丁振中 張超 龔勁松 方祥

摘要：我國經(jīng)濟發(fā)展推動人們經(jīng)濟收入水平的提高，進而提升生活品質需求。作為與人們人體健康相關的藥品，自然也成為人們重點的關注內容。本文以該內容為切入點，使用分光光度法對藥品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽測定，無論是精密度還是重復性，其RSD均符合要求。該方法操作簡便，結果穩(wěn)定且可靠，可以用于實際測定作業(yè)，旨在為我國藥品測定貢獻力量。

關鍵詞：分光光度法;藥品測定;D-氨基葡萄糖鹽酸鹽

【中圖分類號】R97 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2021）06-117-01

前言：D-氨基葡萄糖鹽酸鹽，是通過鹽酸處理甲殼素，完成降解作業(yè)的還原糖，可以在攝入后于胃部將其從化合態(tài)轉化為游離態(tài)，通過被腸道吸收提供人體養(yǎng)分。而我國多將氨基葡萄糖申報成藥物，而甲殼素則申報成保健食品，又因為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽可以對關節(jié)功能起到良好效果，所以測定其在藥品中含量則是成為我國藥物研究重點內容。

1儀器與藥品

1.1儀器

本試驗涉及到三種儀器，分別是由天津市德安特傳感技術有限公司生產(chǎn)的高精度電子天平，試驗精度可控制在十萬分之一;由Multiskan Sky生產(chǎn)的紫外分光光度計;由江蘇天翎儀器有限公司生產(chǎn)的恒溫水浴鍋。

1.2藥品

本文使用分析純主要有透明液體的乙酰丙酮（C5H8O2）、淡白色粉末對二甲氨基苯甲醛（C9H11NO）、白色碳酸鈉（Na2CO3）、無色清澈液體鹽酸（HCL）、無色無醛乙醇均設置成;為避免發(fā)生其他干擾因素影響試驗結果，本文使用水均為超純水[1]。

稱取2毫升的乙酰丙酮，向其加入每升0.5摩爾的碳酸鈉溶液，將液體增加到50毫升，充分搖勻混合，制成乙酰丙酮試液。因為其會產(chǎn)生化學反應，所以僅在臨使用前完成配置即可。

稱取0.8克對二甲氨基苯甲醛，將其置入容量瓶中，并加入15毫升的無醛乙醇與鹽酸，充分搖勻混合，制成對二甲氨基苯甲醛試液。

D-鹽酸氨基葡萄糖對照品則要選擇由中國食品藥品檢定研究院認可產(chǎn)品，生產(chǎn)批號為140649-201505。

應用電子天平稱取已被105攝氏度高溫充分干燥至恒重，D-鹽酸氨基葡萄糖對照品10.13毫克，將其放置在10毫升規(guī)格容量瓶中，將超純水注入其中，并定容至刻度，將溶液充分搖勻后，作為儲備液備用。在使用時則量取1毫升儲備液，并將超純水注入其中，定容至10毫升，保證其濃度是每毫升101.3微克，即本試驗使用的對照品溶液[2]。

樣品則由某醫(yī)藥企業(yè)提供，現(xiàn)將編號分別設為1、2、3。

2供試品溶液

2.1提取

采用電子天平稱取已經(jīng)提前充分混合0.07克供試品，并將其放置在100毫升量瓶中，向其加入超純水，將樣本充分溶解后，向量瓶注入超純水，充分稀釋，并保持刻度位置，充分搖勻，無固體物質后濾過[3]。量取1毫升濾液，將其置于10毫升量瓶內，再次加入超純水，在稀釋至刻度搖勻，制成供試品溶液。

2.2測定

量取3毫升供試品溶液，將其分別在25毫升帶有橡膠軟塞的比色管內，向其補加超純水到5毫升，并將其加入1毫升乙酰丙酮，充分搖勻后放置于沸水浴，保持25分鐘恒溫加熱，從沸水中取出，直接將其放入冰水，讓試液充分冷卻，再向其加入3毫升的無醛乙醇后，在60攝氏度水浴條件，保溫時間控制在10分鐘，再向溶液中滴入1毫升二甲氨基苯甲醛試液，充分、劇烈完成振搖，再次放回60攝氏度的水浴條件，保溫時間控制在60分鐘，將其自然冷卻到室溫。使用紫外分光光度計，針對525納米波長完成測定，而對照組選擇空白試劑，使用1厘米比色皿對供試品溶液的吸光度值進行測定。

3實驗方法和結論

3.1線性關系

以0.2毫升為區(qū)間，從0至1.2毫升分別設置7個區(qū)間，將對照品溶液精準量取，并使用帶有橡膠軟塞比色管作為存放儀器，加入超純水到5毫升。使用紫外分光光度計，對525納米波長完成測定，而對照組選擇空白試劑。將D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的質量作為橫坐標，單位為微克，將吸光度以納米為單位設置縱坐標，以數(shù)據(jù)為標準，將標準曲線進行描繪，觀察其變化情況。而回歸方程則要設定成，相關系數(shù)設為0.9991。通過觀察曲線與分析結果，可以發(fā)現(xiàn)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽均處于20.27微克至121.57微克范圍內，線性關系保持良好狀態(tài)。

