、扁桃體、腹股溝淋巴結(jié)組織樣，進(jìn)行繁殖障礙類(lèi)相關(guān)疾病的病原檢測(cè)。結(jié)果顯示，1個(gè)胎兒組織樣為藍(lán)耳病病毒陽(yáng)性，細(xì)小病毒弱陽(yáng)性(表1)。

表1 常見(jiàn)繁殖障礙類(lèi)疾病抗原檢測(cè)結(jié)果

2.3 2019年9月份豬群抗體檢測(cè)分析結(jié)果及綜合處理情況

2019年9月份，采集不同豬群血清檢測(cè)，所有豬群均含有抗體S/P值＞2.5的比例，而6周齡保育豬同時(shí)存在S/P值＜0.4的比例。其中12周齡肥育豬抗體S/P值全部大于2.5，且4～12周齡離散度不斷降低，12周齡離散度也最小為10%，說(shuō)明豬場(chǎng)已經(jīng)進(jìn)入藍(lán)耳病不穩(wěn)定狀態(tài)(圖7)。結(jié)合臨床診斷結(jié)果、病原檢測(cè)結(jié)果及抗體檢測(cè)結(jié)果綜合分析判斷，豬場(chǎng)藍(lán)耳病野毒感染。10月份豬場(chǎng)緊急采取如下措施：1)封群管理：停止外部引種；2)藥物保?。菏褂锰┤f(wàn)菌素、替米考星進(jìn)行全群飼喂；3)疫苗免疫：種豬群一年免疫3次ATCC VR-2332弱毒株活疫苗，仔豬21日齡免疫；4)病情監(jiān)控：繼續(xù)進(jìn)行抗體檢測(cè)；5)豬群管理：全進(jìn)全出，后備母豬需在隔離區(qū)域進(jìn)行疫苗馴化后入群。

圖7 2019年9月份豬群抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 2019年12月份豬群抗體檢測(cè)分析結(jié)果

豬群再次進(jìn)行血清抗體檢測(cè)分析，只有后備母豬、哺乳母豬、6周齡保育豬及12周齡肥育豬存在S/P值＞2.5的比例，肥育豬12月份的死亡率已經(jīng)下降為1.47%。后備母豬、懷孕30～85天及哺乳母豬、4周齡、6周齡、8周齡、10周齡豬群同時(shí)存在S/P值＜0.4的比例，且6周齡保育豬S/P值＜0.4的比例最高為80%(圖8)。

圖8 2019年12月份豬群抗體檢測(cè)結(jié)果

2.5 2020年4月份豬群抗體檢測(cè)分析結(jié)果及綜合防控結(jié)果

豬群繼續(xù)進(jìn)行血清抗體檢測(cè)分析，所有豬群均無(wú)S/P值＞2.5的比例，除了8周齡、10周齡、12周齡豬群外，2020年4月份豬群S/P值在0.4～2.0的占比較2019年9月份提高(圖9)。保育豬及肥育豬的死亡率均整體下降，2020年3月份的死亡率均為最低(圖1和圖2)。因此，豬場(chǎng)已經(jīng)從藍(lán)耳病陰性場(chǎng)過(guò)渡為陽(yáng)性穩(wěn)定場(chǎng)，疫苗毒株已經(jīng)發(fā)揮保護(hù)力，藍(lán)耳病野毒得到控制。

圖9 2020年4月份豬群抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

根據(jù)農(nóng)業(yè)部印發(fā)《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012—2020年)》、《種豬場(chǎng)疫病凈化指導(dǎo)意見(jiàn)(2016—2020年)》等文件精神，藍(lán)耳病防控工作形勢(shì)依舊嚴(yán)峻。作為一種正股單鏈RNA病毒，該病經(jīng)常發(fā)生重組變異，疫苗、野毒基因相互混合感染，導(dǎo)致免疫失敗，尤其藍(lán)耳病活疫苗本身具有一定的毒性，甚至加劇豬場(chǎng)發(fā)病，給該病的預(yù)防和凈化帶來(lái)了挑戰(zhàn)[3-4]。

