吳 競，王科文

[碩騰(上海)企業(yè)管理有限公司，上海 長寧 200050]

豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus, PCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)、圓環(huán)病毒屬(Circoviridae)。圓環(huán)病毒科病毒由單鏈環(huán)形DNA組成，目前已發(fā)現(xiàn)30多種圓環(huán)病毒，包含了目前已知的最小的動(dòng)物DNA病毒，其中，豬圓環(huán)病毒包括豬圓環(huán)病毒1型(PCV1)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬圓環(huán)病毒3型(PCV3)和豬圓環(huán)病毒4型(PCV4)。通常認(rèn)為PCV1對豬是無致病力的；PCV2是導(dǎo)致豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(porcine circovirus associated diseases, PCVADs)的最主要病原，可引起豬圓環(huán)病毒2型系統(tǒng)性疾病(PCV2-SD，之前稱為斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征PMWS)、豬圓環(huán)病毒2型繁殖性疾病(PCV2-RD)、豬皮炎與腎病綜合征(PDNS)、豬圓環(huán)病毒相關(guān)腸炎(PCV2-ED)和相關(guān)肺炎(PCV2-LD)，以及PCV2亞臨床感染(PCV2-SI)，PCVADs是影響全球生豬生產(chǎn)的最重要的經(jīng)濟(jì)病原之一[1]；PCV3于2016年在美國被發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為可引起PDNS、繁殖障礙、心臟和多系統(tǒng)炎癥，目前對該病毒的關(guān)注和研究很多，但直至2020年才在豬原代腎細(xì)胞上成功分離，且關(guān)于其致病性的結(jié)論仍具爭議；PCV4于2019年在中國被發(fā)現(xiàn)，其流行情況和致病機(jī)制仍不清楚[2]。

豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)可引起豬的支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS)，又稱“豬喘氣病”或“豬地方性流行性肺炎(E n z o o t i c pneumonia)”。Mhp是柔膜體綱(Mollicutes)支原體目(M y c o p l a s m a t a l e s)支原體科(Mycoplasmataceae)支原體屬(Mycoplasma)的一員，形態(tài)小且呈多形性，無細(xì)胞壁，雖不屬于細(xì)菌，但在分子生物學(xué)的許多方面與革蘭氏陽性菌相似[3]。Mhp遍布全球養(yǎng)豬業(yè)，致死率低，感染率高，是一種常見的豬慢性接觸性呼吸道傳染病病原，長期影響豬群健康。各階段豬群(哺乳仔豬、保育豬、肥育豬、母豬及公豬)均能感染，臨床特征表現(xiàn)為咳嗽、生長發(fā)育遲緩、飼料效率降低。與感染豬和易感豬的密切接觸是Mhp傳播的主要途徑。Mhp主要黏附在氣管、支氣管和細(xì)支氣管的黏膜表面，有不同的黏附素和脂蛋白參與黏附過程，但其具體的致病機(jī)制和毒力因子尚不完全清楚，與宿主的相互作用及對宿主的免疫調(diào)節(jié)作用還有待進(jìn)一步研究[4]。

