但文超，劉金壘，何慶勇，張輝，李安琪

1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029

細(xì)胞焦亡是一種不同于細(xì)胞壞死、細(xì)胞凋亡的促炎性細(xì)胞程序性死亡形式，具有極為顯著的免疫炎癥特點(diǎn)，又稱為細(xì)胞炎性壞死。它由炎性小體啟動(dòng)，促炎性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）介導(dǎo)[1]，此類蛋白酶屬于半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶集團(tuán)，其中介入細(xì)胞焦亡的蛋白酶包括Caspase-1、3、4、5、11。這些蛋白可對(duì)Gasdermin D 蛋白的N 端特異性切割，進(jìn)而激活其成孔活性，致使質(zhì)膜破裂，伴隨著促炎因子和細(xì)胞內(nèi)容物的釋放，其中包括白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-18 和內(nèi)源性危險(xiǎn)性信號(hào)蛋白HMGB-1[2-3]。與此同時(shí)，炎性小體吸引其他炎性細(xì)胞并增劇炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)了介于壞死和凋亡過程之間的細(xì)胞死亡[4]。目前已探明的細(xì)胞焦亡發(fā)生途徑主要有2 種，即由Caspase-1介導(dǎo)的經(jīng)典途徑及由Caspase-4、5、11 介導(dǎo)的非經(jīng)典途徑。此外，Caspase-3 介導(dǎo)的Gasdermin E（GSDME）裂解亦能促進(jìn)細(xì)胞焦亡[5-6]。細(xì)胞焦亡在多種疾病的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中均有重要作用，如心肌再灌注損傷、動(dòng)脈粥樣硬化、梗阻性腎病炎性損傷、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、慢性肝病、阿爾茨海默病、癌癥等[7-8]。因此，細(xì)胞焦亡的機(jī)制與研發(fā)細(xì)胞焦亡的干預(yù)制劑已成為近年的研究熱點(diǎn)。已有研究表明中藥對(duì)細(xì)胞焦亡具有干預(yù)作用：化瘀解毒中藥能下調(diào)炎癥小體NLRP3 的表達(dá)，抑制Caspase-1 的表達(dá)與IL-1β 等介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，以阻礙細(xì)胞焦亡進(jìn)展[9]；滅幽湯能使胃組織中NLRP3和Caspase-1 表達(dá)下調(diào)，從而抑制細(xì)胞焦亡，改善胃黏膜炎癥，發(fā)揮對(duì)幽門螺桿菌相關(guān)胃炎的治療作用[10]；參蘇飲能抑制Caspase-1 經(jīng)典途徑介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡，從而減輕“肺氣虛外感”大鼠的炎癥反應(yīng)[11]。

中藥復(fù)方的干預(yù)機(jī)制具有靶點(diǎn)多位、層次豐富、療效穩(wěn)固、安全性高等特點(diǎn)，中藥系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法能夠?qū)⒅兴?、成分、靶點(diǎn)等層次的信息進(jìn)行整合篩選，從而清晰呈現(xiàn)調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡相關(guān)的藥物、成分、靶點(diǎn)之間的關(guān)系，為研究中醫(yī)藥對(duì)細(xì)胞焦亡的調(diào)節(jié)機(jī)制提供有效途徑。本研究采取網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，以細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)作為切入點(diǎn)，匹配出相應(yīng)的配體化合物及中藥，初步探索靶點(diǎn)、化合物、中藥之間的復(fù)雜聯(lián)系，探討中藥干預(yù)細(xì)胞焦亡的物質(zhì)基礎(chǔ)及一般規(guī)律，為后續(xù)調(diào)控細(xì)胞焦亡的中醫(yī)理論探討、治療策略、新藥研發(fā)及中西醫(yī)結(jié)合臨床提供思路和依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 細(xì)胞焦亡相關(guān)作用靶點(diǎn)收集

登錄GeneCards（http://www.genecards.org）[12]、OMIM（https://omim.org）[13]、TTD（https://bidd.nus.edu.sg）[14]、DrugBank（https://www.drugbank.ca）[15]、DisGeNET（www.disgenet.org）[16]數(shù)據(jù)平臺(tái)，以“pyroptosis”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，獲得與細(xì)胞焦亡作用機(jī)理相關(guān)的靶點(diǎn)，并采用蛋白數(shù)據(jù)庫 UniProt（https://www.uniprot.org/）[17]匹配各靶點(diǎn)全稱。