根據(jù)國(guó)家生豬產(chǎn)業(yè)體系疫病控制研究室在2017年對(duì)24個(gè)省(市)不同規(guī)模的472個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)39 173份血清抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，藍(lán)耳病樣本總陽(yáng)性率為81%，陽(yáng)性豬場(chǎng)占檢測(cè)豬場(chǎng)的99.4%[5]。針對(duì)當(dāng)前藍(lán)耳病的防控形勢(shì)及本豬場(chǎng)已存在藍(lán)耳病野毒較大規(guī)模的感染，難以徹底凈化的實(shí)際情況，故考慮將豬場(chǎng)從陰性場(chǎng)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性場(chǎng)。在豬場(chǎng)藍(lán)耳病疫苗的選擇上，2007年至今市場(chǎng)上有NVDC-JXA1株高致病性滅活疫苗，CH-1R株、R98株、JXA1-R株、HuN4F112株、TJM-F92株等高致病性毒株疫苗，以及較早的CH-1a株經(jīng)典藍(lán)耳病滅活疫苗和ATCC VR-2332株減毒活疫苗，這些疫苗對(duì)控制和減緩疫情蔓延起到了積極的作用[6]。而本次處理方案中，綜合考慮到豬場(chǎng)前期未使用藍(lán)耳病疫苗進(jìn)行預(yù)防及周邊豬場(chǎng)未發(fā)生藍(lán)耳病感染發(fā)病的因素，結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，最終選擇了經(jīng)典ATCC VR-2332毒株疫苗，該毒株相對(duì)來(lái)說(shuō)毒力低、不易發(fā)生變異，在疫苗安全性及穩(wěn)定性等方面具有較好的表現(xiàn)[7]。且在實(shí)際使用過(guò)程中，保育豬及肥育豬的死亡率均出現(xiàn)下降。同時(shí)，豬群的S/P值在0.4～2.0的占比量逐漸提高，疫苗毒株發(fā)揮保護(hù)力，藍(lán)耳病野毒得到控制。本次研究結(jié)果和魏恒慧等在陰性后備種豬使用ATCC VR-2332毒株疫苗轉(zhuǎn)陽(yáng)的情況類(lèi)似，說(shuō)明經(jīng)典毒株能夠有效代替高致病性毒株，且具有較好的免疫記憶效果[8]。呂翠等對(duì)15個(gè)省市291個(gè)豬場(chǎng)6 207份血清進(jìn)行藍(lán)耳病免疫調(diào)查顯示，免疫藍(lán)耳病疫苗的豬場(chǎng)比例為68.29%，免疫疫苗的類(lèi)型共涉及7個(gè)毒株，無(wú)論是中小規(guī)模豬場(chǎng)還是基礎(chǔ)母豬≥5 000頭的豬場(chǎng)，均以ATCC VR-2332毒株免疫率最高[9]。

在抗生素選擇方案上，泰萬(wàn)菌素具有高效、廣譜、不易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，還具有增強(qiáng)非特異性免疫、抑制藍(lán)耳病病毒在巨噬細(xì)胞的復(fù)制、直接殺滅支原體、促進(jìn)生長(zhǎng)的功能，已經(jīng)成為臨床上防治急慢性吸道系統(tǒng)和消化道系統(tǒng)疾病的首選抗生素[10]。李桃梅研究發(fā)現(xiàn)，泰萬(wàn)菌素濃度越高，抑制藍(lán)耳病病毒復(fù)制的能力越強(qiáng)，能夠減少藍(lán)耳病病毒血癥或縮短毒血癥周期，有利于減少感染動(dòng)物的死亡率和減輕臨床癥狀，本案例在使用藍(lán)耳病疫苗的情況下，通過(guò)配合使用替米考星、泰萬(wàn)菌素，有效提升了疫苗使用的效果[11]。

4 結(jié)論

通過(guò)緊急免疫具有較高安全性的藍(lán)耳病經(jīng)典ATCC VR-2332毒株疫苗配合使用泰萬(wàn)菌素，全面加強(qiáng)生物安全，能夠有效控制藍(lán)耳病野毒感染。