豬呼吸道病綜合征(Porcine respiratory disease complex, PRDC)是一種由多種因素引起的豬呼吸系統(tǒng)疾病，以PCV2、Mhp、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine respiratory and reproductive virus, PRRSV)、豬胸膜肺炎放線桿菌等為原發(fā)性病原，副豬嗜血桿菌、多殺性巴氏桿菌、豬鏈球菌等細(xì)菌為繼發(fā)性病原，除此之外，該疾病還與環(huán)境因素、豬場生產(chǎn)管理水平有關(guān)[5]。近年來，規(guī)模化豬場PRDC時(shí)有發(fā)生，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。針對PRDC的防治，一方面可以用抗生素治療，但大量、頻繁地使用抗生素容易加重病原菌的耐藥性，給后續(xù)的疾病防控帶來更多的挑戰(zhàn)；另一方面，疫苗可以誘導(dǎo)較為持久的保護(hù)性免疫，接種疫苗是預(yù)防PRDC的最有效策略。PCV2和Mhp的混合感染是PRDC主要的表現(xiàn)形式之一。接種PCV2疫苗可顯著減少PCVADs的發(fā)生，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫，抵抗PCV2感染，提高豬群生產(chǎn)水平。接種Mhp疫苗可減輕臨床癥狀、減少治療成本、提高日增重和飼料轉(zhuǎn)化率。目前，大多數(shù)的PCV2和Mhp商品化疫苗都是滅活苗，且兩種疫苗免疫時(shí)間相同，通常在仔豬1～3周齡免疫，因此，最好將兩種疫苗聯(lián)合使用。2021年3月，碩騰公司美國查理斯堡生產(chǎn)廠生產(chǎn)的豬圓環(huán)1-2型嵌合體、支原體肺炎二聯(lián)滅活疫苗(商品名：瑞圓舒?)在我國獲得《進(jìn)口獸藥注冊證書》。本文就瑞圓舒?在美國、歐洲、亞洲等地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室和田間條件下的應(yīng)用效果研究進(jìn)行綜述。

1 瑞圓舒?的特點(diǎn)

瑞圓舒?是包含PCV和Mhp兩種抗原的滅活疫苗，但并不是兩種抗原的簡單混合。

首先，PCV2在細(xì)胞內(nèi)增殖滴度的提高是PCV2培養(yǎng)工藝中的瓶頸，全病毒在體外培養(yǎng)的增殖能力較差、滴度不高，生產(chǎn)的批間穩(wěn)定性難以維持。因此，瑞圓舒?中的PCV抗原以PCV1為骨架，保留PCV1中復(fù)制更穩(wěn)定的ORF1基因(編碼Rep蛋白，參與病毒的復(fù)制)，將PCV2的ORF2基因(編碼Cap蛋白)替換PCV1中的ORF2基因，形成嵌合體疫苗，這樣既可以提高病毒體外培養(yǎng)的增殖能力，又可以保持完整的PCV2完整病毒粒子構(gòu)象，滅活后可以保留病毒良好的免疫原性。關(guān)于PCV1-2的嵌合體疫苗，從2003年起就有多篇研究報(bào)道，大多也是利用PCV1和PCV2具有高同源性且PCV1無致病性的特點(diǎn)，以PCV1為骨架，將PCV1和PCV2的Cap蛋白編碼基因互換，構(gòu)建嵌合弱毒或感染性克隆，結(jié)果證明這些弱毒或感染性克隆對試驗(yàn)豬能起到免疫保護(hù)作用，但其安全性未得到大范圍驗(yàn)證。瑞圓舒?中的PCV1-2滅活抗原則充分兼顧了疫苗的有效性和安全性。

其次，在Mhp的培養(yǎng)過程中，通常加入豬血清作為培養(yǎng)基原料，豬血清中富含支原體生長所必需的脂肪酸和膽固醇，比牛血清或馬血清有更高的發(fā)酵滴度。但豬血清中通常會(huì)有PCV2抗體和豐富的血清白蛋白等雜蛋白，一方面使得與PCV2疫苗混合時(shí)中和一部分PCV2抗原，另一方面接種疫苗時(shí)雜蛋白可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激或其他副反應(yīng)。因此，去除雜蛋白和PCV2抗體是PCV2-Mhp二聯(lián)苗研發(fā)中的重大難題。瑞圓舒?擁有先進(jìn)的Mhp發(fā)酵和純化工藝，摒棄Mhp沉淀菌體，高效回收Mhp培養(yǎng)上清液中的抗原成分，有效去除血清雜蛋白，提高了抗原純度，使得安全性更高，更有針對性地刺激免疫應(yīng)答。針對PCV2抗體，使用“蛋白質(zhì)A”層析技術(shù)(蛋白質(zhì)A是金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁成分)，能有效去除肺炎支原體的PCV2抗體(及其他無關(guān)的IgG抗體)，使得Mhp滅活抗原與PCV2滅活抗原完美兼容。