1.2 候選化合物篩選及化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

運(yùn)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)（TCMSP，http://tcmspw.com）[18]收集可作用于細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)的化合物成分。根據(jù)ADME 參數(shù)和Lipinski 規(guī)則[19]對(duì)候選化合物進(jìn)行遴選，具體標(biāo)準(zhǔn)為：口服生物利用度（OB）≥30%，半衰期（HL）＞4，類藥性[20]（DL）≥0.18，拓?fù)錁O性表面積[21]（TPSA）＜140，可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)[22]（RBN）≤10，分子量（MW）≤500 Da?？紤]TCMSP 所提供成分信息參數(shù)包含計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)的結(jié)果，部分?jǐn)?shù)據(jù)可能與實(shí)際應(yīng)用不符，故初步篩選后，逐一查看被刪除的成分，補(bǔ)充相關(guān)活性成分，將得到的化合物作為候選化合物。將候選化合物、靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件[23]，構(gòu)建靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)，并對(duì)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵W(xué)屬性值進(jìn)行分析。

1.3 中藥獲取及靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過 TCMSP、化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫（http://www.organchem.csdb.cn）收集包含候選化合物的中藥，并構(gòu)建候選化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape3.7.2 軟件構(gòu)建靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，通過Cytoscape3.7.2的NetworkAnalyzer 模塊功能計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中各節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)以找出關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，初步評(píng)判中藥及化合物干預(yù)細(xì)胞焦亡功效強(qiáng)度。

1.4 藥物性味歸經(jīng)整理及頻數(shù)?分析

參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[24]、《中藥學(xué)》[25]、《中國(guó)臨床藥物大辭典》[26]對(duì)“1.3”項(xiàng)下中藥匹配性味歸經(jīng)信息，并進(jìn)行頻數(shù)分析。若上述文獻(xiàn)均無法查到相關(guān)信息，則將該藥予以刪除。

1.5 靶點(diǎn)-候選化合物分子對(duì)接

為進(jìn)一步判斷靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)中核心靶點(diǎn)及核心成分作用關(guān)系的可信度，并探尋新的藥物靶點(diǎn)組合，選取該網(wǎng)絡(luò)中度值排名前5 位的靶點(diǎn)作為受體，進(jìn)行分子對(duì)接。盡管CASP1度值僅為2，但與細(xì)胞焦亡關(guān)系較為緊密，故亦將其作為受體進(jìn)行對(duì)接。

登錄RCSB數(shù)據(jù)庫（http://www.rcsb.org/pdb/），選取5種蛋白質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)，保存為.pdb格式。通過PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載候選化合物3D結(jié)構(gòu)，保存為SDF 文件，通過Open Babel轉(zhuǎn)換為.pdb格式文件。運(yùn)用AutoDock Tools1.5.6軟件剔除配體中的水分子，分散配體與受體，增添非極性氫鍵，標(biāo)定Gasteiger 電荷，分別存儲(chǔ)為.pdbqt 格式文件。對(duì)篩選出的潛在核心成分配體進(jìn)行能量最小化處理，賦予配體原子類型、計(jì)算電荷，保存為.pdbqt格式。運(yùn)用AutoDock Vina 1.1.2軟件計(jì)算對(duì)接得分，評(píng)估靶點(diǎn)與配體之間的匹配度及對(duì)接活性，對(duì)接得分＜-4.25可認(rèn)為配體與靶點(diǎn)之間具有結(jié)合活性，對(duì)接得分＜-5.0表明結(jié)合活性較佳，對(duì)接得分＜-7.0表明兩者之間有強(qiáng)烈的對(duì)接活性[27]。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)

通過GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET、DrugBank 數(shù)據(jù)庫分別獲得83、14、0、5、0個(gè)與細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)，去除重復(fù)值并經(jīng)UniProt 數(shù)據(jù)庫規(guī)范，最終獲得細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)81個(gè)，其中通過TCMSP匹配到小分子化合物的靶點(diǎn)有16個(gè)，故將這16個(gè)靶點(diǎn)定義為潛在靶點(diǎn)，見表1。