3.2重復性試驗

重復性實際結果，會因為被測對象存在不穩(wěn)定特點，造成實際結果產(chǎn)生影響。選擇批號相同，并完成事前混合供試品，精密稱取6份0.07克的內容物，將其放置于100毫升容量瓶內。在經(jīng)過嚴密計算后，獲得D-氨基葡萄糖鹽酸鹽相關數(shù)據(jù)，其平均含量為每100克供試品有33.4克純物質，而RSD（相對標準偏差）則是0.90%。通過研究結果，可以證明使用該方法測定含量具有較好重復性。

3.3加標回收率

加標回收率，即將標準物質加入樣品中，并以樣品相關處理步驟，將獲得結果和理論數(shù)值進行比較的一種方法。而使用分光光度法時，會使用校準曲線：

獲得公式變形：

而使用物質量對加標回收率完成計算，則需要將其進一步變形成：

其中：與分別是加標試樣與原始試樣實際吸光度，而則是曲線斜率。而應用公式（4）具有前提條件，即， 是空白對照組吸光度，而是曲線截距。在時，則要應用公式（3）完成加標回收率， 避免出現(xiàn)回收率過大，造成正誤差影響實際數(shù)據(jù)。

選擇批號相同，并完成事前混合供試品，精密稱取9份0.035克的內容物，分別制成低中高（0.07克樣品含有80%、100%、120%純物質）三個檔次加標試驗，每個檔次需要3份樣品，并將其加入適量D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的對照品，分析對實際回收率。

整理試驗結果，低濃度回收率在102.8%至103.7%之間波動，平均回收率可達103.4%，RSD為0.48%;中濃度回收率在102.6%至103.8%之間波動，平均回收率可達103.1%，RSD為0.61%;高濃度回收率在100.6%至102.5%之間波動，平均回收率可達101.7%，RSD為1.1%。應用該方法在回收率方面具有較好表現(xiàn)。

3.4檢出限

以GB/T 5009.1-2003《食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分總則》為標準，檢出限需要設置成空白值的三倍條件，將其作為標準偏差使用，同時要針對檢出限完成二十次以上的測定，而吸光法則以IUPAC相關規(guī)定進行測試[6]。使用濃度對檢出限進行表示，從而借助特定步驟完成最低濃度檢測。其表達式為：

其中：是對照組平均值，為針對校準曲線處于低濃度斜率，則為對照組標準偏差，而則是置信濃度常數(shù)，通常情況下取3作為計算標準，而在高斯分布中，為3則是99.6%。整理數(shù)據(jù)后，可以發(fā)現(xiàn)20次吸光度從0.000至0.011范圍內波動，為0.00342，為0.00706，檢出限則為1.5微克。

3.5精密度

作為準確度的先行條件，精密度并沒有與準確度有直接關系，后者是保證前者數(shù)據(jù)良好先決條件。即后者數(shù)據(jù)不佳，前者質量也會下降，而后者數(shù)據(jù)良好，前者質量并能與其擁有線性關系。出現(xiàn)這種情況，代表測定并沒有太大隨機誤差，但卻擁有可能具有嚴重影響數(shù)據(jù)的系統(tǒng)誤差。

選擇標準曲線的第四顯色點溶液，以上文提到方法采用連續(xù)6次，對吸光度完成測定計算，可以計算溶液具有0.512平均吸光度，0.10%RSD，該試驗擁有較好精密度。

3.6樣品含量

對于三批供試品充分混合，并稱取0.07克內容物，將其放置在100毫量瓶內，供試品溶液相關制備要求嚴格落實操作，并對計算樣品的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽計算含量。編號1每100克樣品平均含量為33.4，編號2每100克樣品平均含量為33.5，編號1每100克樣品平均含量為33.3。

經(jīng)過如上試驗，從結果分析，使用分光光度法，對于藥品D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量測定具有良好效果。

結論：D-氨基葡萄糖鹽酸鹽當前應用檢測方法較多，但是醫(yī)學界都在積極尋求可以具備良好適用性，使用便利且結果準確的高效分析法。本文提出分光光度法，雖然擁有設備使用簡單、檢測成本投入較低等特點，但是卻也存在時間控制較為嚴格、需要較強溫度控制嚴苛試驗條件。在未來應用中仍需要積極研究新型測定方法，或在現(xiàn)有基礎上改進升級，推動我國醫(yī)藥檢測更進一步。

參考文獻：

[1]蔡澤宇，石駿，楊政芳，等.HPLC-ELSD法測定氨糖軟骨素中硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖的含量[J].中南藥學，2019，17;167（12）：136-139.

[2]駱治瓊.滴定分析法和分光光度法測定保健食品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量[J].化工設計通訊，2019，045（007）：111-112.

[3]宮艷艷，錢亮亮.高效液相色譜-蒸發(fā)光法測定保健品中鹽酸氨基葡萄糖的含量[J].食品安全質量檢測學報，2019，10（05）：1336-1340.