最后，瑞圓舒?選擇MetaStim佐劑來同時(shí)優(yōu)化疫苗中兩種抗原的效力。這是一種水包油佐劑，由角鯊?fù)椤⒉绰迳衬?21和聚山梨酯80組成。該佐劑能增強(qiáng)多種類型抗原的免疫應(yīng)答，包括滅活的細(xì)菌、滅活的病毒和弱毒；能有效提升機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫；佐劑本身無毒性，不損傷抗原；黏度低、通針性好、易注射。

2 瑞圓舒?免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)研究進(jìn)展

瑞圓舒?于2013年在美國及2015年在歐盟上市前后，進(jìn)行了大量免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)評(píng)價(jià)，現(xiàn)將公開試驗(yàn)資料的試驗(yàn)設(shè)計(jì)匯總于表1。

2.1 單針免疫單病原攻毒

在試驗(yàn)1[6]中，試驗(yàn)組在3周齡接種瑞圓舒?疫苗，對照組以PBS作為對照，26周齡時(shí)(免疫后23周)用PCV2b強(qiáng)毒株攻毒，29周齡剖檢試驗(yàn)豬。結(jié)果顯示，瑞圓舒?組在免疫6周后PCV2抗體滴度顯著上升(P≤0.004 8)并持續(xù)至試驗(yàn)結(jié)束；整個(gè)試驗(yàn)過程中，對照組有57.1%的豬出現(xiàn)PCV2病毒血癥，而瑞圓舒?組的豬PCV2病毒血癥保持100%陰性；在27周齡和28周齡的排毒檢測中，瑞圓舒?組中PCV2 DNA拷貝數(shù)顯著低于對照組(P≤0.001 1)；剖檢后，瑞圓舒?組淋巴組織PCV2抗原陽性豬比例顯著低于對照組(P≤0.019 0)。在試驗(yàn)3[7]中，3周齡時(shí)，試驗(yàn)組接種瑞圓舒?，對照組接種Mhp單苗，6周齡用PCV2a強(qiáng)毒株攻毒，9周齡剖檢。結(jié)果顯示，整個(gè)試驗(yàn)中，瑞圓舒?組仔豬的PCV2抗體持續(xù)上升，對照組只在攻毒后呈血清學(xué)陽性，在攻毒后的所有采樣點(diǎn)，瑞圓舒?組PCV抗體滴度顯著高于對照組(P≤0.005 6)；攻毒后，對照組中95.8%的豬迅速發(fā)展病毒血癥，瑞圓舒?組僅有8.3%的豬有病毒血癥，顯著低于對照組(P≤0.000 1)；攻毒后，83.3%對照組豬糞便排毒PCV2，瑞圓舒?組僅有25%；剖檢后，相比于對照組，瑞圓舒?組的淋巴耗竭陽性豬減少91.2%，組織細(xì)胞取代陽性豬減少100%，淋巴組織PCV2抗原陽性豬減少77.4%。以上結(jié)果表明了瑞圓舒?有助于預(yù)防PCV2病毒血癥，有助于預(yù)防糞便排毒、減少PCV2在淋巴的定殖及病變，免疫保護(hù)期長達(dá)23周。

在試驗(yàn)2[8]中，試驗(yàn)組在3周齡接種瑞圓舒?疫苗，對照組以PBS作為對照，26周齡時(shí)(免疫后23周)用Mhp強(qiáng)毒株攻毒，30周齡剖檢試驗(yàn)豬。結(jié)果顯示，剖檢后，與對照組相比，瑞圓舒?組顯著降低肺部病變百分比。在試驗(yàn)4[9]中，3周齡時(shí)，試驗(yàn)組接種瑞圓舒?，對照組接種PCV2單苗，6周齡用Mhp強(qiáng)毒株攻毒，10周齡剖檢。結(jié)果顯示，對照組的豬肺部病變面積百分比為7.01%，瑞圓舒?組為1.66%，說明瑞圓舒?能有效減少M(fèi)hp引起的肺部病變，免疫保護(hù)期長達(dá)23周。

