李 芳 黃衛(wèi)鋒 汪海斌 周建理 黃艷梅 王德勝

1.國(guó)家中藥材產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（安徽）儀器分析室，安徽亳州 236800；2.安徽省亳州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所質(zhì)量技術(shù)部，安徽亳州 236800；3.安徽德昌藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，安徽亳州 236800

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactifloraPall.的干燥根[1]。白芍歷來(lái)以安徽亳州、浙江杭州、四川中江為三大道地主產(chǎn)區(qū)，習(xí)稱(chēng)亳白芍、杭白芍、川白芍[2-5]。其中亳白芍種植產(chǎn)量大，且在栽培、采收、加工等有多方面研究，所以在臨床上廣泛使用[6-10]。將中藥材及飲片分規(guī)格等級(jí)是中藥材市場(chǎng)長(zhǎng)期存在的現(xiàn)象[11-15]，根據(jù)藥材與飲片的外觀性狀、規(guī)格，可將亳白芍按4 個(gè)等級(jí)（1～4 級(jí)）進(jìn)行分類(lèi)。本研究采用高效液相色譜法對(duì)4 個(gè)等級(jí)的亳白芍藥材與飲片進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)合理化指標(biāo)與薄層鑒別對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，對(duì)合理規(guī)范亳白芍藥材及飲片的生產(chǎn)與市場(chǎng)流通具有重要意義。

1 儀器與試藥

Waters e2695 高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司）；ATS 4 薄層色譜儀（瑞士CAMAG 公司）。所購(gòu)買(mǎi)的樣品經(jīng)國(guó)家中藥材產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（安徽）周建理教授鑒定均為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的根。芍藥苷（批號(hào)：110736-201943，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；硅膠G 板（青島海洋化工有限公司）；甲醇和乙腈均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 亳白芍藥材及飲片不同等級(jí)的劃分

參照文獻(xiàn)[2,16-17]要求并結(jié)合市場(chǎng)情況，將亳白芍藥材按中部直徑劃分不同等級(jí)，一級(jí)品＞1.5 cm，二級(jí)品1.2～1.5 cm，三級(jí)品0.8～＜1.2 cm，四級(jí)品＜0.8 cm。將亳白芍飲片按片徑劃分不同等級(jí)，一級(jí)品＞1.8 cm，二級(jí)品1.4～1.8 cm，三級(jí)品1.0～＜1.4 cm，四級(jí)品＜1.0 cm。

2.2 亳白芍藥材及飲片理化指標(biāo)分析

水分、總灰分、水溶性浸出物、二氧化硫殘留量按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）一部和四部[1,18]規(guī)定進(jìn)行測(cè)定。《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）一部[1]中規(guī)定白芍的水分不得過(guò)14.0%、總灰分不得過(guò)4.0%、二氧化硫殘留量不得過(guò)400 mg/kg、浸出物不得少于22.0%、藥材中芍藥苷含量不少于1.6%、飲片中芍藥苷含量不少于1.2%。結(jié)果表明，不同等級(jí)亳白芍藥材及飲片的理化指標(biāo)均符合規(guī)定。見(jiàn)表1～2。

表1 亳白芍藥材檢測(cè)結(jié)果

表2 亳白芍飲片檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同等級(jí)亳白芍藥材的薄層色譜鑒別

按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）一部[1]要求，取本品粉末0.5 g，加乙醇10 ml，振搖5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml 使溶解，為供試品溶液。取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成1 mg/ml 的溶液，為對(duì)照品溶液。按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）薄層色譜法（四部通則0502）[18]，吸取上述兩種溶液各10 μl，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果顯示，樣品與對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。

圖1 不同等級(jí)的亳白芍藥材薄層色譜圖

2.4 不同等級(jí)的亳白芍飲片的薄層色譜鑒別

處理方法同“2.3”項(xiàng)下。結(jié)果顯示，樣品與對(duì)照品相對(duì)應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

