劉聰,鄒翠翠,劉婷,肖德俊,鄒淑慧,張麗琴
(贛州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科分子實(shí)驗(yàn)室,江西 贛州 341000)
地中海貧血(簡(jiǎn)稱地貧)是一組由于珠蛋白基因突變所致的常染色體隱性遺傳病,主要表現(xiàn)類型為ɑ地貧和β地貧。其中廣西、廣東、海南和香港等地是該病高發(fā)區(qū)[1]。研究報(bào)道廣西、廣東人群中地貧基因攜帶率分別達(dá)23.98%、11.07%[2],該病也被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6 種常見病之一[3]。由于各地區(qū)產(chǎn)前診斷與遺傳咨詢條件差異,每年地貧患兒出生率不低于2.4‰[4]。重型及中間型ɑ和β地中海貧血可致殘或致死,且無治愈的方法,給整個(gè)社會(huì)造成極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),因此對(duì)孕期婦女進(jìn)行地貧基因檢測(cè)尤為重要,可大大降低地貧患兒出身率。本研究回顧性分析來本院產(chǎn)檢的475例孕婦地貧攜帶率及基因型,為開展遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷提供理論依據(jù),從而達(dá)到降低甚至杜絕地貧患兒的出生,對(duì)提高該地區(qū)人口素質(zhì)具有重要意義。
1.1 標(biāo)本來源 2017年4 月-2018年12 月來本院產(chǎn)檢的孕婦475例,平均年齡為28.68±5.26 歲,用EDTA 抗凝管采集外周血2ml,就診患者全是贛州本地人,簽訂了知情同意書。
1.2 儀器與試劑 深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供全血基因組DNA 檢測(cè)試劑盒,PCR 儀采用杭州博日科技有限公司提供的TC型基因擴(kuò)增儀,深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供的ɑ、β地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒及YNH-16 恒溫雜交儀,安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司提供的高速冷凍離心機(jī)。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法 全血基因組DNA 提?。ㄉ钲趤喣苌锛夹g(shù)有限公司試劑盒操作規(guī)程),ɑ地貧和β地貧均采用PCR-反向斑點(diǎn)雜交法,具體步驟均按照深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供試劑盒說明書操作。ɑ地貧檢測(cè)三種ɑ 缺失(-SEA/ɑɑ、-ɑ3.7/ɑɑ、-ɑ4.2/ɑɑ)、三種ɑ 突變(ɑɑ/ɑQSɑ、ɑɑ/ɑCSɑ、ɑɑ/ɑWSɑ),β地貧檢測(cè)17 種突變(41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM)。
2.1 ɑ地貧基因類型及其分布 檢測(cè)的475例標(biāo)本中,缺失型ɑ地貧共187例,攜帶率為39.37%(187/475),其中--SEA/ɑɑ152例,ɑɑ/-ɑ3.721例,ɑɑ/-ɑ4,210例,ɑ4.2-/--SEA2例,ɑ3.7-/--SEA1例,ɑ3.7-/-ɑ3.71例,見表1。
表1 缺失型ɑ-地貧基因型頻率
2.2 突變型ɑ地貧共6例,攜帶率為1.26%(6/475)其中ɑWSɑ/ɑɑ1例,ɑQSɑ/ɑɑ4例,ɑCSɑ/ɑɑ1例,見表2。
表2 突變型ɑ-地貧基因型頻率
2.3 β地貧基因突變類型及其分布 突變型β地貧共85例,攜帶率為17.89%(85/475),其中654M/N 30例,41-42M/N 29例,28M/N 11例,17M/N 10例,βM/N 1例,27-28M/N 3例,14-15M/N 1例,見表3。
表3 突變型β-地貧基因型頻率
圖1 缺失型ɑ-地貧結(jié)果圖
2.4 ɑ、β 復(fù)合型地貧攜帶率 ɑ、β 復(fù)合型地貧共11例,攜帶率為2.32%(11/475),其中--SEA/ɑɑ 復(fù)合654M/N 6例;--SEA/ɑɑ 復(fù)合41-42M/N 2例;ɑQSɑ/ɑɑ復(fù)合41-42M/N 1例;ɑɑ/-ɑ3.7復(fù)合654M/N 2例,見表4。
表4 ɑ、β 復(fù)合型地貧基因型頻率
2.5 475例患者地貧基因類型匯總表 缺失型ɑ地貧共187例,攜帶率為39.37(187/475);突變型ɑ地貧共6例,攜帶率為1.26%(6/475);突變型β地貧共85例,攜帶率為17.89%(85/475);ɑ、β 復(fù)合型地貧共11例,攜帶率為2.32%(11/475),見表5。
表5 475例患者地貧基因類型匯總表
圖2 突變型ɑ-地貧結(jié)果圖
圖3 突變型β-地貧結(jié)果圖
地中海貧血是遺傳性慢性溶血性貧血癥的一種,危害較大,臨床出現(xiàn)率較高[6]。主要分為ɑ和β兩種類型,ɑ地貧是由于ɑ 珠蛋白編碼基因的突變而導(dǎo)致肽鏈表達(dá)失衡引起,其類型主要有--SEA/ɑɑ、ɑɑ/-ɑ3.7、ɑɑ/-ɑ4,2等[7,8]。β地貧分子基礎(chǔ)是位于人類11 號(hào)染色體中的兩個(gè)β 珠蛋白基因發(fā)生突變,導(dǎo)致β 珠蛋白合成障礙,主要有IVS-Ⅱ-654、CD41/42、CD17 等類型。如果夫妻雙方為同型地貧則有可能造成子代的重型地貧[9,10]。重型ɑ地貧可通過B 超檢測(cè)到,且這種患兒在妊娠末期或出生30 分鐘內(nèi)會(huì)死亡;重型β地貧則要在出生6 個(gè)月以后才會(huì)出現(xiàn)癥狀,患兒會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重發(fā)育不良,發(fā)育遲緩,出現(xiàn)中度或中度貧血,需要長(zhǎng)期輸血才能維持生命,多在童年時(shí)期會(huì)夭折。輕型或靜止型地貧攜帶者直接觀察無法發(fā)現(xiàn)貧血癥狀,臨床癥狀也不明顯,如不通過血液檢查,則可能出現(xiàn)漏診[11,12];當(dāng)夫妻雙方為同種類型基因攜帶者時(shí),則有25%概率生育出中型或重型地貧患兒[13-15],因此在產(chǎn)前進(jìn)行地貧基因檢測(cè)尤為重要,此舉可大大降低地貧患兒出生率,提高整個(gè)贛南地區(qū)人口素質(zhì)。
本研究通過檢測(cè)分析475例孕婦地中海貧血基因情況,檢測(cè)結(jié)果有ɑ地貧、β地貧及ɑβ 復(fù)合地貧,其中ɑ地貧(ɑ 缺失及ɑ 突變)共193例(40.63%),β地貧共85例(17.89%),ɑβ 復(fù)合地貧共11例(2.32%),由此得出在贛南地區(qū)ɑ地貧比重最高,主要基因型為--SEA/ɑɑ(東南亞型),β地貧以IVS-Ⅱ-654 最為常見,ɑβ 復(fù)合地貧主要為--SEA/ɑɑ/IVS-Ⅱ-654基因型。
本研究分析了贛南地區(qū)ɑ、β地中海貧血基因攜帶率、主要基因型,為今后該地區(qū)產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢提供理論依據(jù),可大大降低地貧患兒出生率,從而提高該地區(qū)人口素質(zhì)具有重要意義。
實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)2021年4期