2.2 單針免疫雙病原攻毒

以上結(jié)果是用單一攻毒試驗(yàn)，還有很多試驗(yàn)是雙重攻毒。在試驗(yàn)8[10]中，3周齡時(shí)，4個(gè)試驗(yàn)組接種瑞圓舒?，4個(gè)對照組注射PBS(具體分組見表1)，6周齡用PCV2或(和)Mhp強(qiáng)毒株攻毒(或不攻毒)，9周齡剖檢。結(jié)果顯示，無論單病原還是雙病原攻毒，跟不免疫組攻毒相比，瑞圓舒?組免疫攻毒后都能顯著減輕臨床癥狀、降低PCV2病毒血癥、降低Mhp鼻腔排毒以及減輕肺部和淋巴病變；且與對照組相比，瑞圓舒?組能產(chǎn)生更高的PCV2 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))抗體、中和抗體和特異性γ干擾素分泌細(xì)胞。以上結(jié)果驗(yàn)證了瑞圓舒?能同時(shí)對PCV2和Mhp起到保護(hù)作用。

表1 瑞圓舒?免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)匯總

在試驗(yàn)9[11]中，3周齡時(shí)，試驗(yàn)組1接種瑞圓舒?，對照組1和對照組2分別接種A品牌和B品牌疫苗，9周齡用Mhp強(qiáng)毒株攻毒，10周齡用PCV2強(qiáng)毒株攻毒，13周齡剖檢。結(jié)果顯示，免疫時(shí)，相比于B品牌疫苗，瑞圓舒?組在接種部位有局部反應(yīng)的豬只減少了86.5%；攻毒后，瑞圓舒?組的肺部病變百分比(3.5%)顯著少于A品牌疫苗(11.2%)。

試驗(yàn)11和試驗(yàn)12與試驗(yàn)9的試驗(yàn)設(shè)計(jì)相似，但在攻毒時(shí)，PCV2的毒株分別是PCV2d和PCV2b。試驗(yàn)11[12]的結(jié)果顯示，免疫時(shí)，相比于B品牌疫苗，瑞圓舒?組在接種部位的局部反應(yīng)更小；攻毒后，相比于A品牌疫苗，瑞圓舒?組的肺部病變比例顯著降低(P＜0.05)；在生產(chǎn)數(shù)據(jù)上，瑞圓舒?組的死亡率(0.9%)顯著低于B品牌疫苗組(2.7%)；瑞圓舒?組試驗(yàn)豬的平均出欄重比A品牌疫苗組多2.3 kg，比B品牌疫苗組多1.4 kg。試驗(yàn)12[13]結(jié)果顯示，攻毒后，相比于A品牌疫苗和B品牌疫苗，瑞圓舒?組自始至終表現(xiàn)出最佳的病毒血癥控制結(jié)果。在生產(chǎn)數(shù)據(jù)上，瑞圓舒?組的淘汰率為1.3%，顯著低于A品牌組(2.8%)和B品牌組(2.9%)；瑞圓舒?組的死亡率為1.3%，顯著低于A品牌組(4.1%)和B品牌組(2.9%)；對于6～15周齡的平均日增重，瑞圓舒?組為649 g，高于A品牌組(635 g)和B品牌組(635 g)。結(jié)合試驗(yàn)11(PCV2d攻毒)、試驗(yàn)12(PCV2b攻毒)和試驗(yàn)3(PCV2a攻毒)的結(jié)果來看，瑞圓舒?顯示出了對當(dāng)前流行的PCV2a、PCV2b和PCV2d基因型的交叉保護(hù)效果。