表1 細(xì)胞焦亡潛在靶點(diǎn)基本信息

2.2 候選化合物及靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫，以“可關(guān)聯(lián)到潛在靶點(diǎn)”為條件，篩選得到113個(gè)化合物，根據(jù)ADME參數(shù)和Lipinski 規(guī)則篩選得到90個(gè)候選化合物。將潛在靶點(diǎn)與候選化合物構(gòu)建靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)，見圖1。該網(wǎng)絡(luò)由106個(gè)節(jié)點(diǎn)和184條邊組成。圖中節(jié)點(diǎn)度值為所連接邊的數(shù)量，度值越大提示節(jié)點(diǎn)樞紐性越強(qiáng)，在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中調(diào)控作用越大。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，度值前6位的化合物分別為金雀異黃酮（genistein）、白藜蘆醇（resveratrol）、(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯（(-)-epigallocatechin-3-gallate）、槲皮素（quercetin）、熊果酸（ursolicacid）、雌二醇（17-beta-estradiol），分別對(duì)應(yīng)8、8、6、5、5、5個(gè)靶點(diǎn)，這些化合物可干預(yù)多個(gè)細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)蛋白從而具有較強(qiáng)活性。度值前6位的靶點(diǎn)為CASP3、BCL2、IL1B、AKT1、STAT3、EGFR。

圖1 細(xì)胞焦亡靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)

2.3 中藥匹配及靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)

90個(gè)候選化合物匹配得到462味中藥，根據(jù)化合物與中藥的關(guān)系構(gòu)建化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)包含552個(gè)節(jié)點(diǎn)、2048條邊。其中度值居前9位的中藥為麻黃、葛花、沙棘、菊花、連翹、紫菀、紫蘇、紅花、芫荽，分別含化合物15、15、14、14、13、13、13、13、13 個(gè)。通過候選化合物的橋接作用收集各中藥的靶點(diǎn)，結(jié)果顯示虎杖、桑白皮、山豆根、雞血藤、月季花、葛花均可作用10 個(gè)靶點(diǎn)，推測(cè)這6 種中藥對(duì)細(xì)胞焦亡具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，可為中西醫(yī)結(jié)合臨床或試驗(yàn)的中藥選擇提供依據(jù)。中藥所含化合物及靶點(diǎn)數(shù)見圖2。網(wǎng)絡(luò)中化合物度值中位數(shù)為4，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判定化合物度值＞8 為潛在核心化合物，共27 個(gè)，前5 位分別為β-谷甾醇、棕櫚酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素，見表2。選取度值≥5 的中藥及與其關(guān)聯(lián)的化合物、靶點(diǎn)構(gòu)建靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，見圖3。

圖2 調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡中藥的候選化合物及作用靶點(diǎn)（前15 位）

表2 中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡潛在核心化合物（度值＞8）

圖3 靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)圖（中藥度值≥5）

2.4 藥物性味歸經(jīng)

運(yùn)用SPSS24.0軟件對(duì)收集到的462味中藥的性味歸經(jīng)信息進(jìn)行頻數(shù)統(tǒng)計(jì)分析。調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡的中藥藥味以苦、甘、辛頻率較高，藥性寒溫并重；歸肝經(jīng)頻次最高（229次），歸肺經(jīng)達(dá)182次，歸脾、胃二經(jīng)共275次。見表3～表5。

表3 462味調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡中藥藥味分布

表4 462味調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡中藥藥性分布

表5 462味調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡中藥歸經(jīng)分布

2.5 分子對(duì)接結(jié)果

將27種潛在核心化合物與6個(gè)核心靶點(diǎn)CASP3（PDBID：1NMS）、BCL2（PDBID：4A1U）、IL1B（PDBID：1HIB）、AKT1（PDBID：6SB0）、STAT3（PDBID：6NJS）及CASP1（PDBID：1RWN）進(jìn)行分子對(duì)接，見圖4。162組對(duì)接結(jié)果中，Affinity＜-5的共108組（66.67%），Affinity＜-7者13組（8.02%）。162個(gè)組合中，在靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)中的組合有53個(gè)，其中對(duì)接得分最高的為CASP3-rutin（-8.01kcal/mol），對(duì)接得分最低的為BCL2-esculetin（-4.48 kcal/mol），網(wǎng)內(nèi)53個(gè)組合平均對(duì)接得分為-5.58kcal/mol，表明所篩選的潛在核心化合物與核心靶點(diǎn)間可能有較好的結(jié)合活性。這在一定程度上佐證了靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)中藥物靶點(diǎn)相互作用的可靠性。網(wǎng)外新組合有109個(gè)，Affinity 前3 位為AKT1-hesperidin（-8.94 kcal/mol）、AKT1-rutin（-8.01kcal/mol）、AKT1-β-sitosterol（-7.56kcal/mol）。網(wǎng)外組合Affinity＜-5kcal/mol的有66個(gè)，提示均有良好的對(duì)接活性。對(duì)接結(jié)果可為進(jìn)一步開展相關(guān)中藥及成分的實(shí)驗(yàn)篩選設(shè)計(jì)提供數(shù)據(jù)支撐。

圖4 調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡潛在核心化合物與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)果熱圖

