劉舜慧，吳麗萍

（漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系，福建 漳州 363000）

少數(shù)生產(chǎn)企業(yè)片面追求藥物療效、期望獲取更多利益，不按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定處方生產(chǎn)，在中成藥及保健品中非法添加化學(xué)藥物的事件屢有發(fā)生。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，被檢測(cè)出存在非法添加的藥物有補(bǔ)腎壯陽(yáng)藥［1-4］、降壓藥［5-8］、減肥藥［9-15］、降糖藥［16-20］、安神藥［21-23］、抗風(fēng)濕藥［24-25］、抗癲癇藥［26］、止咳平喘藥［27-28］等。

糖尿病是一種病情較復(fù)雜且難治愈的慢性疾病。傳統(tǒng)中藥在降糖藥物中具有重要地位，其具有調(diào)理和治療的雙重功效且不良反應(yīng)小等特點(diǎn)，但其治療周期相對(duì)較長(zhǎng)，起效較慢。因此，不法分子利用患者對(duì)中藥的信賴，同時(shí)為了滿足他們用藥后急于見效的心理，在降糖中成藥、保健品中非法添加化學(xué)藥物。降糖化學(xué)藥物主要有磺酰脲類、雙胍類、噻唑烷二酮類等，對(duì)于前兩者的檢測(cè)技術(shù)日趨成熟，但檢測(cè)降糖中成藥中噻唑烷二酮類未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮作為篩查目標(biāo)，建立了HPLC檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent-1200高效液相色譜儀。

1.2 試藥鹽酸羅格列酮（含量為91.3%批號(hào)：100673-200401）、鹽酸吡格列酮（批號(hào)：100634-200401）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙酸銨為色譜純；水為超純水；降糖中成藥的試驗(yàn)樣品有降糖寧膠囊、參芪降糖膠囊、糖脈康顆粒、玉泉丸、消渴寧片、消渴降糖片。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 高效液相色譜法

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取常溫減壓干燥12 h的鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮對(duì)照品適量，置10 mL量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含鹽酸羅格列酮18μg·mL-1、鹽酸吡格列酮80μg·mL-1的混合溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備若供試品為膠囊劑，傾出膠囊內(nèi)容物碾成細(xì)粉，稱取約0.1 g；若供試品為顆粒劑、片劑或丸劑，碾成細(xì)粉后稱取約0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15 min后，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液用0.45μm濾膜濾過(guò)即得。

2.1.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙酸銨（0.01 mol·L-1）溶液（62∶38）為流動(dòng)相，流速：1 mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為246 nm及200～400 nm。此色譜條件下，鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮2種對(duì)照成分分離良好。色譜圖見圖1；光譜圖見圖2、圖3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 鹽酸羅格列酮光譜圖

圖3 鹽酸吡格列酮光譜圖

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備配制對(duì)照品混合溶液，含鹽酸羅格列酮0.46 mg·mL-1、鹽酸吡格列酮2.05 mg·mL-1。精密吸取上述溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1、2、5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X（μg）進(jìn)行線性分析，得回歸方程。結(jié)果見表1、圖4、圖5。

圖4 鹽酸羅格列酮線性關(guān)系圖

圖5 鹽酸吡格列酮線性關(guān)系圖

表1 對(duì)照品溶液的線性結(jié)果

2.1.5 精密度試驗(yàn)取對(duì)照品混合溶液重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)得鹽酸羅格列酮各次峰面積RSD的平均值為0.22%，鹽酸吡格列酮的RSD為0.20%。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取對(duì)照品混合溶液，放置0、4、6、8、10、12、24 h測(cè)定峰面積，鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮的RSD分別為0.19%和0.18%，見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.1.7 各種劑型的加樣回收率取已確定不含鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮的4種不同劑型（膠囊劑、顆粒劑、丸劑、片劑）的樣品作為背景，每種劑型6份，每份加入對(duì)照品混合溶液（鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮的濃度分別為0.451 9 mg·mL-1、2.050 0 mg·mL-1）1 mL，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下處理后，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 各種劑型的加樣回收率/n＝6

2.1.8 檢測(cè)限取對(duì)照品混合溶液，以不同比例稀釋，在2.1.3項(xiàng)下的高效液相色譜條件下測(cè)定，取4～10 min范圍的基線進(jìn)行噪聲檢測(cè)，結(jié)果見表4。

表4 HPLC檢測(cè)限

2.2 樣品測(cè)定分別精密吸取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按2.1.3項(xiàng)下的高效液相色譜條件測(cè)定，同時(shí)記錄二極管陣列紫外光譜。經(jīng)過(guò)HPLC分析，所得供試品溶液不含有鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮。樣品色譜圖見圖6。

圖6 供試樣品色譜圖

3 小結(jié)

3.1同時(shí)檢測(cè)降糖中成藥中的鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮還未見報(bào)道，在高效液相色譜方法的摸索過(guò)程中，當(dāng)流動(dòng)相中甲醇的比例＞70%時(shí)，二者完全疊加在一起，色譜圖中只出現(xiàn)一個(gè)色譜峰。逐漸降低甲醇的比例，二者的分離度加大。確定的液相色譜流動(dòng)相，除了確保二者的分離度，還能跟樣品中的雜質(zhì)峰分離。

3.2鹽酸羅格列酮和鹽酸吡格列酮的分子結(jié)構(gòu)中均含有N原子，因此，可向流動(dòng)相中加入乙酸銨改性劑，且乙酸銨的濃度大小對(duì)二者的峰形和出峰時(shí)間的影響不大，只需采用0.01 mol·L-1乙酸銨即可保證二者色譜峰形對(duì)稱，不拖尾。

3.3從光電二極管陣列檢測(cè)器所得到的190～400 nm這一范圍內(nèi)2種對(duì)照品的光譜圖來(lái)看，鹽酸羅格列酮的λmax為246 nm，鹽酸吡格列酮的λmax為267 nm。在246 nm和267 nm下，鹽酸吡格列酮的吸收值差異不大，因此可選擇246 nm作為這2種化學(xué)藥物同時(shí)檢測(cè)的波長(zhǎng)。