2.3 單針與PRRSV疫苗聯(lián)合免疫三病原攻毒

除了雙重攻毒，試驗(yàn)10[14]中評(píng)價(jià)了瑞圓舒?與PRRSV疫苗聯(lián)合免疫后，用三病原攻毒的保護(hù)效果(具體分組見表1)。結(jié)果顯示，攻毒后，瑞圓舒?+PRRSV組合的肺部病變顯著低于PCV+Mhp+PRRSV三單苗組合和A品牌+PRRSV組合；瑞圓舒?+PRRSV組合和PCV+Mhp+PRRSV三單苗組合均比A品牌+PRRSV組合誘導(dǎo)更多的Mhp和PCV2特異性γ干擾素分泌細(xì)胞，從而使Mhp的鼻腔排毒和PCV2的病毒血癥水平更低；三組在PCV2和Mhp的ELISA抗體水平上沒有差異。在日增重的生產(chǎn)數(shù)據(jù)上，瑞圓舒?+PRRSV組合[(622.08± 17.31) g] 和PCV+Mhp+PRRSV三單苗組合[(625.29 ± 15.53) g]都高于A品牌+PRRSV組合[(620.30 ± 14.15) g] 。

2.4 兩針免疫單/雙病原攻毒

試驗(yàn)6[15-16]中，在3周齡和5周齡，試驗(yàn)組各接種瑞圓舒?半頭份，對照組接種Mhp單苗，8周齡用PCV2強(qiáng)毒株攻毒，11周齡剖檢。結(jié)果顯示，免疫后，在所有的時(shí)間點(diǎn)，兩針瑞圓舒?組的PCV2抗體水平均高于對照組；攻毒后，接種兩針瑞圓舒?疫苗的豬無病毒血癥，顯著低于對照組(病毒血癥豬只比例為92.9%)，瑞圓舒?豬只糞便排毒比例為24.1%，顯著低于對照組的92.9%，淋巴耗竭、組織細(xì)胞取代和淋巴組織PCV2抗原陽性豬只比例均為0，顯著低于對照組(3個(gè)指標(biāo)對應(yīng)的陽性比例分別為17.9%、14.3%和14.3%)。以上結(jié)果說明了瑞圓舒?兩針免疫能激發(fā)PCV2的主動(dòng)免疫，減少PCV2的糞便排毒、病毒血癥、淋巴耗竭及病毒在淋巴組織的定殖。

試驗(yàn)7[15-16]中，在3周齡和5周齡，試驗(yàn)組各接種瑞圓舒?半頭份，對照組接種PCV2單苗，8周齡用Mhp強(qiáng)毒株攻毒，12周齡剖檢。結(jié)果顯示，兩針瑞圓舒?組攻毒后，瑞圓舒?組的肺部病變百分比為1.59%，顯著低于對照組的8.7%，且瑞圓舒?組試驗(yàn)豬在攻毒后具有免疫記憶應(yīng)答。

在試驗(yàn)9[11]中，在3周齡和5周齡，試驗(yàn)組各接種瑞圓舒?半頭份，對照組1和對照組2分別接種A品牌疫苗和B品牌疫苗，9周齡用Mhp強(qiáng)毒株攻毒，10周齡用PCV2強(qiáng)毒株攻毒，13周齡剖檢。結(jié)果顯示，免疫時(shí)，相比于A品牌組(13%)和B品牌組(67.3%)疫苗，瑞圓舒?兩針組在接種部位有局部反應(yīng)的豬只比例僅為9.1%；攻毒后，瑞圓舒?兩針組的肺部病變百分比(2.8%)顯著低于A品牌組(11.2%)；瑞圓舒?兩針組的PCV2病毒血癥豬只比例(8.3%)低于A品牌組(10.4%)和B品牌組(8.7%)。在組織病變(淋巴耗竭、組織細(xì)胞取代、淋巴組織PCV2抗原陽性)的指標(biāo)上，瑞圓舒?兩針組表現(xiàn)均好于A品牌組和B品牌組。試驗(yàn)11[12]中，瑞圓舒?兩針組在日增重和肺部病變數(shù)據(jù)表現(xiàn)上都稍好于瑞圓舒?一針組。試驗(yàn)13中，攻毒后，瑞圓舒?兩針組的死亡率為1.3%，低于B品牌組的2.6%；兩組的平均日增重?zé)o顯著差異。以上結(jié)果說明了瑞圓舒?在保證免疫保護(hù)效果的前提下，在免疫程序的制定上具備靈活性。