綜合考慮分子對(duì)接的Affinity 值及靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)的度值，選擇6個(gè)較為理想的組合，將其對(duì)接情況以三維及二維分子對(duì)接模式圖展示。各配體均嵌入靶點(diǎn)的活性口袋中，并通過疏水作用及形成氫鍵等形式與靶點(diǎn)多個(gè)殘基發(fā)生作用，見圖5。

圖5 調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡化合物與靶點(diǎn)分子對(duì)接模式圖

3 討論

細(xì)胞焦亡的發(fā)生機(jī)制與中醫(yī)理論有密切關(guān)聯(lián)[9]。中藥干預(yù)細(xì)胞焦亡的研究逐漸受到重視，挖掘細(xì)胞焦亡相關(guān)中藥對(duì)臨床和新藥研發(fā)具有重要意義。本研究從細(xì)胞焦亡相關(guān)靶點(diǎn)切入，篩選出細(xì)胞焦亡相關(guān)化合物及相應(yīng)中藥，構(gòu)建靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，并據(jù)此系統(tǒng)預(yù)測(cè)分析了中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡的分子基礎(chǔ)和作用規(guī)律。

根據(jù)篩選結(jié)果，度值排名靠前的靶點(diǎn)有CASP3、BCL2、AKT1、IL1B、STAT3、EGFR 等。其中CASP3編碼 Caspase-3 蛋白能夠誘導(dǎo) GSDME 裂解為GSDME-N段，其可通過對(duì)質(zhì)膜打孔誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡[28]。BCL-2 家族蛋白作為關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，可通過調(diào)控線粒體通路，調(diào)節(jié)Caspase 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡[29-30]。活化的Caspase-1 切割proIL-1β（IL-1β 非活性前體）轉(zhuǎn)化為活性的IL-1β，并通過Gasdermin D 形成的胞膜孔釋放到細(xì)胞外，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡[31]，故認(rèn)為通過調(diào)控IL-1B 可干預(yù)Caspase-1 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡過程中的炎癥反應(yīng)。STAT 3 能促進(jìn)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄，加強(qiáng)細(xì)胞周期進(jìn)程，拮抗程序性細(xì)胞死亡，并具有促進(jìn)機(jī)體對(duì)皮膚感染和損傷快速響應(yīng)的作用[32]。EGFR的抑制劑抑制EGFR 活性，導(dǎo)致Caspase-3 活性呈現(xiàn)濃度依賴性上調(diào)[33]，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡，這表明抑制EGFR 能夠誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡。目前尚無AKT1 相關(guān)臨床或?qū)嶒?yàn)研究報(bào)道，其在中藥干預(yù)細(xì)胞焦亡中的作用有待研究。

在靶點(diǎn)-化合物網(wǎng)絡(luò)中，化合物度值較高的有金雀異黃酮、(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯、槲皮素、熊果酸、山柰酚等。人類多種惡性腫瘤組織中均存在EGFR 的過度表達(dá)，金雀異黃酮可下調(diào)EGFR mRNA和EGFR 的表達(dá)，以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的程序性死亡[34]。表沒食子兒茶素沒食子酸酯可上調(diào)Caspase-3 的表達(dá)、抑制Bcl-2 蛋白的表達(dá)[35]，且對(duì)Caspase-3 的表達(dá)水平調(diào)節(jié)存在濃度和時(shí)間依賴性[36]，從而誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡；還可抑制Caspase-11 介導(dǎo)的NLRP3 激活，從而下調(diào)LPS＋Aβ 誘導(dǎo)BV2 細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，抑制非經(jīng)典途徑的神經(jīng)細(xì)胞焦亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[37]。槲皮素能抑制對(duì) Caspase-1 的激活具有催化作用的NLRP3，下調(diào)IL-1β 和IL-18 的成熟和分泌過程[38-39]，從而抑制神經(jīng)元細(xì)胞焦亡。槲皮素還能上調(diào)Bcl-2 及下調(diào)Caspase-3 基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞焦亡[40]。熊果酸能夠顯著上調(diào)活性形式的Caspase-3 表達(dá)，阻斷STAT3 的核易位進(jìn)而阻斷STAT3 激活[41]，從而發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡的作用。山柰酚通過抑制Caspase-1的表達(dá)和活性，進(jìn)而抑制GSDMD 的分解，發(fā)揮抗細(xì)胞焦亡作用[42]。