圖2 不同等級(jí)的亳白芍飲片薄層色譜圖

2.5 亳白芍中芍藥苷的含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm，柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μl。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇溶解制成31.19 μg/ml 的對(duì)照品溶液，濾過(guò)，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 稱(chēng)取白芍中粉約0.1 g，精密稱(chēng)定，置50 ml 量瓶中，加稀乙醇35 ml，超聲處理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與線(xiàn)性范圍考察 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品，置于量瓶中，用甲醇溶解定容，并分別逐級(jí)稀釋制備成10、20、50、100、200 μg/ml 的對(duì)照品溶液，濾過(guò)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得線(xiàn)性回歸方程：Y=9859.7X+52660，r=0.9998，表明其在10～200 μg/ml 濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.6.2 精密度試驗(yàn) 取“2.5.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）值為0.23%，表明精密度良好。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，制備方法同“2.5.3”項(xiàng)下，分別于0、2、6、10、12、24 h 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD 值為0.74%，表明該溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品6 份，按照“2.5.3”中方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD 值為0.93%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取已知含量的同一批樣品6 份，分別按50%、100%、150%的3 個(gè)水平精密加入芍藥苷。按“2.5.3”中方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均加樣回收率為100.64%，平均RSD 值為1.07%。見(jiàn)表3。表明該方法回收率較好。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.7 不同等級(jí)亳白芍藥材的含量測(cè)定

按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）一部[1]白芍含量測(cè)定項(xiàng)下方法，對(duì)不同等級(jí)亳白芍藥材進(jìn)行含量測(cè)定。按照“2.5.1”中色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明亳白芍藥材的芍藥苷含量有一定差異，其中二級(jí)品含量最高，一級(jí)品因存在嚴(yán)重硫熏現(xiàn)象，導(dǎo)致含量降低。見(jiàn)表1。

2.8 不同等級(jí)亳白芍飲片的含量測(cè)定

按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）一部[1]白芍含量測(cè)定項(xiàng)下方法，對(duì)不同等級(jí)亳白芍藥材進(jìn)行含量測(cè)定。按照“2.5.1”中色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明不同等級(jí)亳白芍飲片的芍藥苷含量差異不大，說(shuō)明不同等級(jí)亳白芍飲片可能是同一等級(jí)亳白芍藥材的不同部位加工而來(lái)，導(dǎo)致含量變化小。見(jiàn)表2。

3 討論

本研究對(duì)亳白芍的外觀性狀進(jìn)行數(shù)字量化后劃分了分級(jí)并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。不同等級(jí)亳白芍藥材浸出物與芍藥苷含量存在一定差異，而不同等級(jí)亳白芍飲片浸出物有一定差異，與芍藥苷含量沒(méi)有直接相關(guān)性，這與相關(guān)文獻(xiàn)[19-22]的內(nèi)容是一致?？赡芘c同一等級(jí)的亳白芍藥材加工后分成不同等級(jí)的飲片有關(guān)。

本研究中一級(jí)品亳白芍藥材二氧化硫殘留量較高，提示市場(chǎng)上存在硫熏現(xiàn)象。有文獻(xiàn)[23-25]提到亳白芍主成分的主要影響因素是栽培品種和采收年限，栽培品種和采收年限的不同導(dǎo)致亳白芍在生長(zhǎng)過(guò)程中淀粉等的積累不同，導(dǎo)致含量有所差異。目前存在不同栽培品種混種的現(xiàn)象，而且有種植2～3 年就采收藥材加工后進(jìn)入市場(chǎng)。因此，栽培品種、采收年限和硫磺熏制等問(wèn)題也會(huì)造成亳白芍的等級(jí)與樣品中有效成分含量存在差異。

本研究亳白芍藥材及飲片的樣本量較少，而亳白芍化學(xué)成分復(fù)雜，因此不免存在一定的局限性。今后應(yīng)從多指標(biāo)成分含量測(cè)定、體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)等多方面結(jié)合起來(lái)進(jìn)一步研究。