3 瑞圓舒?田間試驗(yàn)研究進(jìn)展

3.1 瑞圓舒?在美國的田間試驗(yàn)

在美國的一個(gè)多點(diǎn)式豬場的田間試驗(yàn)中[17-18]，評(píng)估了3周齡健康仔豬接種瑞圓舒?(n=632)和生理鹽水(n=158)后的局部反應(yīng)和臨床表現(xiàn)。結(jié)果顯示，瑞圓舒?接種1 d后，1.1%的豬只出現(xiàn)局部反應(yīng)，這些局部反應(yīng)很輕微(腫大直徑為0.5～1.5 cm)，并且在第3天消除；瑞圓舒?組和對照組均無過敏反應(yīng)。免疫后1 h，瑞圓舒?組2.7%的仔豬和對照組3.2%的仔豬表現(xiàn)出異常臨床表現(xiàn)(精神沉郁、呼吸困難、咳嗽及跛行等)，免疫后6 h，瑞圓舒?組和對照組分別下降為1.1%和1.3%。

同樣，在另一項(xiàng)試驗(yàn)中[16]，比較兩針瑞圓舒?組(n=602)和生理鹽水對照組(n=148)豬只的局部反應(yīng)和臨床表現(xiàn)。結(jié)果顯示，在首免和二免后(間隔2周)，兩組分別共有0.3%和1.7%的豬只出現(xiàn)過局部反應(yīng)(腫大直徑為0.5～1.5 cm)，這些局部反應(yīng)通常在免疫后第4天就恢復(fù)了。首次免疫后，瑞圓舒?組和對照組均沒有豬只出現(xiàn)異常臨床表現(xiàn)。二免后的1 h，瑞圓舒?組1.0%的仔豬和對照組0.7%的仔豬出現(xiàn)異常臨床癥狀；二免后6 h，兩組的異常表現(xiàn)比例分別為1.3%和1.4%。以上兩項(xiàng)試驗(yàn)都證明了瑞圓舒?具有非常好的安全性。

3.2 瑞圓舒?在歐洲的田間試驗(yàn)

在匈牙利進(jìn)行的一項(xiàng)試驗(yàn)中[19]，對8 887頭18～28日齡的仔豬進(jìn)行了瑞圓舒?接種，結(jié)果顯示，相對于其他疫苗，瑞圓舒?在肺部平均評(píng)分上改善了0.23分，肺部病變百分比降低了4.83%，死亡率降低了1.16%，平均日增重提高了24.5 g。

在法國的田間試驗(yàn)中[20-21]，對20個(gè)豬場的36 535頭仔豬接種瑞圓舒?，評(píng)價(jià)其對生長性能的影響，同時(shí)另20個(gè)豬場的31 490頭仔豬按原有免疫程序接種疫苗作為對照。結(jié)果顯示，瑞圓舒?組胴體重量為95.5 kg，斷奶至屠宰平均日增重為721 g，對照組分別為94.7 kg和718 g。在法國進(jìn)行的另一項(xiàng)田間試驗(yàn)中[22-23]，用改良的Madec評(píng)分系統(tǒng)，對21個(gè)試驗(yàn)場的3 000頭原疫苗免疫對照豬和3 000頭瑞圓舒?免疫試驗(yàn)豬進(jìn)行肺部評(píng)分，結(jié)果顯示，瑞圓舒?組的平均肺部評(píng)分為1.47，肺臟無病變的百分比為65%，對照組的平均肺部評(píng)分為1.50，肺部無病變的百分比為63%。以上兩個(gè)田間試驗(yàn)的試驗(yàn)組和對照組數(shù)據(jù)雖無顯著差異，但相比于原來復(fù)雜的免疫程序，瑞圓舒?在保證有效性的前提下提供了更多的便捷。