分子對(duì)接結(jié)果表明，潛在的藥物靶點(diǎn)組合數(shù)量可能遠(yuǎn)多于TCMSP 收錄的藥物-靶點(diǎn)組合，這表明仍有大量中藥有效成分干預(yù)細(xì)胞焦亡的作用關(guān)系有待進(jìn)一步探索。此外，橙皮苷（hesperidin）和蘆?。╮utin）在分子對(duì)接中表現(xiàn)良好。橙皮苷可上調(diào)Bax 表達(dá)，從而激活Caspase-3 依賴性內(nèi)在通路，對(duì)HepG2 和SH-SY5Y 細(xì)胞的增殖過程產(chǎn)生顯著的抑制作用[43]，本研究推測(cè)，這與Caspase-3 誘導(dǎo)GSDME 裂解為GSDME-N 片段，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡過程有關(guān)。蘆丁通過抑制Caspase-1、NLRP3 和IL-1β 的表達(dá)[44-45]，發(fā)揮抗細(xì)胞焦亡作用。

根據(jù)篩選結(jié)果，綜合中藥的度值與所包含的靶點(diǎn)數(shù)，比較重要的中藥有麻黃、葛花、虎杖、桑白皮、山豆根、雞血藤等?；A(chǔ)研究表明，麻黃通過抑制包括Caspase-3 在內(nèi)的多種Caspase 活性以顯著抑制肝細(xì)胞程序性死亡，還可激活I(lǐng)L-6 誘導(dǎo)的STAT3[46]，這可能是麻黃抑制細(xì)胞焦亡的機(jī)理。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，虎杖醇提取物能夠抑制NLRP3 與Caspase-1 的表達(dá)，從而抑制小鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎[47]，這可能是虎杖發(fā)揮抗細(xì)胞焦亡作用的機(jī)制。桑白皮能夠促進(jìn)Caspase-3等多種Caspase 的活化，從而誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡[48]，這可能是桑白皮誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡的作用機(jī)制。山豆根可下調(diào)腫瘤細(xì)胞中Bcl-2 的表達(dá)，上調(diào)Bax 的表達(dá)，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞的焦亡產(chǎn)生誘導(dǎo)作用[49-50]。雞血藤可通過下調(diào)Bax 和Caspase-3[51]，從而抑制細(xì)胞焦亡。

本研究結(jié)果表明，潛在可調(diào)節(jié)細(xì)胞焦亡的中藥藥味以苦、辛、甘為多?！端貑?藏氣法時(shí)論篇》有“苦堅(jiān)”“辛散”“甘緩”的記載。苦味藥物可瀉下、清利熱邪，臨床用于熱證；辛味藥物可發(fā)散表邪、行氣活血，臨床用于表證及氣滯血瘀證等；甘味藥物可補(bǔ)益正氣、和中健脾、緩急止痛，臨床用于虛證、疼痛等。藥性以寒居多，寒性藥物多具有清熱瀉火、涼血解毒、瀉熱通便等作用，適用于熱證。中藥歸經(jīng)以肝、肺二經(jīng)為主。肝主疏泄、主藏血、主升，肺主氣的宣發(fā)與肅降，肝、肺氣機(jī)運(yùn)行正常是人體氣血調(diào)和的保證，也是整個(gè)機(jī)體功能正常運(yùn)行的重要基礎(chǔ)。由此推測(cè)，細(xì)胞焦亡的中醫(yī)病理基礎(chǔ)應(yīng)為肝升與肺降功能失常，肝氣郁滯，肺不宣降，氣郁化火，氣滯血瘀，不通則痛，久而為虛損性疾病，故而細(xì)胞焦亡的中醫(yī)內(nèi)涵多為熱證、表證、氣滯血瘀證及虛證、疼痛性疾病等，中醫(yī)藥干預(yù)細(xì)胞焦亡應(yīng)從清熱瀉火、行氣活血、補(bǔ)益和中、緩急止痛等方面論治。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，從與細(xì)胞焦亡過程相關(guān)的蛋白入手，建立細(xì)胞焦亡相關(guān)的靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)，從而分析并挖掘中藥干預(yù)細(xì)胞焦亡過程的潛在分子基礎(chǔ)及可能的作用機(jī)制，嘗試從現(xiàn)代研究層面解讀中醫(yī)藥理論，為中醫(yī)藥干預(yù)細(xì)胞焦亡及相關(guān)疾病提供方法借鑒，也為進(jìn)一步開發(fā)干預(yù)細(xì)胞焦亡的藥物提供新思路。由于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法對(duì)靶點(diǎn)-化合物-中藥網(wǎng)絡(luò)關(guān)系只能進(jìn)行定性分析，今后將進(jìn)一步探討構(gòu)建更為系統(tǒng)的研究模型，以分析其中的定量關(guān)系。