在荷蘭的田間試驗(yàn)中[24]，比較了瑞圓舒?(n=65)或生理鹽水(n=65)的有效性和安全性。結(jié)果顯示，接種瑞圓舒?后未發(fā)生全身性反應(yīng)，13%的仔豬在豬舍部位有局部反應(yīng)，直徑不超過0.5 cm，局部反應(yīng)最多持續(xù)2 d后消失。該試驗(yàn)場存在PCV2亞臨床感染，接種瑞圓舒?的試驗(yàn)豬屠宰時(shí)比對照組豬平均重4.4 kg，整個(gè)試驗(yàn)期間的平均日增重比對照組多40 g。該試驗(yàn)證明了瑞圓舒?可減少PCV2亞臨床感染導(dǎo)致的體重?fù)p失。

在德國的田間試驗(yàn)中[25]，對75 424頭17～19日齡的仔豬進(jìn)行了瑞圓舒?接種。結(jié)果顯示，所有豬只均未出現(xiàn)全身性的不良反應(yīng)；4.13%的豬只在接種疫苗后的第1天出現(xiàn)局部反應(yīng)：3.58%出現(xiàn)紅斑，2.13%出現(xiàn)腫脹(1.85%腫脹直徑≤0.5 cm，0.28%腫脹直徑≥0.5 cm)，0.28%有疼痛反應(yīng)，在第2天，腫脹比例降至 0.19%(0.14%腫脹直徑≤0.5 cm，0.05%腫脹直徑≥0.5 cm)，且沒有豬只出現(xiàn)疼痛反應(yīng)。因此，瑞圓舒?接種豬只有極少的局部反應(yīng)，這些反應(yīng)在48 h內(nèi)消退了。接種過的仔豬沒有過敏反應(yīng)，沒有嗜睡或食欲不振。再次驗(yàn)證了瑞圓舒?優(yōu)秀的安全性。在德國的另一項(xiàng)試驗(yàn)中[26]，比較了瑞圓舒?免疫(n=149)和PCV2、Mhp商品化組合疫苗(n=151)在田間使用的安全性和有效性。結(jié)果顯示，瑞圓舒?組未見全身性不良反應(yīng)，而組合疫苗組有1頭仔豬的注射部位出現(xiàn)0.5 cm直徑的腫大；免疫4 h后，瑞圓舒?組有4頭豬觀察到疼痛反應(yīng)，而組合疫苗組中有10頭。兩組豬只的日增重、體重以及屠宰肺臟評(píng)分結(jié)果相似，無顯著性差異。

在西班牙的田間試驗(yàn)中[27]，選取了192頭3周齡仔豬，分為3組，每組48頭，第1組接種瑞圓舒?，第2組接種A品牌疫苗，第3組接種C品牌疫苗(國外某PCV2和Mhp的聯(lián)苗，未在中國上市)。結(jié)果顯示，免疫4周后，瑞圓舒?組的日增重為325 g，A品牌組和C品牌組分別為325 g和317 g，C品牌組在免疫后1 h出現(xiàn)明顯的體溫升高。

3.3 瑞圓舒?在亞洲的田間試驗(yàn)

在中國臺(tái)灣的田間試驗(yàn)中[28]，選取了90頭3周齡仔豬，分為3組，每組30頭，試驗(yàn)組接種瑞圓舒?，對照組1接種A品牌疫苗，對照組2接種PBS。結(jié)果表明：瑞圓舒?組肺部病變評(píng)分顯著低于A品牌疫苗(P＜0.05)。

在韓國的田間試驗(yàn)中[29]，選取了3個(gè)PRRSV亞臨床感染的豬場(未接種PRRSV疫苗，PRRSV抗體呈陽性)，試驗(yàn)的前幾個(gè)月，這3個(gè)豬場的斷奶后期豬和生長豬生長遲緩并有呼吸道疾病，臨床癥狀大約在9～12周出現(xiàn)，最高死亡率(3個(gè)豬場分別為15%、18%和12%)大約在13～16周出現(xiàn)。在每個(gè)豬場12周齡的豬中，能在肺部的病變組織中檢測到PCV2和Mhp，并在血清和鼻拭子中分別檢測到PCV2b和Mhp。3個(gè)豬場的母豬均未免疫PCV2和Mhp。在每個(gè)豬場選取80頭3周齡仔豬，其中40頭接種瑞圓舒?，40頭用生理鹽水作為對照。結(jié)果顯示，在3周齡的試驗(yàn)豬上檢測到PCV2和Mhp的母源抗體，即使有母源抗體，瑞圓舒?仍能誘導(dǎo)高滴度的PCV2特異性中和抗體和特異性γ干擾素分泌細(xì)胞，誘導(dǎo)Mhp特異性γ干擾素分泌細(xì)胞；與對照組相比，瑞圓舒?顯著降低PCV2的病毒血癥和Mhp的鼻腔排毒；與對照組相比，瑞圓舒?顯著降低肺部病變。生長數(shù)據(jù)上，瑞圓舒?組死亡率為0.8%，對照組為14.2%；瑞圓舒?組豬的上市平均體重為106.2 kg，對照組平均體重為100 kg，瑞圓舒?組比對照組高出6.2 kg/頭。試驗(yàn)期間，瑞圓舒?組在3個(gè)豬場的平均日增重分別是657 g、656 g和641 g，對照組分別是629 g、618 g和589 g。

4 總結(jié)

特異性ELISA抗體和中和抗體是評(píng)價(jià)疫苗誘導(dǎo)體液免疫的重要指標(biāo)，淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)和細(xì)胞因子檢測是評(píng)價(jià)疫苗誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的重要指標(biāo)；疫苗免疫后的攻毒保護(hù)效果是評(píng)價(jià)疫苗是否有效的關(guān)鍵，淋巴血癥水平、糞便(或鼻腔)排毒及剖檢后的組織病變等指標(biāo)都能反映免疫攻毒保護(hù)的效果。同時(shí)，生產(chǎn)上，對于PCV2和Mhp這兩種重要的經(jīng)濟(jì)病原體來說，免疫接種時(shí)的局部反應(yīng)，接種后的臨床表現(xiàn)、死淘率、不同生長階段的日增重、上市時(shí)間和體重、料重比等也是評(píng)價(jià)的重點(diǎn)[30-32]。

綜合以上所有的攻毒保護(hù)試驗(yàn)和田間試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，瑞圓舒?有助于預(yù)防PCV2病毒血癥、顯著減少PCV2排毒及其在淋巴中的定殖和淋巴耗竭、對PCV2a、PCV2b、PCV2d提供交叉保護(hù)、對PCV和Mhp具有23周的保護(hù)期、顯著減少豬肺炎支原體引起的肺部病變、改善死淘率、提高日增重?；谶@樣的保護(hù)性能，瑞圓舒?可以幫助更多的豬只上市，創(chuàng)造更多效益。如在試驗(yàn)12[13]中，上市時(shí)，與其他疫苗相比，瑞圓舒?組能多上市1.6%～2.9%的豬，多創(chuàng)造1.0%～1.4%的收益；又如在韓國的田間試驗(yàn)中[29]，基于上市體重和死亡率兩項(xiàng)數(shù)據(jù)，推算出瑞圓舒?組比不免疫組多產(chǎn)生47.2美元/頭的效益。

動(dòng)物聯(lián)合疫苗早在國外得到大量研究和應(yīng)用，我國發(fā)展相對滯后，近年來，聯(lián)苗逐漸成為國內(nèi)動(dòng)保公司的研發(fā)熱點(diǎn)。聯(lián)苗在保證免疫效果的前提下，能減少接種次數(shù)、節(jié)省人力成本、降低豬群應(yīng)激、提升動(dòng)物福利，尤其在當(dāng)今非洲豬瘟的壓力下，聯(lián)苗的使用可極大地減少生物安全風(fēng)險(xiǎn)，最終為養(yǎng)殖場帶來更大的經(jīng)濟(jì)效益。瑞圓舒?在我國的上市，解決了對PCV2和Mhp真正意義上的二聯(lián)苗的需求，是中國養(yǎng)豬業(yè)和從業(yè)者的福音。